一種治療胃病的中藥制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療胃病的中藥制劑的檢測方法，該中藥制劑的檢測方法包括：對君藥三七進行定性鑒別和含量測定，本發(fā)明的檢測方法，包括采用薄層色譜法鑒別三七；本發(fā)明的檢測方法，還包括采用高效液相色譜法測定三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量，相比現(xiàn)在的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明的質(zhì)控方法具有準確、重現(xiàn)性好的特點，采用本方法可以更加準確的把握有關(guān)藥品質(zhì)量，降低用藥風險，提高產(chǎn)品質(zhì)量。
【專利說明】
一種治療胃病的中藥制劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種治療胃病的中藥制劑的檢測方法，更具體的說是利胃膠囊的檢測 方法，包括定性鑒別和含量測定，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 利胃膠囊由三七、枯礬、煅花蕊石、酒大黃等四味藥材經(jīng)科學搭配組成，具有化瘀 祛痰，止血定痛的功效，用于痰阻血瘀、胃腕疼痛及糜爛性、出血性胃炎，其在治療胃病方面 有顯著的臨床療效。
[0003] 發(fā)明專利申請CN 1879711A已經(jīng)公開了一種治療胃病的中藥組合物及其制備方法 和質(zhì)量控制方法。但是該專利中三七的定性鑒別結(jié)果的斑點顏色和分離度不是很理想，我 們對三七的定性鑒別方法進行了改進。原專利中三七含量測定采用薄層掃描法對三七的有 效成分人參皂苷1^ 1進行了含量測定，該方法存在誤差大，重現(xiàn)性不好，準確度不高，產(chǎn)品質(zhì) 量不易控制的缺點。
[0004] 2015年版《中國藥典》及有關(guān)三七含量測定的文獻中含量的流動相均為乙腈與水 的梯度流動相，這種梯度流動相基線極易發(fā)生漂移，影響峰面積的積分，含量檢測誤差較 大;分析時間長，單個樣品的分析時長需65分鐘。
[0005] 為了有效保護中藥制劑的質(zhì)量與療效，我們建立了本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，包括 對君藥三七進行定性鑒別和含量測定。具體采用薄層色譜法鑒別三七和采用高效液相色譜 法測定三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbl的含量，與現(xiàn)在的質(zhì)量控制方法相 比較，本發(fā)明重現(xiàn)性好、準確度高，同時有效的縮短了樣品分析時間，采用本方法可以更加 準確的把握有關(guān)藥品質(zhì)量，降低用藥風險，提高產(chǎn)品質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明目的在于提供一種治療胃病的中藥制劑的質(zhì)量控制方法，對其處方的君藥 三七進行定性鑒別和含量測定。本發(fā)明技術(shù)方案方法簡便可行、準確度好、重復(fù)性好，并可 以作為本發(fā)明中藥制劑質(zhì)量控制方法，能有效的保證藥品質(zhì)量的穩(wěn)定性和療效。
[0007] 本
【發(fā)明內(nèi)容】
中所述的中藥制劑，均指利胃膠囊，其具體的處方配比組成為：三七 1900g、枯研J 600g、煅花蕊石800g、酒大黃700g。
[0008] 該制劑具體的制備方法為，以上四味，均單獨粉碎成細粉，以凈粉按比例投料，混 勻，即得。三七為方中君藥，三七皂苷心、人參皂苷R gl和人參皂苷Rh均為有效成分，本發(fā)明 的檢測方法包括對君藥三七的鑒別方法，所述方法采用薄層色譜法鑒別，參照物選用三七 對照藥材、人參皂苷Rgi、三七皂苷辦對照品。
[0009] 本發(fā)明的檢測方法還包括三七中的三七皂苷辦和人參皂苷1?幻的含量測定方法，所 述的檢測方法，具體包括：
[0010 ]①照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定；
[0011]②對照品溶液的制備精密稱取三七皂苷心、人參皂苷Rgl對照品適量，加有機溶劑 制成溶液，即得；
[0012] ③供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用有機溶劑超聲處理，放冷，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液，即得；
[0013] ④測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩 點法對數(shù)方程計算，即得。
[0014] 本發(fā)明的檢測方法還包括三七中的人參皂苷仙:的含量測定方法，所述的檢測方 法，具體包括：
[0015]①照高效液相色譜法（《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定；
[0016] ②對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rbi對照品適量，加有機溶劑制成溶液， 即得；
[0017] ③供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用有機溶劑超聲處理，放冷，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液，即得；
[0018] ④測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩 點法對數(shù)方程計算，即得。
[0019] 本發(fā)明的檢測方法，其中各種數(shù)據(jù)均為實驗獲得，在實際操作過程會產(chǎn)生誤差，該 誤差在±20%內(nèi)均可接受，因此本發(fā)明的方法中的數(shù)值為在本發(fā)明記載的數(shù)值基礎(chǔ)上土 20%以內(nèi)。
[0020] 任何人在± 20 %以內(nèi)使用本發(fā)明的數(shù)值均落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0021]所述的檢測方法，其中三七的鑒別方法采用薄層色譜法鑒別，參照物選用三七對 照藥材、人參皂苷Rgi、三七皂苷Ri對照品，鑒別處方中的三七，具體步驟如下：
[0022] 取本品lg，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液。另取三 七對照藥材0.4g，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rgl、三七皂苷心對照品，加甲醇制 成每lml各含lmg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版第四部 通則0502)試驗，吸取上述三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁 醇-甲醇-水(20:40:10:20)的下層溶液為展開劑，展開，取出，瞭干，噴以5%硫酸乙醇溶液， 在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上， 均顯相同顏色的斑點;置紫外光燈(365nm)下檢視，均顯相同的熒光斑點。
[0023]所述的檢測方法，其中三七中的三七皂苷Ri、人參皂苷Rgl含量測定方法，采用高效 液相色譜法測定，以外標兩點法對數(shù)方程計算含量，具體步驟如下：
[0024] 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定；
[0025]色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水（21: 79)為流動相;檢測波長均為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷RgJ$計算應(yīng)不低于4000;
[0026] 對照品溶液的制備取三七皂苷心、人參皂苷Rgl對照品適量，精密稱定，加甲醇制 成每lml含三七皂苷RdOyg的溶液，人參皂苷Rgl80yg的混合對照品溶液，即得；
[0027] 供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz)1小 時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0028] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定， 以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
[0029] 所述的檢測方法，其中三七中人參皂苷Rh含量測定方法，采用高效液相色譜法測 定，以外標兩點法對數(shù)方程計算含量，具體步驟如下：
[0030] 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定；
[0031]色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水（32: 68)為流動相;檢測波長均為203nm;
[0032] 對照品溶液的制備取人參皂苷Rbi對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含人 參皂苷RbdOOyg的溶液，即得；
[0033] 供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz)1小 時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0034] 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定， 以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得。
[0035]方法學研究表明，本發(fā)明采用高效液相色譜法測定三七中三七皂苷心、人參皂苷 Rgi和人參皂苷Rbi的含量，具有較好的專屬性、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和精密度。
[0036]本發(fā)明檢測方法簡便、快捷、準確、靈敏度高、穩(wěn)定性好，采用本方法可以更加準確 的把握有關(guān)藥品質(zhì)量，降低用藥風險，提高產(chǎn)品質(zhì)量。
【附圖說明】
[0037]圖1為實施例的三七皂苷R!、人參皂苷Rgl對照品高效液相色譜圖。
[0038]圖2為實施例的三七皂苷Ri、人參皂苷Rgl的供試品高效液相色譜圖。
[0039]圖3為實施例的三七皂苷Ri、人參皂苷Rgl的陰性液樣品高效液相色譜圖。
[0040]圖4為實施例的人參皂苷Rh對照品高效液相色譜圖。
[0041 ]圖5為實施例的人參皂苷Rh的供試品高效液相色譜圖。
[0042]圖6為實施例的人參皂苷Rh的陰性液樣品高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0043] 儀器：DI0NEX型高效液相色譜儀，四元梯度栗，柱溫箱，自動進樣器，UVD170U、 Chromeleon化學工作站，色譜柱（SinoChrom 0DS-BP 5μηι)〇
[0044] 試藥:利胃膠囊（規(guī)格:0.5g/粒，健民藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)，批號：140701, 140702，140703)人參皂苷Rbd#照品（批號：110704-201223)、三七皂苷心對照品（批號： 110745-200516 )、人參皂苷Rgdt照品（批號：110703-201128)、三七對照藥材（批號： 120941-201108 )、甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。上述對照品及對 照藥材均購于中國藥品生物制品檢定所。
[0045] 實施例1本發(fā)明中藥制劑的薄層鑒別
[0046]三七的鑒別方法為：取本品少量，加甲醇超聲處理，離心，取上清液作為供試品溶 液。另取三七對照藥材少量，加甲醇超聲處理，離心，取上清液作為對照藥材溶液。再取人參 皂苷Rgl、三七皂苷Ri對照品，加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄 層色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0502)試驗，吸取上述三種溶液微量，分別點于 同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以5 %硫酸乙醇溶液，在105 °C加熱至斑點顯色清晰。
[0047]實施例2本發(fā)明中藥制劑三七中三七皂苷R!、人參皂苷Rgl含量測定方法 [0048]樣品制備方法確定：
[0049] 提取方法的選擇試驗考察了超聲提取30min，回流提取30min，冷浸12h等方法，結(jié) 果表明，超聲處理的結(jié)果與加熱回流提取結(jié)果相差不大，考察了超聲提取〇.5、1、1.5、21!對 三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi含量的影響，結(jié)果確定采用超聲處理〇.5h作為本文的提取方法。
[0050] 提取溶劑的選擇試驗考察了用甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇溶液作為提取溶 劑超聲提取〇.5h，按照正文含量測定向下方法進行測定，結(jié)果表明甲醇為提取溶劑時，三七 皂苷心、人參皂苷1^:的峰與其他物質(zhì)的峰分離較好，峰形較好，最終確定甲醇作為提取溶 劑。
[0051 ]色譜方法的確定：
[0052]流動相的選擇2015年版《中國藥典》及有關(guān)三七含量測定的文獻中含量的流動相 均為乙腈與水的梯度流動相，洗脫梯度：19%A(0-12分鐘），19%-81%(12-60分鐘），81% - 19% (60-65分鐘）。這種梯度流動相基線極易發(fā)生漂移，影響峰面積的積分，含量誤差較 大;分析時間長，一針樣品的分析時長約65分鐘。而在本文中，通過乙腈-水(21:79)檢測三 七皂苷Ri和人參皂苷Rgi的含量，等度流動相，色譜峰更漂亮，峰面積積分誤差小，分析時長 約33分鐘，大大節(jié)省了分析時間。
[0053]檢測波長的選擇通對三七皂苷辦、人參皂苷1?抑混合對照品溶液進行紫外掃描，在 203 ± lnm處有最大吸收，與《中國藥典》2015年版三七含量測定項下的檢測波長一致，故選 擇203nm作為檢測波長。
[0054]三七皂苷辦、人參皂苷Rgl的含量測定方法。
[0055]色譜條件色譜柱:Sinochrom ODS BP(4.6mmX250mm，5ym);流動相：乙臆-水(21: 79);流速：1.0ml/min;檢測波長:203nm;柱溫:30°C，進樣量：10μ1。理論板數(shù)按三七皂苷Rgi 峰計算應(yīng)不低于4000。
[0056] 對照品溶液的制備取三七皂苷心、人參皂苷Rgl對照品適量，精密稱定，加甲醇制 成每lml含三七皂苷RdOyg的溶液，人參皂苷Rgl80yg的溶液，即得。
[0057]供試品溶液的制備取重量差異項下的本品，研細，取約0.5g精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0058]陰性樣品溶液的制備按處方比例稱取除三七以外的其余藥材，按制備工藝制成 缺三七藥材的陰性對照樣品。
[0059]專屬性試驗配制缺三七的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制陰性樣品，照上 述色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液注入液相色譜儀中測定。結(jié)果表 明，陰性樣品無干擾。
[0060]線性關(guān)系的考察精密稱取三七皂苷Rdmg與人參皂苷Rgl10.22mg，同置25ml量 瓶中，加甲醇使溶解并定容至刻度，其濃度分別為：三七皂苷Ri〇 . 〇944mg/ml、人參皂苷 Rgl0 · 4088mg/ml。精密吸取上述對照品母液0 · 5、1 · 0、2 · 0、3 · 0、5 · 0、10ml，分別置10ml量瓶 中，用甲醇定容至刻度，搖勻，按照上述色譜條件測定，以峰面積(Y)對進樣量(X:yg)進行線 性回歸，得回歸方程為：
[0061 ]三七皂苷辦：Y = 3 · 8301X+0 · 0 111 8，r = 0 · 99992。
[0062] 表lfo線性關(guān)系考察結(jié)果
[0063]
[0064] 結(jié)果表明三七皂苷辦在0.0472~0.944yg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
[0065] 人參皂苷 Rgl: Υ = 4 · 1398X+0 · 04588，r = 0 · 99992。
[0066] 表2Rgl線性關(guān)系考察結(jié)果
[0067]
[0068]結(jié)果表明人參皂苷1^在0.2044~4.088yg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
[0069] 精密度實驗：
[0070] (1)中間精密度實驗精密吸取上述供試品溶液，在上述色譜條件下在三臺不同儀 器上同時檢測，計算含量。結(jié)果三七皂苷Ri與人參皂苷Rgl含量之和RSD為2.94%，表明精密 度良好。結(jié)果見表3。
[0071] 表3中間精密度考察結(jié)果
[0072]
[0073] (2)重復(fù)性試驗取同一批次(批號：140701)的樣品0.5g，精密稱定，平行6份，按正 文含量測定項下方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下分別進樣?〇μ1，測得三七皂苷R: 平均含量為2.991mg/g，RSD為1.36 %，人參皂苷Rgl平均含量為14.073mg/g，RSD為1.56 %， 為結(jié)果表明此法重現(xiàn)性良好。
[0074] 供試品溶液的穩(wěn)定性實驗取上述供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、2411測定三七皂 苷Ri與人參皂苷Rgl的峰面積，結(jié)果三七皂苷RiRSD為1.27%，新橙皮苷RSD為1.02%，可見供 試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0075] 準確度試驗精密稱取三七皂苷辦對照品5.57mg、人參皂苷Rgl對照品28.92mg，置 500ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用；取制備的已知含量的利胃膠囊(三 七皂苷Ri含量2.991mg/g，人參皂苷R gl含量14.073mg/g)，研細，取約0.25g，精密稱定，置于 100ml具塞錐形瓶中，精密加入配制的對照品溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘 后，放冷，再稱定重量，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得到準確度測定用 樣品溶液;按樣品含量測定方法進行測定，計算準確度，見表4。結(jié)果平均回收率為:三七皂 苷Ri98 · 69 % (RSD = 1 · 02 % )，人參皂苷Rgi98 · 21 % (RSD = 0 · 92 % )。
[0076] 表4三七皂苷辦和人參皂苷Rgl加樣回收實驗結(jié)果
[0077]
[0078]實施例3本發(fā)明中藥制劑三七中人參皂苷含量測定方法
[0079] 供試品溶液的制備條件的選擇
[0080] 樣品制備方法確定：
[0081] 提取方法的選擇試驗考察了超聲提取30min，回流提取30min，冷浸12h等方法，結(jié) 果表明，超聲處理的結(jié)果與加熱回流提取結(jié)果相差不大，考察了超聲提取〇.5、1、1.5、21!對 人參皂苷Rbi含量的影響，結(jié)果確定采用超聲處理0.5h作為本文的提取方法。
[0082] 提取溶劑的選擇試驗考察了用甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇溶液作為提取溶 劑超聲提取〇.5h，按照正文含量測定向下方法進行測定，結(jié)果表明甲醇為提取溶劑時，人參 阜苷Rbi的峰與其他物質(zhì)的峰分離較好，峰形較好，最終確定甲醇作為提取溶劑。
[0083]色譜方法的確定：
[0084]流動相的選擇2015年版《中國藥典》及有關(guān)三七含量測定的文獻中含量的流動相 均為乙腈與水的梯度流動相，洗脫梯度：19%A(0-12分鐘），19%-81%(12-60分鐘），81% - 19% (60-65分鐘）。這種梯度流動相基線極易發(fā)生漂移，影響峰面積的積分，含量誤差較 大;分析時間長，一針樣品的分析時長約65分鐘。而在本文中，通過乙腈-水(32:68)檢測人 參皂苷Rh的含量，等度流動相，色譜峰更漂亮，峰面積積分誤差小，分析時長約12分鐘，大 大節(jié)省了分析時間。
[0085]檢測波長的選擇通過對人參皂苷Rh對照品溶液進行紫外掃描，在203±lnm處有 最大吸收，與《中國藥典》2015年版三七含量測定項下的檢測波長一致，故選擇203nm作為檢 測波長。
[0086] 人參皂苷含量測定方法：
[0087] 色譜條件色譜柱:Sinochrom ODS BP(4.6mmX250mm，5ym);流動相：乙臆-水(32: 68);流速：1.0ml/min;檢測波長:203nm;柱溫：30°C，進樣量：10μ1。
[0088]對照品溶液的制備取人參皂苷Rbi對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含人 參皂苷RbdOOyg的溶液，即得。
[0089] 供試品溶液的制備取重量差異項下的本品，研細，取約0.5g精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0090] 陰性對照樣品的制備按處方比例稱取除三七以外的其余藥材，按制備工藝制成 缺三七藥材的陰性對照樣品。
[0091 ]專屬性試驗配制缺三七的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制陰性樣品，照上 述色譜條件，吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液注入液相色譜儀中測定。結(jié)果表 明，陰性樣品無干擾。
[0092] 線性關(guān)系的考察精密稱取人參皂苷Κ1η8.73π^，加甲醇制成含人參皂苷 RhO. 3492mg/ml對照品儲備液，精密吸取上述對照品母液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、10ml，分 別置l〇ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得人參皂苷Rln濃度分別為17.46、34.92、 69.84、104.80、139.70、349.20μg/ml的對照品溶液，取上述溶液10μ1，進樣分析，以進樣量 (yg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Υ)繪制標準曲線，進行計算，得回歸方程4 = 3.8570父_ 0.0108，r = 0.99999。
[0093] 表5Rbl線性關(guān)系考察結(jié)果
[0094]
[0095]結(jié)果表明人參皂苷Rbl在0.1746~3.492yg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
[0096] 精密度實驗：
[0097] (1)中間精密度實驗精密吸取上述供試品溶液，在上述色譜條件下在三臺不同儀 器上同時檢測，計算含量。結(jié)果人參皂苷Rbi含量RSD為2.94 %，表明精密度良好，結(jié)果見表 6〇
[0098]表6中間精密度考察結(jié)果 [0099]
[0100] (2)重復(fù)性試驗取同一批次(批號：140701)的樣品0.5g，精密稱定，平行6份，按正 文含量測定項下方法制成供試品溶液，在上述色譜條件下分別進樣?〇μ1，測得人參皂苷Rbi 的平均含量為9.233mg/g，RSD為1.01%，結(jié)果表明此法重復(fù)性良好。
[0101]穩(wěn)定性試驗取重復(fù)性試驗中的1份供試品溶液，于0、2、4、6、8、10、24h測定人參皂 苷Rbl的峰面積，結(jié)果供試品溶液在24h內(nèi)峰面積基本不變，人參皂苷RblRSD為0.99%，可見 供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0102] 加樣回收率試驗稱取已知含量的同一批號（140701)的利胃膠囊樣品0.25g，精密 稱定6份，分別加入人參皂苷Rh對照品1.676mg，按正文含量測定項下方法制備，按上述色 譜條件進樣分析，計算回收率，結(jié)果見表7。
[0103] 表7三七皂苷Rbi加樣回收實驗結(jié)果
[0104]
[0105]實施例4本發(fā)明中藥制劑三七中三種含量的限度確定
[0106]樣品測定取利胃膠囊樣品3批，以上述方法制備對照品溶液和供試品溶液，分別 以本文相對應(yīng)的色譜條件和2015年版《中國藥典》中三七的含測條件測定，以外標法計算三 七皂苷Ri、人參皂苷Rgi、Rbi的含量，結(jié)果見表8、表9。
[0107]表8利胃膠囊三七中3種皂苷含量
[0108]
[0109]表9利胃膠囊三七中3種皂苷含量(藥典方法）
[0110] 從以工m禾κι以有出：以艾'巴1苜求1十，刈利閆収裴屮二^竹書甘的百mm禾兀京， 響。
[0112] 含量限度的確定對利胃膠囊五批中試樣品進行測定，結(jié)果見表10。
[0113] 表10三七皂苷辦、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbr#量測定結(jié)果表(n = 5)
[0114]
[0115] 據(jù)上述測定結(jié)果，仍訂本品每粒含三七以人參皂苷RgKC^H^OM)計，不得少于 4. Omg，和原專利(公開號CN 1879711A)中標準含量限度保持一致。
[0116] 這5批中試樣品中人參皂苷Rgl的實際平均含量為6.82mg/粒，即：人參皂苷1^平均 含量的58.65 %為4. Omg/粒，以此類推得出三七皂苷R!、人參皂苷此1含量限度。即：三七皂苷 R!彡0 · 79mg/粒;人參皂苷Rgl彡4 · Omg/粒;人參皂苷Rbi彡2 · 18mg/粒。
【主權(quán)項】
1. 一種治療胃病的中藥制劑的檢測方法，該中藥制劑是由三七190g、枯礬160g、煅花蕊 石80g、酒大黃70g的原料藥制備而成，其特征在于，所述的檢測方法是采用薄層色譜法對該 中藥制劑中的三七進行定性鑒別和采用高效液相色譜法對該中藥制劑的活性成分三七皂 苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷此:進行含量測定。2. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于三七的定性鑒定方法為:取本品少量，有 機溶劑萃取后離心，上清液作為供試品溶液。3. 如權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于三七的鑒定方法為：取本品少量，加甲醇 超聲處理，離心，取上清液作為供試品溶液，另取三七對照藥材少量，加甲醇超聲處理，離 心，取上清液作為對照藥材溶液;再取人參皂苷R gl、三七皂苷心對照品，加甲醇制成每lml各 含lmg的混合溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0502) 試驗，吸取上述三種溶液微量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水 的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清 晰。4. 如權(quán)利要求3所述的測定方法，其特征在于三七的鑒定方法為：取本品lg，加甲醇 10ml，超聲處理30分鐘，離心，取上清液作為供試品溶液，另取三七對照藥材0.4g，同法制成 對照藥材溶液，再取人參皂苷Rgi、三七皂苷Ri對照品，加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶 液，作為對照品溶液，照薄層色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0502)試驗，吸取上述 三種溶液各5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-正丁醇-甲醇-水（20 :40:10: 20)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯 色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點； 置紫外光燈(365nm)下檢視，均顯相同的熒光斑點。5. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于三七中三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi的含量測 定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 對照品溶液的制備精密稱取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi對照品適量，加有機溶劑制 成溶液，即得； ③ 供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用有機溶劑超聲處理，放冷，搖勻，濾過，取 續(xù)濾液，即得； ④ 測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法 對數(shù)方程計算，即得。6. 如權(quán)利要求5所述的測定方法，其特征在于三七中三七皂苷辦、人參皂苷1?81的含量測 定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 對照品溶液的制備精密稱取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi對照品適量，加甲醇制成混 合對照品溶液，即得； ③ 供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用甲醇超聲處理，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得； ④ 測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法 對數(shù)方程計算，即得。7. 如權(quán)利要求6所述的測定方法，其特征在于三七中三七皂苷辦、人參皂苷1?81的含量測 定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(21:79) 為流動相;檢測波長均為203nm，理論板數(shù)按人參皂苷RgJ$計算應(yīng)不低于4000; ③ 對照品溶液的制備取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi對照品適量，精密稱定，加甲醇制成 每lml含三七皂苷RdOyg的溶液，人參皂苷R gl80yg的混合對照品溶液，即得； ④ 供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約〇.5g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz)l小 時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ⑤ 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，測定，以 外標兩點法對數(shù)方程計算，本品每粒含三七以人參皂苷Rgi(C4 2H72〇i4)計，不得少于4. Omg; 含三七以三七皂苷Ri(C47H8Q〇18)計，不得少于0.79mg。8. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于三七中人參皂苷此:的含量測定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rbi對照品適量，加有機溶劑制成溶液，即得； ③ 供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用有機溶劑超聲處理，放冷，搖勻，濾過，取 續(xù)濾液，即得； ④ 測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法 對數(shù)方程計算，即得。9. 如權(quán)利要求8所述的測定方法，其特征在于三七中人參皂苷此:的含量測定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rh對照品適量，加甲醇制成對照品溶液，即 得； ③ 供試品溶液的制備精密稱取本品適量，用甲醇超聲處理，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得； ④ 測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法 對數(shù)方程計算，即得。10. 如權(quán)利要求9所述的測定方法，其特征在于三七中人參皂苷此:的含量測定方法： ① 照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版第四部通則0512)測定； ② 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(32:68) 為流動相;檢測波長均為203nm; ③ 對照品溶液的制備取人參皂苷Rbi對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含人參 皂苷RbdOOyg的溶液，即得； ④ 供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約〇.5g，精密稱定，置 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz)l小 時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； ⑤ 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，測定，以 外標兩點法對數(shù)方程計算，本品每粒含三七以人參皂苷Ι^((： 54Η92〇23)計，不得少于2.18mg。
【文檔編號】G01N30/02GK105974025SQ201610402080
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】李霞, 方胡彪, 黃志軍, 吳木琴, 趙剛, 劉軍鋒, 熊登科, 任霞, 余麗花, 向陽, 朱立彬
【申請人】健民藥業(yè)集團股份有限公司