一種氰根離子的快速檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種氰根離子的快速檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)DNA?銅納米顆粒(DNA?CuNPs)與熒光染料分子光學(xué)相互作用的研究，我們發(fā)現(xiàn)CuNPs能夠高效熄滅DNA嵌入性染料EBMVC?B的熒光，并且CuNPs能夠被氰根離子(CN?)快速刻蝕，實(shí)現(xiàn)熒光恢復(fù)，該過(guò)程可以在幾秒鐘內(nèi)完成；實(shí)現(xiàn)氰根離子的快速熒光分析檢測(cè)。結(jié)果表明，該方法具有專(zhuān)一性高，靈敏度好，操作簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)；特別是檢測(cè)速度快，可以克服由于CN?半衰期短、而復(fù)雜前處理過(guò)程或長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間帶來(lái)的誤差；實(shí)現(xiàn)了實(shí)際水樣中CN?的檢測(cè)和可食性植物組織中CN?的熒光成像分析。因此，該發(fā)明方法具有原始創(chuàng)新性、良好的社會(huì)價(jià)值和應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種氰根離子的快速檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于納米技術(shù)和分析檢測(cè)領(lǐng)域，涉及基于DNA-銅納米顆粒的納米復(fù)合探針 的構(gòu)建及利用其檢測(cè)分析氰根離子的新方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氰根離子是一種劇毒陰離子，致命性強(qiáng)。因其以不同的形式廣泛存在于人類(lèi)的生 產(chǎn)生活中，如上千種植物甚至是農(nóng)作物中，工業(yè)廢水等。不僅如此，含氰根離子復(fù)合物多處 在復(fù)雜環(huán)境中，如木薯中的亞麻仁苦苷，經(jīng)胃酸水解后生成游離的氫氰酸，產(chǎn)生毒性。若發(fā) 生氰根離子中毒，癥狀輕者惡心，嘔吐，腹瀉、頭暈，嚴(yán)重者呼吸困難、心跳加快、瞳孔散大， 以至昏迷，最后抽搐、休克，因呼吸衰竭而死亡。還可引起甲狀腺腫、脂肪肝以及對(duì)視神經(jīng)和 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的損害等慢性病變。氰根離子半衰期短，復(fù)雜的前處理或長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間會(huì)導(dǎo)致分 析誤差，因而實(shí)時(shí)快速地檢測(cè)氰根離子尤為重要。
[0003] DNA-銅納米顆粒(DNA-CuNPs)作為一種新興的納米材料，其性質(zhì)與應(yīng)用研究成為 又一個(gè)研究熱點(diǎn)。DNA-CuNPs合成簡(jiǎn)單，在常溫常壓下即可完成;合成速度快，僅需幾分鐘反 應(yīng)時(shí)間；操作簡(jiǎn)單，只需要對(duì)銅離子和還原劑簡(jiǎn)單混和，無(wú)需劇烈攪拌或其它處理;相對(duì)與 其它重金屬納米材料，DNA-CuNPs具有低毒、"綠色"環(huán)保等優(yōu)勢(shì)，在生化分析應(yīng)用中展現(xiàn)出 很好的潛力。
[0004] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)DNA-CuNPs與熒光染料分子光學(xué)作用的研究，我們發(fā)現(xiàn)CuNPs能夠高 效熄滅DNA嵌入性染料EBMVC-B的熒光，并且CuNPs能夠被氰根離子(CPO快速刻蝕，實(shí)現(xiàn)熒 光恢復(fù)，該過(guò)程可以在幾秒鐘內(nèi)完成;其信號(hào)轉(zhuǎn)換具有高度的poly (AT/TA)的雙鏈DNA序列 依賴(lài)性?；诖?，本發(fā)明提出了一種CPT的快速檢測(cè)方法，以poly (AT/TA)的雙鏈DNA序列為 模板，并嵌入EBMVC-B和原位合成CuNPs，在CN-作用下，熒光快速產(chǎn)生。結(jié)果表明，該方法具 有專(zhuān)一性高，靈敏度好，操作簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)；特別是檢測(cè)速度快，可以克服由于C『 半衰期短、而復(fù)雜前處理過(guò)程或長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間帶來(lái)的誤差;實(shí)現(xiàn)了實(shí)際水樣中err的檢測(cè)和可 食性植物組織中的熒光成像分析。因此，該發(fā)明方法具有原始創(chuàng)新性、良好的社會(huì)價(jià)值 和應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服半衰期短、而復(fù)雜前處理過(guò)程或長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間帶來(lái)的誤 差，結(jié)合DNA-CuNPs的合成與性能優(yōu)勢(shì)，構(gòu)建一種納米復(fù)合探針，發(fā)展一種快速的氰根離子 熒光檢測(cè)新方法。本方法用于氰根離子的檢測(cè)，具有簡(jiǎn)單方便，響應(yīng)快速，成本低廉，特異性 好等優(yōu)點(diǎn)，有良好的社會(huì)價(jià)值和應(yīng)用前景。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0007] 一種氰根離子的快速檢測(cè)方法，在雙鏈DNA序列上嵌入EBMVC-B染料、并原位合成 銅納米顆粒，熒光熄滅，構(gòu)成復(fù)合納米探針;再加入氰根離子之后，銅納米顆粒被快速刻蝕， EBMVC-B的熒光恢復(fù)，在幾秒鐘內(nèi)完成，實(shí)現(xiàn)氰根離子的快速熒光分析檢測(cè)。
[0008] 所述的檢測(cè)方法，在MOPS緩沖溶液中加入雙鏈DNA序列和EBMVC-B染料，搖晃混勻， 使EBMVC-B與DNA充分作用，嵌入到DNA上;再向上述溶液中加入銅離子溶液和還原劑抗壞血 酸鈉，銅離子在DNA上被還原，原位生成銅納米顆粒，淬滅EBMVC-B染料的熒光;最后加入待 檢測(cè)的含有氰根離子的樣品;根據(jù)熒光強(qiáng)度對(duì)err實(shí)現(xiàn)定性與定量檢測(cè)。
[0009] 所述的檢測(cè)方法，所述MOPS緩沖溶液中MOPS的濃度為5-50mM，含50-250mM氯化鈉， 所述MOPS緩沖溶液的pH值為7.5-8.5。
[0010] 所述的檢測(cè)方法，緩沖液中雙鏈DNA的濃度為50-500nM，EBMVC-B染料的濃度為 250-2500nM。所述EBMVC-B染料與雙鏈DNA序列的摩爾比例為5:1。
[0011] 所述的檢測(cè)方法，所述雙鏈DNA序列為poly(AT/TA)的雙鏈DNA序列，長(zhǎng)度為12-28 喊基。
[0012] 所述的檢測(cè)方法，所述poly (AT/TA)的雙鏈DNA的序列優(yōu)選：
[0013] 57-ATATATATATATATATATATATAT-37
[0014] 37-TATATATATATATATATATATATA-57 〇 [0015]使用時(shí)是單鏈的polyAT，自動(dòng)配對(duì)成雙鏈。
[0016] 所述的檢測(cè)方法，緩沖液中銅離子的濃度為10-200μΜ，抗壞血酸鈉的濃度為0.5-5mM〇
[0017] 所述的檢測(cè)方法，銅離子溶液為二價(jià)銅鹽溶液，包括硫酸銅溶液，氯化銅溶液，硝 酸銅溶液，醋酸銅溶液中的一種或幾種。
[0018]所述的檢測(cè)方法，待測(cè)樣品加入后，以450nm為激發(fā)光源，收集500nm-700nm的焚 光。
[0019] 所述的檢測(cè)方法，所述的方法用于檢測(cè)2.5-20μΜ氰根離子濃度范圍的樣品。
[0020] 所述EBMVC-B染料為本實(shí)驗(yàn)室合成
[0022] 本發(fā)明所述po ly (AT/TA)的雙鏈DNA序列從生工生物工程(上海)有限公司購(gòu)買(mǎi)，長(zhǎng) 度為12-28堿基。
[0023]本發(fā)明所述納米復(fù)合探針的合成過(guò)程優(yōu)選：
[0024] (1)取MOPS緩沖溶液(MOPS 10mM，氯化鈉 150mM)480yL加入到容積為1.5mL的EP管 中；
[0025] (2)將poly(AT/TA)的雙鏈DNA與EBMVC-B染料加入上述緩沖液，混合搖勻；
[0026] (3)靜置2分鐘；
[0027] (4)加入銅離子和抗壞血酸鈉，搖晃混勻后放置2分鐘。
[0028] 本發(fā)明所述的一種氰根離子的快速檢測(cè)過(guò)程優(yōu)選：
[0029] (1)在以上述方法合成納米復(fù)合探針之后，加入被檢測(cè)水樣或?qū)⒓{米復(fù)合探針加 入待分析的食物樣品中；
[0030] (2)靜置1分鐘；
[0031] (3)通過(guò)熒光分光光度計(jì)或共聚焦熒光顯微鏡進(jìn)行熒光信號(hào)采集，實(shí)現(xiàn)定性或定 量分析。
[0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于:該方法具有專(zhuān)一性高、靈敏度好、操作簡(jiǎn)便、 條件溫和、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn);特別是檢測(cè)速度快，可以克服由于err半衰期短、而復(fù)雜前處理 過(guò)程或長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間帶來(lái)的誤差;實(shí)現(xiàn)了實(shí)際水樣中Cf的檢測(cè)和可食性植物組織中Cf的熒 光成像分析。因此，該發(fā)明方法具有原始創(chuàng)新性、良好的社會(huì)價(jià)值和應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0033]圖1為本發(fā)明檢測(cè)原理不意圖；
[0034] 圖2為實(shí)施例1中不同DNA序列用于納米復(fù)合探針的構(gòu)建及對(duì)氰根離子的響應(yīng)；
[0035] 圖3為實(shí)施例2中納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的可行性分析；
[0036] 圖4為實(shí)施例3中納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的動(dòng)力學(xué)分析；
[0037] 圖5為實(shí)施例4中納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的選擇性探究；
[0038] 圖6為實(shí)施例5中納米復(fù)合探針對(duì)不同濃度氰根離子的檢測(cè)；
[0039] 圖7為實(shí)施例7中納米復(fù)合探針應(yīng)用于可食性植物組織中氰根離子檢測(cè)的熒光成 像分析。
【具體實(shí)施方式】
[0040] 以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明：本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前 提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過(guò)程，旨在易于理解本發(fā)明的技術(shù)方案特征，對(duì)本 發(fā)明的保護(hù)范圍不構(gòu)成任何限制。凡采用等同變換或者是等效替換而形成的技術(shù)方案，均 落在本發(fā)明權(quán)利保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0041] 實(shí)施例1不同DNA序列用于納米復(fù)合探針的構(gòu)建及對(duì)氰根離子的響應(yīng)
[0042] 配制制備納米復(fù)合探針?biāo)璧娜芤?將含相同長(zhǎng)度的不同DNA序列干粉加水溶解 得ΙΟμΜ的儲(chǔ)備溶液，配制50μΜ的EBMVC-B溶液，配制2mM的硫酸銅(CuS〇4)溶液，配制100mM的 抗壞血酸鈉(C 6H7Na06)溶液，配制1 OmM的MOPS緩沖液(pH=7.8)，放置4°C冰箱內(nèi)待用。
[0043] (1)取MOPS緩沖液（10mM，pH=7 · 8)480yL加入到容積為1 · 5mL的EP管中；接著加入5 yL DNA溶液（10μΜ)和5yL EBMVC-B染料溶液(50μΜ)，搖勻并靜置2分鐘;接著加入5yL的硫酸 銅溶液(2mM)和5yL的抗壞血酸鈉溶液（100mM)，搖勻，放置2分鐘;直接測(cè)量并記錄各組溶液 在激發(fā)波長(zhǎng)=450nm，發(fā)射波長(zhǎng)=550nm時(shí)的熒光強(qiáng)度值，得到不同序列的DNA對(duì)納米復(fù)合探 針的形成及熒光光譜的影響。
[0044] (2)最后加入5yL氰根離子溶液(2mM)，搖勻，直接測(cè)量并記錄各組溶液在激發(fā)波長(zhǎng) = 450nm，發(fā)射波長(zhǎng)= 550nm時(shí)的熒光強(qiáng)度值，得到不同DNA序列對(duì)納米復(fù)合探針熒光信號(hào)產(chǎn) 生的影響。信倍比為加入氰根離子后溶液的熒光值除以未加氰根離子時(shí)的熒光值，重復(fù)三 次試驗(yàn)，取平均值。
[0045] 結(jié)果分析:從圖2可以看出，在多組不同序列的DNA中，僅基于poly(AT/TA)的雙鏈 DNA序列的納米復(fù)合探針對(duì)氰根離子的檢測(cè)信倍比很高，效果很好。基于其他DNA序列的納 米復(fù)合探針對(duì)氰根離子的檢測(cè)效果均不理想。由此得出，該納米復(fù)合探針的成功構(gòu)建與信 號(hào)轉(zhuǎn)換對(duì)P〇ly(AT/TA)的雙鏈DNA序列具有高度依賴(lài)性，因此poly(AT/TA)的雙鏈DNA被篩選 為用于納米復(fù)合探針構(gòu)建的最優(yōu)序列。
[0046] 實(shí)施例2納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的可行性分析
[0047] 通過(guò)單一變量法，系統(tǒng)的考察了各反應(yīng)成分對(duì)熒光信號(hào)的影響。
[0048] (1)取MOPS緩沖液（10mM，pH=7.5)480yL加入到容積為1.5mL的EP管中；
[0049] (2)加入5yL優(yōu)選得到的雙鏈d(AT)2Q溶液（ΙΟμΜ);
[0050] (3)加入5yL的EBMVC-B染料溶液(50μΜ)，搖勻，放置2分鐘；
[00511 (4)加入5yL的硫酸銅溶液(2mM);
[0052] (5)加入5yL的抗壞血酸鈉溶液（100mM)，搖勻，放置2分鐘，抗壞血酸鈉在此發(fā)明的 附圖中被簡(jiǎn)寫(xiě)為SA。
[0053] (6)最后加入5yL的氰根離子溶液(2mM)，搖勻。
[0054]測(cè)試并分別記錄上述各步驟的熒光光譜。
[0055] 結(jié)果分析:從圖3的熒光譜圖中可以看出，同時(shí)加入d (AT) 2Q和EBMVC-B的時(shí)候，具有 明顯的熒光信號(hào)，說(shuō)明EBMVC-B染料嵌入了poly (AT/TA)的雙鏈DNA中，實(shí)現(xiàn)熒光增強(qiáng)；當(dāng)在 該熒光體系中同時(shí)引入銅離子和還原劑抗壞血酸鈉的時(shí)候，熒光快速熄滅，說(shuō)明EBMVC-B染 料熒光被原位形成的銅納米顆粒熄滅；當(dāng)繼續(xù)加入氰根離子的時(shí)候，熒光快速恢復(fù)，說(shuō)明同 納米顆粒被氰根離子快速刻蝕，使得EBMVC-B的熒光信號(hào)恢復(fù)。
[0056]實(shí)施例3納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的動(dòng)力學(xué)分析
[0057]設(shè)置熒光分光光度計(jì)參數(shù)，激發(fā)波長(zhǎng)=450nm，發(fā)射波長(zhǎng)=550nm，進(jìn)行時(shí)間掃描。
[0058] (1)取1?^緩沖液（1〇111]\^!1=7.8)48(^1^加入到容積為1.51111^細(xì)？管中，掃描10〇8-200s；
[0059] (2)接著加入5yL d(AT)2Q溶液（ΙΟμΜ)，搖勻，掃描 100s-200s;
[0060] (3)再加入5yL EBMVC-B染料溶液(50μΜ)，搖勻，掃描 100S-200S;
[00611 (4)接著加入5yL硫酸銅溶液(2mM)，搖勻，掃描100s-200s;
[0062] (5)再加入5yL抗壞血酸鈉溶液（100mM)，搖勻，掃描100s-200s;
[0063] (6)最后加入5yL氰根離子溶液(2mM)，搖勻，掃描100s-200s。
[0064]結(jié)果分析:從圖4的時(shí)間掃描結(jié)果可以看出，MOPS緩沖液本身無(wú)焚光信號(hào)；加入d (AT)2Q溶液后，無(wú)熒光信號(hào);繼續(xù)加入EBMVC-B染料時(shí)，立即產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，反應(yīng)迅速； 之后加入的抗壞血酸鈉溶液對(duì)整個(gè)溶液的熒光幾乎無(wú)影響；當(dāng)繼續(xù)加入銅離子溶液時(shí)，熒 光信號(hào)快速下降，100s左右可達(dá)到穩(wěn)定;最后加入氰根離子，熒光信號(hào)立刻恢復(fù)。由此說(shuō)明 本方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)氰根離子的快速檢測(cè)。
[0065]實(shí)施例4納米復(fù)合探針用于氰根離子檢測(cè)的選擇性探究
[0066] 取MOPS緩沖液（1〇!^，？!1 = 7.8)48(^1^加入到容積為1.51111^細(xì)?管中；接著加入541^ 的d(AT)2Q溶液（ΙΟμΜ)和5yL的EBMVC-B染料溶液(50μΜ)，搖勻并靜置2分鐘;接著加入5yL的 硫酸銅溶液(2mM)和5yL的抗壞血酸鈉溶液（100mM)，搖勻，放置2分鐘；最后加入5yL不同的 陰離子溶液(2mM)，使得各種陰離子的濃度為20μΜ，同時(shí)，增加一空白組，只加入5yL MOPS緩 沖溶液，搖勻，測(cè)量并記錄各組溶液在激發(fā)波長(zhǎng)= 450nm，發(fā)射波長(zhǎng)= 550nm時(shí)的熒光強(qiáng)度 值，得到各種陰離子對(duì)納米復(fù)合探針熒光信號(hào)的影響。信倍比為加入各種陰離子后溶液的 熒光值除以空白組的熒光值，重復(fù)三次試驗(yàn)，取平均值。
[0067] 結(jié)果分析:從圖5可以看出，從&到〇分別代表離子CN-，F(xiàn)-，C1-，Br-，Γ，SCN-，H2P〇4-， HP〇42-，C〇32-，HC〇3-，S〇42-，Cl〇4-，S 2-，N〇3-，CH3C00-，只有氰根離子的加入才會(huì)引起納米復(fù)合 探針熒光信號(hào)的顯著恢復(fù)，其它對(duì)照離子不存在干擾。說(shuō)明該納米復(fù)合探針對(duì)氰根離子檢 測(cè)具有很好的選擇性。
[0068]實(shí)施例5納米復(fù)合探針對(duì)不同濃度氰根離子的檢測(cè)
[0069] 取MOPS緩沖液（1〇!^，？!1 = 7.8)48(^1^加入到容積為1.51111^細(xì)?管中；接著加入541^ 的d(AT)2Q溶液（10μΜ)和5yL的EBMVC-B染料溶液(50μΜ)，搖勻并靜置2分鐘;接著加入5yL的 硫酸銅溶液(2mM)和5yL的抗壞血酸鈉溶液（100mM)，搖勻，放置2分鐘；最后加入5yL不同濃 度的氰根離子離子溶液，搖勻，測(cè)試并分別記錄其熒光光譜，得到不同濃度氰根離子的加入 對(duì)焚光的恢復(fù)情況。
[0070]結(jié)果分析:從圖6A的熒光譜圖中可以看出，隨著氰根離子濃度的增大，550nm處熒 光峰的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明熒光強(qiáng)度跟氰根離子濃度呈正相關(guān)。從圖6A可以得出，該納米復(fù) 合探針對(duì)氰根離子檢測(cè)在2.5-20μΜ濃度范圍具有較好的線性關(guān)系。
[0071 ]實(shí)施例6納米復(fù)合探針應(yīng)用于實(shí)際水樣的分析結(jié)果
[0072]實(shí)際水樣取自河水，湖水，自來(lái)水，用不同濃度的氰根離子進(jìn)行人為污染，制備成 被污染的試劑水樣。按照實(shí)施例5所涉及步驟制備納米復(fù)合探針，加入不同濃度氰根離子污 染的水樣，檢測(cè)熒光信號(hào)，重復(fù)三次，取平均值，計(jì)算回收率。
[0073]結(jié)果分析：從表1的回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出，針對(duì)各水樣檢測(cè)的回收率分布在 90%-110%，并且具有較小的偏差，說(shuō)明該方法可用于試劑水樣中氰根離子的快速檢測(cè)分 析。
[0074]表1為實(shí)施例6中納米復(fù)合探針應(yīng)用于實(shí)際水樣的分析結(jié)果

[0077]實(shí)施例7納米復(fù)合探針應(yīng)用于可食性植物組織中氰根離子檢測(cè)的熒光成像分析 [0078] (1)制備納米復(fù)合探針：在170yL MOPS緩沖液（10mM，pH = 7.8)中，加入8yL的d (AT)2Q溶液α〇μΜ)和10yL的EBMVC-B染料溶液（50μΜ)，搖勾；接著加入8yL的硫酸銅溶液 (2mM)和8yL的抗壞血酸鈉溶液(100mM)，搖勻。
[0079] (2)選取三種可食性植物組織樣品，紅薯，馬鈴薯和木薯，分別切成約0.2_薄片。
[0080] (3)在三種樣品上各滴加60yL新制備的納米復(fù)合探針，于共聚焦顯微鏡下觀測(cè)，設(shè) 置激發(fā)光源為488nm，成像分析。
[0081] 結(jié)果分析分析:從圖7可以看出，木薯組織在加入納米復(fù)合探針后可觀察到明顯的 熒光信號(hào)，這與木薯組織在被破壞時(shí)產(chǎn)生較高濃度氰根離子的事實(shí)相符。而紅薯及馬鈴薯 組織在相同實(shí)驗(yàn)條件下，無(wú)熒光信號(hào)。說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)可以應(yīng)用于食物中氰根離子快速檢測(cè)分 析，操作簡(jiǎn)單。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氰根離子的快速檢測(cè)方法，其特征在于，在雙鏈DNA序列上嵌入EBMVC-B染料、并 原位合成銅納米顆粒，熒光熄滅，構(gòu)成復(fù)合納米探針;在加入氰根離子之后，銅納米顆粒被 快速刻蝕，EBMVC-B的熒光恢復(fù)，在幾秒鐘內(nèi)完成，實(shí)現(xiàn)氰根離子的快速熒光分析檢測(cè)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，在MOPS緩沖溶液中加入雙鏈DNA序列 和EBMVC-B染料，搖晃混勻，使EBMVC-B與DNA充分作用，嵌入到DNA上;再向上述溶液中加入 銅離子溶液和還原劑抗壞血酸鈉，銅離子在DNA上被還原，原位生成銅納米顆粒，淬滅 EBMVC-B染料的熒光;最后加入待檢測(cè)的含有氰根離子的樣品；根據(jù)熒光強(qiáng)度對(duì)CK實(shí)現(xiàn)定 性與定量檢測(cè)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述MOPS緩沖溶液中MOPS濃度為5-50mM，含50-250mM氯化鈉，所述MOPS緩沖溶液的pH值為7.5-8.5。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于，緩沖液中雙鏈DNA的濃度為50-500nM， EBMVC-B染料的濃度為250-2500nM;所述EBMVC-B染料與雙鏈DNA序列的摩爾比例為5:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙鏈DNA序列為poly (AT/TA)的雙鏈DNA序列，長(zhǎng)度為12-28堿基。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述poly(AT/TA)的雙鏈DNA的序列： 57-ATATATATATATATATATATATAT-37 37-TATATATATATATATATATATATA-57 〇7. 根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，緩沖液中銅離子的濃度為10-200μΜ，抗壞血酸鈉的濃度為0.5-5mM。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，銅離子溶液為二價(jià)銅鹽溶 液，包括硫酸銅溶液，氯化銅溶液，硝酸銅溶液，醋酸銅溶液中的一種或幾種。9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，待測(cè)樣品加入后，以450nm 為激發(fā)光源，收集500nm-700nm的熒光。10. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的方法用于檢測(cè)2.5-20μΜ氰根離子濃度范圍的樣品。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK106092993SQ201610552529
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月14日
【發(fā)明人】楊榮華, 卿志和, 侯麗娜, 朱櫟璇, 楊盛
【申請(qǐng)人】長(zhǎng)沙理工大學(xué)