檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性好、靈敏度高的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；(2)溶劑的配制；(3)前處理提取過程；(4)測定：取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。本發(fā)明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，使用乙酸乙酯∶丙酮(V/V7∶3)混合溶劑提取水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留，經(jīng)分散型固相萃取N-丙基乙二胺(PSA)吸附劑凈化后，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的強選擇性和抗干擾能力的特性，測定其殘留量。使用乙酸乙酯∶丙酮(V/V7∶3)混合溶劑提取效率高，提取的基質(zhì)干擾少；使用PSA填料作為吸附劑，可以去除提取的有機酸，色素等干擾物質(zhì)，達(dá)到凈化目的。
【專利說明】
檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種水生蔬菜殘留的檢測方法，尤其是一種檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲 酰胺殘留量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯蟲苯甲酰胺是杜邦公司開發(fā)的一種新型高效廣譜殺蟲劑，對鱗翅目的夜蛾科、 螟蛾科、蛀果蛾科、卷葉蛾科、粉蛾科、菜蛾科、麥蛾科、細(xì)蛾科等均有很好的控制效果，還能 控制鞘翅目象甲科，葉甲科;雙翅目潛蠅科;煙粉虱等多種非鱗翅目害蟲。氯蟲苯甲酰胺能 高效激活昆蟲魚尼丁受體，破壞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Ca 2+環(huán)境穩(wěn)定，導(dǎo)致昆蟲癱瘓死亡，對鱗翅目害 蟲的幼蟲活性高，具有迅速阻止害蟲進(jìn)食、高效滯留活性、耐雨水沖刷、滲透性強。
[0003] 目前國內(nèi)外關(guān)于蔬菜、水果中氯蟲苯甲酰胺殘留量檢測的方法報道的較多，主要 采用高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法，其前處理提取溶劑主要為乙腈或者酸性乙腈，而 關(guān)于水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量檢測的方法尚未有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性好、靈敏度高的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的 方法。
[0005] 實現(xiàn)本發(fā)明目的的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：
[0006] (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：
[0007] 準(zhǔn)確稱取l〇mg氯蟲本甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配 制成濃度為lmg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存；
[0008] 準(zhǔn)確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成 質(zhì)量濃度為l〇yg/mL中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存；
[0009] 準(zhǔn)確吸取一定量的lOyg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用甲醇與水混 和溶液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL和100ng/ mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；
[0010] (2)溶劑的配制：
[0011]乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻；
[0012] 甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻；
[0013] (3)前處理提取過程：
[0014]稱取10.00g試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮(v/v 7:3)20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0 · lg PSA 粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氮吹至干，準(zhǔn)確加 入1.00mL甲醇與水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進(jìn)樣瓶中，供儀器分 析；
[0015] (4)測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
[0016] 本發(fā)明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法的有益效果如下：
[0017] 本發(fā)明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，使用乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)混合溶劑提取水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留，經(jīng)分散型固相萃取N-丙基乙二胺(PSA) 吸附劑凈化后，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的強選擇性和抗干擾能力的特性，測定其殘留量。 使用乙酸乙酯:丙酮(V/V 7:3)混合溶劑提取效率高，提取的基質(zhì)干擾少;使用PSA填料作為 吸附劑，可以去除提取的有機酸，色素等干擾物質(zhì)，達(dá)到凈化目的。本發(fā)明應(yīng)用分散型固相 萃取替代固相萃取，可以減少樣品前處理時間，減少有機溶劑的用量，節(jié)約成本，減少環(huán)境 污染;本發(fā)明方法穩(wěn)定性好，靈敏度高，為水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量測定提供了高效 快速的分析手段。
【附圖說明】
[0018]圖1為空白蓮藕中添加5. Oyg/kg的色譜圖。
[0019] 圖2為空白蒲菜中添加5. Oyg/kg的色譜圖。
【具體實施方式】
[0020] 本發(fā)明的檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟：
[0021] (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：
[0022] 準(zhǔn)確稱取10mg氯蟲本甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配 制成濃度為lmg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存；
[0023]準(zhǔn)確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成 質(zhì)量濃度為l〇yg/mL中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存；
[0024] 準(zhǔn)確吸取一定量的lOyg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用甲醇與水混 和溶液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL和lOOng/ mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配；
[0025] (2)溶劑的配制：
[0026]乙酸乙酯：丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻；
[0027]甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻；
[0028] (3)前處理提取過程：
[0029]稱取10.00g試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮(v/v 7:3)20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0 · lg PSA 粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氮吹至干，準(zhǔn)確加 入1.00mL甲醇與水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進(jìn)樣瓶中，供儀器分 析；
[0030] (4)測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
[0031 ]配制濃度為2即/1111^，51^/1]11^，1〇1^/1]11^，2〇1^/1]11^，5〇]^/1111^和10〇1^/1]11^的標(biāo)準(zhǔn)工作溶 液，在以下優(yōu)化過的儀器參數(shù)下進(jìn)行分析：
[0032]液相色譜條件
[0033] 色譜柱：Agilent Z0RBAX SB-C18柱 150mmX2.1mm(i.d.);
[0034] 流動相:A 0 · 1 %甲酸水溶液，B甲醇；
[0035]優(yōu)化的梯度洗脫程序； L0037J 流速：0.25mL/min;
[0038] 進(jìn)樣量：25yL;
[0039] 柱溫：30〇C;
[0040] 質(zhì)譜條件 [0041 ] 離子源:ESI源 [0042]掃描方式:正離子掃描 [0043] 監(jiān)測方式:多反應(yīng)監(jiān)測
[0044]多反應(yīng)監(jiān)測模式下優(yōu)化的質(zhì)譜參數(shù)
[0046] *表示定量離子
[0047]離子傳輸管溫度:350°C
[0048] 鞘氣（高純氮氣)40Arb
[0049] 輔助氣(高純氮氣）10Arb
[0050] 碰撞氣（高純氬氣）1.5m Torr
[0051] 噴霧電壓:3Kv。
[0052] 本發(fā)明根據(jù)氯蟲苯甲酰胺的理化性質(zhì)及查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上使用乙酸乙酯：丙酮 (v/v 7:3)混合溶劑作為提取溶劑，通過實驗驗證乙酸乙酯：丙酮(v/v 7:3)混合溶劑對氯 蟲苯甲酰胺的提取效率高于乙腈及酸性乙腈，同時提取的基質(zhì)干擾也較少。該方法的優(yōu)點 是操作簡便、耗時較短、靈敏度高、檢測限低。
[0053] 實施例1:蓮藕中氯蟲苯甲酰胺殘留量的檢測 [0054] 樣品前處理
[0055]稱取10.00g蓮藕樣品（精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮 (v/v 7 : 3) 20mL，超聲lOmin，加入3g氯化鈉混勻，4000r/min離心10min，取上層清液加入 Ο. lg PSA粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氮吹至 干，準(zhǔn)確加入1.OOmL甲醇:水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進(jìn)樣瓶中， 供儀器分析。
[0056] 色譜圖如圖1所示。
[0057]液相色譜條件
[0058] 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18 柱 150mmX2.1mm(i.d.);流動相：Α0·1% 甲酸水 溶液，Β甲醇，梯度洗脫程序見表3;流速:0.25mL/min;進(jìn)樣量:25yL;柱溫:30°C。
[0059] 表 3
[0061 ]質(zhì)譜條件
[0062] 離子源:ESI源;掃描方式:正離子掃描;監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測，多反應(yīng)監(jiān)測模式下 優(yōu)化的質(zhì)譜參數(shù)見表4;離子傳輸管溫度:350°C;鞘氣(高純氮氣)40Arb;輔助氣(高純氮氣） lOArb;碰撞氣(高純氬氣）1.5m Torr;噴霧電壓:3Kv。
[0063] 表 4
[0065] *表示定量離子
[0066] 實施例2:蒲菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的檢測
[0067] 樣品前處理
[0068]稱取10.00g蒲菜樣品（精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯:丙酮 (v/v 7 : 3) 20mL，超聲10min，加入3g氯化鈉混勻，4000r/min離心10min，取上層清液加入 0. lg PSA粉末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氮吹至 干，準(zhǔn)確加入1.〇〇mL甲醇:水混和溶液(V/V 3:7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進(jìn)樣瓶中， 供儀器分析。
[0069] 如圖2所示的色譜圖，液相色譜條件同實施例1，質(zhì)譜條件同實施例1。
[0070] 上面所述的實施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進(jìn)行描述，并非對本發(fā)明的范 圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對本發(fā)明技術(shù)方 案做出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種檢測水生蔬菜中氯蟲苯甲酰胺殘留量的方法，包括如下步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取l〇mg氯蟲本甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，配制成 濃度為lmg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于-18°C冰箱中冷凍避光保存； 準(zhǔn)確吸取一定量的lmg/mL氯蟲苯甲酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于容量瓶中，用甲醇稀釋成質(zhì)量 濃度為l〇yg/mL中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于4°C冰箱中冷凍避光保存； 準(zhǔn)確吸取一定量的l〇yg/mL氯蟲苯甲酰胺中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用甲醇與水混和溶 液(V/V 3:7)逐級稀釋到濃度為2ng/mL，5ng/mL，1 Ong/mL，20ng/mL，50ng/mL和 100ng/mL的 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配； (2) 溶劑的配制： 乙酸乙酯:丙酮(V/V 7:3)溶劑:量取700mL乙酸乙酯和300mL丙酮，混合均勻； 甲醇與水混和溶液(V/V 3:7):量取300mL甲醇和700mL水，混合均勻； (3) 前處理提取過程： 稱取lO.OOg試樣(精確到0.05g)置于具塞塑料離心管中，加入乙酸乙酯：丙酮(v/v 7: 3)20mL，超聲lOmin，加入3g氯化鈉混勾，4000r/min離心10min，取上層清液加入0. lg PSA粉 末渦旋，靜置待PSA粉末沉淀后取2mL上層清液，于45°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或氮吹至干，準(zhǔn)確加入 1. OOmL甲醇與水混和溶液(V/V 3 : 7)溶解后，過0.22μπι的有機濾膜到進(jìn)樣瓶中，供儀器分 析； (4) 測定:取步驟(1)和步驟(3)獲得的濾液進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
【文檔編號】G01N27/62GK106018571SQ201510750915
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2015年11月9日
【發(fā)明人】魏云計, 馮民, 朱臻怡, 王小晉, 何健, 魏斌, 朱珠
【申請人】中華人民共和國淮安出入境檢驗檢疫局