布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法與應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法與應(yīng)用，該方法把質(zhì)量控制圖用于試管凝集實(shí)驗(yàn)，是一種探索和創(chuàng)新，將光密度值作為控制值獲得了實(shí)驗(yàn)控制的對(duì)象，為動(dòng)物檢疫領(lǐng)域過(guò)程控制提供了一種新的統(tǒng)計(jì)學(xué)手段，具有參考意義。另外，質(zhì)量控制圖在應(yīng)用過(guò)程中，可以隨著實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的積累，隨時(shí)調(diào)整優(yōu)化，以提高質(zhì)量控制圖的精確性和控制力。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及動(dòng)物檢疫領(lǐng)域，更具體地，涉及布氏桿菌病的檢驗(yàn)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 布魯氏菌是一種革蘭氏陰性球桿菌。根據(jù)對(duì)不同動(dòng)物感染性的不同，布魯氏菌分 為六種，17個(gè)生物型。布魯氏菌病(簡(jiǎn)稱(chēng)布病)是由布魯氏菌傳染引起的人畜共患病。牛、羊、 豬等動(dòng)物最易感染，引起母畜流產(chǎn)、乳腺炎、不育和各種組織(如睪丸、關(guān)節(jié))的炎癥。各類(lèi)人 群接觸帶菌動(dòng)物或食用病畜及其乳制品，均易感。患者通常呈重感冒癥狀，男性患者常見(jiàn)睪 丸炎及附睪炎，女性患者常伴有卵巢炎、子宮內(nèi)膜炎及乳房腫痛。布病在全球范圍內(nèi)流行， 對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成極大危害。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類(lèi)重要傳染病，我國(guó)傳染病防治法 將其列為乙類(lèi)傳染病。
[0003]血清學(xué)試管凝集診斷是布病最常用的檢疫技術(shù)之一。布氏桿菌試管凝集實(shí)驗(yàn)是依 靠肉眼將樣品管與參照比濁管進(jìn)行比濁來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的定性實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的要求很 高，容易受到人主觀影響。通常開(kāi)展該項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)室只能通過(guò)參加能力驗(yàn)證、測(cè)量審核、實(shí) 驗(yàn)室間比對(duì)等外部質(zhì)量控制和留樣再測(cè)、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人員比對(duì)等內(nèi)部質(zhì)量控制方法來(lái)監(jiān)控實(shí) 驗(yàn)室開(kāi)展該項(xiàng)目的能力。但是，均無(wú)法對(duì)每次日常檢測(cè)進(jìn)行連續(xù)性的監(jiān)控。對(duì)異常檢測(cè)結(jié)果 不能做到預(yù)先判斷、及時(shí)發(fā)現(xiàn)、積極糾正。CNAS-CL01:2006的5.9條款中指出"實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有質(zhì) 量控制程序以監(jiān)控檢測(cè)和校準(zhǔn)的有效性。所得數(shù)據(jù)的記錄方式應(yīng)便于可發(fā)現(xiàn)其發(fā)展趨勢(shì)， 如可行，應(yīng)采用統(tǒng)計(jì)技術(shù)對(duì)結(jié)果進(jìn)行審查"。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)技術(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的質(zhì) 量進(jìn)行過(guò)程控制，及時(shí)發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的異常和存在的變化趨勢(shì)，起到預(yù)警作用。
[0004] 質(zhì)量控制圖是對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行過(guò)程控制的最常用的統(tǒng)計(jì)工具。質(zhì)量控制圖多應(yīng)用 于分析化學(xué)檢測(cè)和衛(wèi)生檢疫領(lǐng)域，而在動(dòng)物檢疫領(lǐng)域，尤其是試管凝集實(shí)驗(yàn)中，國(guó)內(nèi)外未見(jiàn) 到相關(guān)報(bào)道。因此，建立動(dòng)物布病質(zhì)量控制圖，對(duì)布病日常實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行持續(xù)的控 制，可以為動(dòng)物檢疫領(lǐng)域質(zhì)量控制工作提供參考。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于提供一種布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控 制圖的建立方法。
[0006] 本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于提供一種布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控 制圖的應(yīng)用。
[0007] 為解決第一個(gè)技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0008] -種布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法，其包括如下步驟：
[0009 ] 1)制備控制濃度的布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品；將布氏桿菌病試管凝 集抗原配制到工作濃度;按照《GB/T18646-2002動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》附錄E的要求配 置參照比濁管；
[0010] 2)按照GB/T18646-2002第4法中規(guī)定的時(shí)間和溫度，在比濁用試管中進(jìn)行布氏桿 菌病試管凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和工作濃度的布氏桿菌病試管凝集抗原的反應(yīng)；
[0011] 3)使用比濁儀讀取并記錄步驟2)的0D值；
[0012] 4)在不同時(shí)間重復(fù)步驟2和步驟3，n次(n彡20);
[0013] 5)當(dāng)樣本量在20<n<30時(shí)，在未知標(biāo)準(zhǔn)差情形且限定檢出離群值的個(gè)數(shù)大于1的 情況下，使用狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值，選取最后20組數(shù)據(jù)繪制質(zhì)量控制圖；其中n 組數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制圖包括中心線(CL)、上警戒限(UWL)、下警戒限（LWL)、上控制限(UCL)和 下控制限(LCL);其中所述中心線(CL)為平均數(shù)U);所述上警戒限(UWL)為平均數(shù)加2倍標(biāo) 準(zhǔn)差〇+2s);所述下警戒限(LWL)為平均數(shù)減2倍標(biāo)準(zhǔn)差〇2s);所述上控制限(UCL)為平均 數(shù)加3倍標(biāo)準(zhǔn)差〇+3s);所述下控制限(LCL)為平均數(shù)減3倍標(biāo)準(zhǔn)差（i~3s );
[0014] 6)分析質(zhì)量控制圖的有效性。
[0015] 所述質(zhì)量控制圖的有效性分析方法如下:檢查n個(gè)數(shù)據(jù)，確認(rèn):①?zèng)]有落在3倍標(biāo)準(zhǔn) 差外的失控值;②沒(méi)有連續(xù)9點(diǎn)在中心線的同側(cè);③沒(méi)有連續(xù)6個(gè)點(diǎn)遞增或遞減;④沒(méi)有連續(xù) 14個(gè)相鄰點(diǎn)上下交替;⑤沒(méi)有連續(xù)3點(diǎn)中的2點(diǎn)落在中心線同側(cè)的2倍標(biāo)準(zhǔn)差外;⑥沒(méi)有連續(xù) 5個(gè)點(diǎn)中的4個(gè)點(diǎn)落在中心線同側(cè)的一倍標(biāo)準(zhǔn)差外;⑦沒(méi)有連續(xù)15個(gè)點(diǎn)落在中心線兩側(cè)的1 倍標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)；⑧沒(méi)有連續(xù)8點(diǎn)落在中心線兩側(cè)但沒(méi)有一點(diǎn)在1倍標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)。
[0016]優(yōu)選地，所述控制濃度的布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品為1.667IU/m L， 該控制濃度為布氏桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)血清凝集效價(jià)濃度。
[0017] 所述質(zhì)量控制圖在布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用，具體地，按照所述建立方 法建立的質(zhì)量控制圖，再按照權(quán)利要求1所述建立方法中的步驟1)~3)測(cè)量樣品的0D值，將 所測(cè)得的0D值與上述建立方法建立的質(zhì)量控制圖進(jìn)行對(duì)比；當(dāng)所測(cè)得的0D值在UWL和LWL之 間時(shí)，表示實(shí)驗(yàn)過(guò)程受控;當(dāng)所測(cè)得的0D值不在UWL和LWL之間時(shí)，表示實(shí)驗(yàn)過(guò)程不受控。
[0018] 若實(shí)驗(yàn)過(guò)程不受控，則立即查出異常原因，剔除異常，重復(fù)步驟1、2和3,直到結(jié)果 在UWL和LWL之間。
[0019] 所述的應(yīng)用可進(jìn)一步包括將所測(cè)得的0D值會(huì)制成控制用控制圖。
[0020] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0021] 本發(fā)明提供了對(duì)布氏桿菌試管凝集試驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法。首先，把質(zhì)量控 制圖用于試管凝集實(shí)驗(yàn)是一種探索和創(chuàng)新，將光密度值作為控制值獲得了實(shí)驗(yàn)控制的對(duì) 象，為動(dòng)物檢疫領(lǐng)域過(guò)程控制提供了 一種新的統(tǒng)計(jì)學(xué)手段，具有參考意義。其次，質(zhì)量控制 圖在應(yīng)用過(guò)程中，可以隨著實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的積累，隨時(shí)調(diào)整優(yōu)化，以提高質(zhì)量控制圖的精確性和 控制力。
【附圖說(shuō)明】
[0022]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0023]圖1示出Exce 1繪制出的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清0D值質(zhì)量控制圖。
[0024]圖2示出Excel繪制出的日常實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清0D值控制用控制圖。
[0025] 圖3示出Excel繪制出的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清0D值質(zhì)量控制圖。
[0026] 圖4示出Excel繪制出的不同實(shí)驗(yàn)條件下標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清0D值控制用控制圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō) 明。附圖中相似的部件以相同的附圖標(biāo)記進(jìn)行表示。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體 描述的內(nèi)容是說(shuō)明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0028] 實(shí)驗(yàn)材料
[0029]布魯氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)抗原:購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，201501批；
[0030]布魯氏桿菌病陽(yáng)性血清國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品:購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，2006批；
[0031]布魯氏桿菌病陰性血清國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品：購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，201401批；
[0032] lOOOyL 移液槍?zhuān)嘿?gòu)自 eppendorf;
[0033] 培養(yǎng)箱:購(gòu)自3M;
[0034] 濁度儀:購(gòu)自VITEK;
[0035]比濁用試管：購(gòu)自VITEK。
[0036]選取效價(jià)濃度為1.667IU/mL的布氏桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)血清凝集作為布氏桿菌病試管 凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品的控制濃度。
[0037]實(shí)施例1:布氏桿菌質(zhì)量控制圖的建立
[0038] 1 ?實(shí)驗(yàn)方法
[0039] 1)供判定參照比濁管的配置
[0040] 供判定參照比濁管按照《GB/T18646-2002動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》附錄E的要求 配置。
[0041 ] 2)試劑符合性實(shí)驗(yàn)
[0042]購(gòu)買(mǎi)的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清注明在1:2400稀釋時(shí)出現(xiàn)++。將標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清凍干粉溶于 lmL蒸餾水復(fù)原。將lmL標(biāo)準(zhǔn)血清(4000IU/mL)，加入到36.5mL石碳酸生理鹽水中，稀釋成1: 37 ? 5的溶液，再梯度稀釋為1:75，1:150，1:300，1:600，1:1200，1:2400，1:4800，1:9600，1: 19200的溶液。按照抗原說(shuō)明書(shū)將抗原稀釋成1: 20的工作液。將抗原工作液加入到上述梯度 稀釋的溶液中，加入等體積抗原后，血清稀釋度為1: 75，1:150，1: 300，1:600，1:1200，1: 2400，1:4800，1:9600，1:19200，1:38400。將上述加入了抗原的血清梯度稀釋液置于37 °C溫 箱，孵育20h后與參照比濁管比濁。如果在1:2400抗原稀釋液中出現(xiàn)++，則證明購(gòu)買(mǎi)的試劑 的質(zhì)量符合要求。
[0043]稀釋成1:2400的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清即為1.667IU/mL的控制濃度的布氏桿菌病試管凝 集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品。
[0044] 3)日常血清凝集實(shí)驗(yàn)和結(jié)果判定。
[0045]日常血清凝集實(shí)驗(yàn)和結(jié)果判定按照《GB/T18646-2002動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》 "4動(dòng)物布病試管凝集試驗(yàn)"的要求進(jìn)行。在試管凝集實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)后，將1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性 血清的上清液加入到VITEK比濁用試管中，使用VITEK配套比濁儀讀取并記錄其0D值。
[0046]凝集反應(yīng)發(fā)生于試管底部
[0047] 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0048] 1)試劑符合性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0049] 通過(guò)肉眼將標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)性血清與參照比濁管進(jìn)行比較，在標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1:2400稀釋 時(shí)，顯示++。同時(shí)使用比濁儀讀取所有上清液的0D值，見(jiàn)表1和表2,可見(jiàn)看到，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清 1:2400稀釋的0D值，在參照比濁管++管0D值得范圍內(nèi)?？梢?jiàn)，所購(gòu)買(mǎi)的試劑質(zhì)量是符合要求 的。
[0050] 表1:標(biāo)準(zhǔn)血清各稀釋度0D值
[0052]表2:參照比濁管各梯度0D值
[0054] 2)數(shù)據(jù)收集與離群值的剔除
[0055] 當(dāng)開(kāi)始建立質(zhì)量控制圖時(shí)，如果收集的數(shù)據(jù)處于失控狀態(tài)，那么依據(jù)這樣的數(shù)據(jù) 計(jì)算出的標(biāo)準(zhǔn)差過(guò)大，相應(yīng)的導(dǎo)致控制限過(guò)大，就會(huì)出現(xiàn)漏檢失控值的情況。依時(shí)間順序收 集1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清試管凝集實(shí)驗(yàn)后的上清液0D值至少20組以上。當(dāng)樣本量在20 <n<30時(shí)，在未知標(biāo)準(zhǔn)差情形且限定檢出離群值的個(gè)數(shù)大于1的情況下，使用狄克遜 (Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值，選取最后20組數(shù)據(jù)繪制控制圖標(biāo)。
[0056] 在建立布病質(zhì)量控制圖的初期，收集了 25個(gè)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液 的0D值（見(jiàn)表3)，通過(guò)肉眼將標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)性血清與參照比濁管進(jìn)行比較，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清在1: 2400稀釋時(shí)均顯不++。
[0057] 表3:標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清在1:2400稀釋度(++)時(shí)的0D值
[0060] 樣本量n = 25,符合20<n<30,故檢測(cè)高端離群值使用
統(tǒng)計(jì)量的值D25 = 0.66,而檢測(cè)低端離群值使用
計(jì)算統(tǒng)計(jì)量的值D25' = 0? I4。當(dāng)檢測(cè)水平a=0? 〇5時(shí)，臨界值備、貓{:2S)=0.441。因?yàn)椋?5，.〇熱> %.裕（25》， 判定1(25)為離群值。當(dāng)剔除水平〇 = 0.01時(shí)，臨界彳|1丨.卷8^?(_25)=0.51811因?yàn)椋?5>〇 /25， >氣，妙.（雖》，判定x(25)為統(tǒng)計(jì)離群值，應(yīng)予以剔除。
[0061 ]剔除異常值后還剩余24個(gè)值，繼續(xù)使用狄克遜(Di xon)檢驗(yàn)法，對(duì)剩余的24個(gè)值進(jìn) 行判定，結(jié)果DsaUSD'24 = 〇.2，馬4. < = H..449所以在檢測(cè)水平a = 〇.〇5 時(shí)，不能繼續(xù)檢出離群值。
[0062] 3)質(zhì)量控制圖的建立
[0063]將前期收集的25組數(shù)據(jù)運(yùn)用狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值后，按時(shí)間順序，選 取最后20組數(shù)據(jù)，繪制質(zhì)量控制圖。
[0064] 這20組數(shù)據(jù)的中心線(CL)(g)=〇,637、上警戒限(UWL)(奸2s)=0.712142、下警戒 限（LWL ) (￡-2s)=0.56丨 858、上控制限（UCL ) (f+3s)=0.749713、下控制限（LCL ) (s-3s) =0,524287。使用Excel制作質(zhì)量控制圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。
[0065]實(shí)施例2:質(zhì)量控制圖的應(yīng)用
[0066]質(zhì)量控制圖的應(yīng)用是沿用實(shí)施例1中建立的質(zhì)量控制圖的各條警戒線、控制線，將 標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清與待測(cè)樣品同時(shí)進(jìn)行分析測(cè)試，并將1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清試管凝集實(shí) 驗(yàn)后上清液的0D值帶入，繪制成控制用控制圖。在2015年9月到2015年10月間22次日常實(shí)驗(yàn) 中，共收集了22個(gè)1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液的0D值，并繪制了控 制用控制圖，結(jié)果見(jiàn)圖2。通過(guò)肉眼將標(biāo)準(zhǔn)陰陽(yáng)性血清與參照比濁管進(jìn)行比較，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血 清在1:2400稀釋時(shí)均顯不++。
[0067] 如圖1所示，第22次實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1: 2400稀釋度下，上清液的0D值超出了 上控制限，顯示了失控狀態(tài)，經(jīng)查找原因，最終發(fā)現(xiàn)，由于新進(jìn)實(shí)驗(yàn)員對(duì)試劑的儲(chǔ)存條件不 熟悉，也沒(méi)有嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定儲(chǔ)存試劑，誤將抗原放入-20°C儲(chǔ)存，導(dǎo)致顆粒 性懸浮抗原裂解失去效價(jià)。
[0068] 實(shí)施例3:利用質(zhì)量控制圖判定實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響
[0069] 1、建立質(zhì)量控制圖前期數(shù)據(jù)的收集。
[0070] 日常血清凝集實(shí)驗(yàn)和結(jié)果判定按照《GB/T 18646-2002布魯氏菌病實(shí)驗(yàn)室技術(shù)》的 要求進(jìn)行。在試管凝集實(shí)驗(yàn)孵育后，將1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清的上清液加入到VITEK比 濁用試管中，使用VITEK配套比濁儀讀取并記錄其0D值。
[0071] 將前期收集的運(yùn)用狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值后的29組數(shù)據(jù)，按時(shí)間順序 繪制質(zhì)量控制圖。這2 9組數(shù)據(jù)的中心線（C L ) (i) =0.63、上警戒限（U W L ) 〇+2s)=0.704066、下警戒限(LWL)〇2s)=0.555934、上控制限(UCL)(計(jì) 3s)=0.741099、 下控制限(LCL)(.^3s) =0.518901。使用Excel制作質(zhì)量控制圖，結(jié)果見(jiàn)圖3。
[0072] 2、利用建立的控制圖監(jiān)控不同實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
[0073] 分別單獨(dú)改變?cè)嚬苣瘜?shí)驗(yàn)孵育時(shí)間、孵育溫度，其他實(shí)驗(yàn)條件不變，進(jìn)行布氏桿 菌試管凝集實(shí)驗(yàn)。將不同實(shí)驗(yàn)條件下1:2400稀釋度標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清進(jìn)行4個(gè)平行的試管凝集 實(shí)驗(yàn)后的上清液加入到VITEK比濁用試管中，使用VITEK配套比濁儀讀取并記錄其0D值。設(shè) 置的不同實(shí)驗(yàn)條件分別為:試管凝集孵育時(shí)間設(shè)定為24h、28h和29h;孵育溫度設(shè)定為37°C、 室溫 25°C、15°C 和 42°C。
[0074]參照比濁管、不同實(shí)驗(yàn)條件下標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1:2400稀釋度試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液 的0D值見(jiàn)表4和表5。不同實(shí)驗(yàn)條件下標(biāo)準(zhǔn)陰性血清各稀釋度試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液0D值在 1.09~1.29之間，故陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)成立。
[0075]表4:參照比濁管各梯度0D值
[0077] 表5:標(biāo)準(zhǔn)血清各稀釋度0D值
[0079] 沿用步驟1建立的質(zhì)量控制圖的各條警戒線、控制線，將不同實(shí)驗(yàn)條件下標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性 血清1:2400稀釋度試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液的0D值帶入，繪制成控制用控制圖，結(jié)果見(jiàn)圖4。
[0080] 如圖4所示，15°C/24h條件下標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清試管凝集實(shí)驗(yàn)后上清液0D值超出上控 制限(UCL)，顯示失控;42°C/24h條件下0D值超出下控制限（LCL)，顯示失控;25°C/24h條件 下0D值超出上控制限(UCL)，顯示失控，但超出UCL的程度小于15°C/24h時(shí)的情況;37°C/24h 條件下0D值顯示受控;37°C/28h條件下0D值有兩個(gè)平行超出下控制限(LCL)，顯示失控，另 外兩個(gè)平行在LCL附近;37°C/29h條件下0D值超出下控制限（LCL)，顯示失控，且超出LCL的 程度大于37°C/28h時(shí)的情況?？梢?jiàn)，孵育溫度和孵育時(shí)間均對(duì)布氏桿菌試管凝集實(shí)驗(yàn)的結(jié) 果有影響。
[0081]顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說(shuō)明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì) 本發(fā)明的實(shí)施方式的限定，對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上還可 以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)，這里無(wú)法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā) 明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見(jiàn)的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制圖的建立方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 制備控制濃度的布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品；將布氏桿菌病試管凝集抗 原配制到工作濃度;按照《GB/T18646-2002動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》附錄E的要求配置參 照比濁管； 2) 按照GB/T18646-200 2第4法中規(guī)定的時(shí)間和溫度，在比濁用試管中進(jìn)行布氏桿菌病 試管凝集試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和工作濃度的布氏桿菌病試管凝集抗原的反應(yīng)； 3) 使用比濁儀讀取并記錄步驟2)的OD值； 4) 在不同時(shí)間重復(fù)步驟2和步驟3，n次(n多20); 5) 當(dāng)樣本量在20<n<30時(shí)，在未知標(biāo)準(zhǔn)差情形且限定檢出離群值的個(gè)數(shù)大于1的情況 下，使用狄克遜(Dixon)檢驗(yàn)法剔除離群值，選取最后20組數(shù)據(jù)繪制質(zhì)量控制圖；其中n組數(shù) 據(jù)的質(zhì)量控制圖包括中心線（CL)、上警戒限(UWL)、下警戒限（LWL)、上控制限(UCL)和下控 制限(LCL);其中所述中心線(CL)為平均數(shù)Q);所述上警戒限(UWL)為平均數(shù)加2倍標(biāo)準(zhǔn)差 (x+2s);所述下警戒限(LWL)為平均數(shù)減2倍標(biāo)準(zhǔn)差(x-2s);所述上控制限(UCL)為平均數(shù)加 3倍標(biāo)準(zhǔn)差(I+3S);所述下控制限(LCL)為平均數(shù)減3倍標(biāo)準(zhǔn)差(奪3S); 6) 分析質(zhì)量控制圖的有效性。2. 如權(quán)利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述質(zhì)量控制圖的有效性分析方法如 下：檢查n個(gè)數(shù)據(jù)，確認(rèn):①?zèng)]有落在3倍標(biāo)準(zhǔn)差外的失控值;②沒(méi)有連續(xù)9點(diǎn)在中心線的同 偵h③沒(méi)有連續(xù)6個(gè)點(diǎn)遞增或遞減;④沒(méi)有連續(xù)14個(gè)相鄰點(diǎn)上下交替;⑤沒(méi)有連續(xù)3點(diǎn)中的2 點(diǎn)落在中心線同側(cè)的2倍標(biāo)準(zhǔn)差外;⑥沒(méi)有連續(xù)5個(gè)點(diǎn)中的4個(gè)點(diǎn)落在中心線同側(cè)的一倍標(biāo) 準(zhǔn)差外;⑦沒(méi)有連續(xù)15個(gè)點(diǎn)落在中心線兩側(cè)的1倍標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)；⑧沒(méi)有連續(xù)8點(diǎn)落在中心線兩 側(cè)但沒(méi)有一點(diǎn)在1倍標(biāo)準(zhǔn)差內(nèi)。3. 如權(quán)利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述控制濃度的布氏桿菌病試管凝集試 驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性樣品為1.667 IU/mL。4. 質(zhì)量控制圖在布氏桿菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用，其特征在于，按照權(quán)利要求1~3 任一所述建立方法建立的質(zhì)量控制圖，再按照權(quán)利要求1所述建立方法中的步驟1)~3)測(cè) 量樣品的0D值，將所測(cè)得的0D值與質(zhì)量控制圖進(jìn)行對(duì)比；當(dāng)所測(cè)得的0D值在UWL和LWL之間 時(shí)，表示實(shí)驗(yàn)過(guò)程受控;當(dāng)所測(cè)得的0D值不在UWL和LWL之間時(shí)，表示實(shí)驗(yàn)過(guò)程不受控。
【文檔編號(hào)】G01N33/50GK106053782SQ201610347980
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月24日
【發(fā)明人】饒紅, 谷強(qiáng), 郭錚蕾, 韓玥, 徐姍, 范斐, 李偉
【申請(qǐng)人】北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心