一種通過hplc分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用直鏈淀粉類手性色譜柱以正相混合溶劑為流動相通過HPLC分析分離苯甲酰科立內酯對映異構體的方法。該方法能夠簡單、準確、高效分析分離苯甲酰科立內酯對映異構體，從而實現對苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的質量控制。本發(fā)明也可以用來制備高純度單一旋光性的苯甲?？屏弱?。
【專利說明】
-種通過HPLC分析分離苯甲醜科立內醋對映異構體的方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及一種色譜分析分離方法，尤其是通過高效液相色譜法分析分離苯甲酯 科立內醋對映異構體的方法。 技術背景
[0002] 前列腺素(Prostaglandins,縮寫PGs)是一類重要的具有內源性生理活性的物質， 在體內各個組織中廣泛存在，是多種生理過程的重要介質。由于在人體中含量極低，臨床上 前列腺素類藥物主要是通過人工合成而來。苯甲酯科立內醋(Cor巧lactone benzoate)是 合成前列腺素藥物常用的起始原料，分子式為Cl出16〇5,化學名為:5-(苯甲酯氧基)六氨-4- (徑基甲基)-2H-環(huán)戊并[b]巧喃-2-酬，通用名為:苯甲酯科立內醋，結構式為：
[0003]
[0004] 該分子含有四個手性中屯、，理論上存在多個光學異構體，但根據其反應機理及合 成方法推斷，只存在一對對映異構體，即（335,43,55,631〇-5-(苯甲酯氧基)六氨-4-巧圣基 甲基)-2H-環(huán)戊并[b]巧喃-2-酬（（ + )-苯甲酯科立內醋）和（3曰3,45,51?，6曰5)-5-(苯甲酯氧 基)六氨-4-巧圣基甲基)-2H-環(huán)戊并[b]巧喃-2-酬（（-)-苯甲酯科立內醋），二者互為對映異 構體雜質在后續(xù)步驟中繼續(xù)參與反應，形成多種對應雜質，影響前列腺素類藥物的質量。因 此，如何分析分離該對對映異構體，提高前列腺素類藥物質量，確保前列腺素類藥物的純度 及安全性，是目前需要解決的技術問題。
[0005] 中國發(fā)明專利CN 102532079 B公開了一種苯甲酯科立內醋的制備方法。該方法從 科立內醋二醇出發(fā)，通過酷化反映，醋交換反應得到產品。
[0006] 手性藥物對映異構體的拆分和絕對構型的確定是一個極其重要且長期存在的問 題，在眾多獲取光學異構體的方法中，包含手性固定相的高效液相色譜分離法最為常見。
[0007] 中國發(fā)明專利化201310652110.1公開了一種(-)-苯甲酯科立內醋及其光學異構 體分析分離方法，該方法選用化ice 1 AD-H手性柱，對苯甲酯科立內醋對映異構體進行分析 和分離。
[0008] 目前現有技術中少有苯甲酯科立內醋對映異構體的分析分離方法研究，僅有的探 索研究中也存在一些問題及不足，例如色譜柱中硅膠表面涂覆直鏈淀粉-S-(3,5-二甲基 苯基氨基甲酸醋)填料與苯甲酯科立內醋對映異構體的相互作用差異較小，立體選擇性較 低，使得苯甲酯科立內醋對映異構體無法得到有效分離。
[0009] 因此，有必要建立一種能夠有效分析分離苯甲酯科立內醋對映異構體的新方法， 控制雜質含量，進而提高合成的前列腺素類藥物質量。

【發(fā)明內容】

[0010] 本發(fā)明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種采用新的手性色譜柱W正相 混合溶劑為流動相的HPLC方法，該方法能夠準確、高效分析分離苯甲酯科立內醋對映異構 體，從而實現對苯甲酯科立內醋對映異構體的質量控制，同時也可W用來制備高純度單一 旋光性的苯甲酯科立內醋。
[0011] 本發(fā)明提供了一種通過HPLC分析分離苯甲酯科立內醋對映異構體的方法，采用色 譜填料為硅膠表面涂覆有直鏈淀粉-S(S)-Q-甲基苯基氨基甲酸醋的手性色譜柱，并使用 正相色譜法分離測定。
[0012] 本發(fā)明正相色譜法所使用的流動相可W是正己燒/異丙醇混合溶劑，正己燒/無水 乙醇混合溶劑中的一種；
[0013] 進一步地，本發(fā)明所使用的正己燒/異丙醇的體積比例為90:10~80: 20,優(yōu)選為 90:10~85:15;
[0014] 進一步地，本發(fā)明所使用的正己燒/無水乙醇的體積比例為95:5~84:16,優(yōu)選為 92:8~85:15。
[0015] 本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照W下方法實現：
[0016] (1)(±)-苯甲酯科立內醋用流動相溶解，配制成ImL含（±)-苯甲酯科立內醋1~ IOyg的供試品溶液;進樣量為1~20化，較優(yōu)選的是5~10化；
[0017] (2)設置正己燒/異丙醇流動相流速為0.8~1.5mL/min，優(yōu)選為0.9~1.5mL/min， 正己燒/無水乙醇流動相流速為0.3~1.5mL/min，優(yōu)選為0.4~1.0血/min;檢測波長為210 ~235nm，較優(yōu)選為230nm;柱溫為室溫；
[001引 （3)取步驟（1)所制供試品溶液5~10化注入手性色譜柱(250 X 4.6mm，5.0皿），完 成苯甲酯科立內醋對映異構體的分析與分離。
[0019] 本發(fā)明的創(chuàng)新點及有益效果為：
[0020] 1.采用直鏈淀粉-S(S)-Q-甲基苯基氨基甲酸醋手性色譜柱;采用較優(yōu)選的流動 相;選擇流動相溶解樣品，選用較優(yōu)的進樣量;選用較優(yōu)的波長;從而確保了樣品的穩(wěn)定性， 提高了色譜峰的對稱性，并且有較好的分離效果。按照本發(fā)明方法實施，（+)-苯甲酯科立內 醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體先后出峰，分離度>1.5,有效的分析分離苯甲酯 科立內醋對映異構體。
[0021] 2.與W往研究相比，本發(fā)明采用的硅膠表面涂敷有直鏈淀粉-S(S)-Q-甲基苯基 氨基甲酸醋的AS-H手性色譜柱，與硅膠表面涂敷有直鏈淀粉-S (3，5-二甲基苯基氨基甲酸 醋）的AD-H直鏈淀粉類手性柱相比，其對苯甲酯科立內醋對映異構體立體選擇性較高，分離 度較高，能夠有效分析分離對苯甲酯科立內醋對映異構體。
[0022] 3.所述分析分離方法快速、準確和高效，能夠確保苯甲酯科立內醋對映異構體的 質量可控性;本發(fā)明所述分析分離方法，也可W用來制備高純度單一旋光性的苯甲酯科立 內醋。
[0023] 4.該技術克服了現有技術的不足，解決了苯甲酯科立內醋對映異構體的分析分離 問題，能夠有效控制目標產物及其對映異構體雜質含量，免除對映異構體雜質對后續(xù)合成 反應的干擾，提高前列腺素類藥物質量，確保用藥安全。
[0024] 由此可見，本發(fā)明開發(fā)的一種采用新的手性色譜柱分析分離苯甲酯科立內醋對映 異構體的HPLC方法是十分必要的。
【附圖說明】
[002引圖1:HPLC圖，色譜條件：色譜柱:Daicel AD-H(250 X 4.6mm, 5.0皿）；流動相：正己 燒-無水乙醇(90:10);柱溫:30°C。
[0026] 圖2:HPLC圖，色譜條件:色譜柱:BC chiral AS-H(，250mmX4.6mm，5皿）；流動相： 正己燒-無水乙醇(92:8);柱溫:室溫。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合實施例，對本發(fā)明一種通過HPLC分析分離苯甲酯科立內醋對映異構體的 方法做進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于實施例。
[0028] 實施例1
[0029] 儀器與條件
[0030] 色譜柱：Daicel AD-H(250X4.6mm，5.0皿）
[0031] 流動相：正己燒-無水乙醇（90:10)
[003^ 柱溫：3(TC
[0033] 流速：1.0mL/min
[0034] 樣品濃度：10iig/mL
[0035] 進樣體積:2化
[0036] 檢測波長:220nm
[0037] 實驗步驟
[003引精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(90:10) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取供試品母液I(K)化置于IOmL容量瓶中， 正己燒-異丙醇(90:10)溶液定容到刻度，配制成濃度為IOiig/血的（±)-苯甲酯科立內醋供 試品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0039] 實驗結果:見附圖1，（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體 的分離度為0.9，苯甲酯科立內醋對映異構體不能有效分離。
[0040] 實施例2
[0041] 儀器與條件
[0042] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0043] 流動相:正己燒-異丙醇(90:10)
[0044] 柱溫:室溫
[0045] 流速：1.0mL/min
[0046] 樣品濃度：10iig/mL
[0047] 進樣體積：1化 [004引檢測波長：210nm
[0049] 實驗步驟
[0050] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(90:10) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取供試品母液I(K)化置于IOmL容量瓶中， 正己燒-異丙醇(90:10)溶液定容到刻度，配制成濃度為IOiig/血的（±)-苯甲酯科立內醋供 試品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0051]實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.7,苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0化2]實施例3
[0053] 儀器與條件
[0054] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0化5] 流動相：正己燒-異丙醇（80:20)
[0化6] 柱溫:室溫 [0057]流速:〇.8mL/min [0化引樣品濃度：5iig/mL [0化9] 進樣體積：如L
[0060] 檢測波長:235nm
[0061 ]實驗步驟
[0062] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(80:20) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液50化置于IOmL容量瓶中，正己燒- 異丙醇（80: 20)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品溶 液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0063] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0064] 實施例4
[0065] 儀器與條件
[0066] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0067] 流動相:正己燒-異丙醇(90:10)
[006引柱溫:室溫
[0069] 流速：1.5mL/min
[0070] 樣品濃度：化g/mL
[0071] 進樣體積：10化
[0072] 檢測波長:235nm
[0073] 實驗步驟
[0074] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(90:10) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液10化置于IOmL容量瓶中，正己燒- 異丙醇(90:10)溶液定容到刻度，配制成濃度為liig/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品溶 液，吸取供試品溶液IOiiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0075] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0076] 實施例5
[0077] 儀器與條件
[007引 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[00巧]流動相：正己燒-異丙醇（85:15)
[0080] 柱溫:室溫 [0081 ]流速:0.9mL/min
[0082] 樣品濃度：化g/mL
[0083] 進樣體積：2化L
[0084] 檢測波長:230nm
[0085] 實驗步驟
[0086] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(85:15) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液10化置于IOmL容量瓶中，正己燒- 異丙醇（85:15)溶液定容到刻度，配制成濃度為liig/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品溶 液，吸取供試品溶液20iiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0087] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為2.25，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0088] 實施例6
[0089] 儀器與條件
[0090] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0091] 流動相:正己燒-異丙醇(88:12)
[0092] 柱溫:室溫
[0093] 流速：1.0mL/min
[0094] 樣品濃度：10iig/mL
[0095] 進樣體積：1化
[0096] 檢測波長:230nm
[0097] 實驗步驟
[009引精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-異丙醇(88:12) 溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液I(K)化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-異丙醇(88:12)溶液定容到刻度，配制成濃度為lOiig/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品 溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0099] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0100] 實施例7
[0101] 儀器與條件
[0102] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0103] 流動相：正己燒-無水乙醇（95:5)
[0104] 柱溫:室溫
[0105] 流速：1.5mL/min
[0106] 樣品濃度：5iig/mL
[0107] 進樣體積：10化 [010引檢測波長：210nm
[0109] 實驗步驟
[0110] 精密稱取（±)-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(95: 5)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液50化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-無水乙醇(95:5)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品 溶液，吸取供試品溶液IOiiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0111] 實驗結果：（+)-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0112] 實施例8 [011引儀器與條件
[0114] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0115] 流動相:正己燒-無水乙醇(84:16)
[0116] 柱溫:室溫
[0117] 流速:0.4mL/min [011引樣品濃度：5iig/mL [0119] 進樣體積:5化
[0120] 檢測波長:220nm
[0121] 實驗步驟
[0122] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(84: 16)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液50化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-無水乙醇（84:16)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試 品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0123] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0124] 實施例9
[0125] 儀器與條件
[0126] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0127] 流動相:正己燒-無水乙醇(92:8)
[012引柱溫:室溫
[0129] 流速:〇.8mL/min
[0130] 樣品濃度：化g/mL
[0131] 進樣體積:20化
[0132] 檢測波長:230nm
[0133] 實驗步驟
[0134] 精密稱取（±)-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(92: 8)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液10化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-無水乙醇(92:8)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試品 溶液，吸取供試品溶液20iiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0135] 實驗結果:見附圖2,（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體 的分離度為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0136] 實施例10
[0137] 儀器與條件
[013引 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0139] 流動相:正己燒-無水乙醇(85:15)
[0140] 柱溫:室溫
[0141] 流速:0.3mL/min [01創(chuàng)樣品濃度：10yg/mL
[0143] 進樣體積:2化
[0144] 檢測波長:230nm
[0145] 實驗步驟
[0146] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(85: 15)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液I(K)化置于IOmL容量瓶中，正 己燒-無水乙醇(85:15)溶液定容到刻度，配制成濃度為IOiig/血的（±)-苯甲酯科立內醋供 試品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0147] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.7,苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[014引實施例11
[0149] 儀器與條件
[0150] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0151] 流動相：正己燒-無水乙醇（85:15)
[0152] 柱溫:室溫
[0153] 流速:〇.4mL/min
[0154] 樣品濃度：10iig/mL
[0155] 進樣體積：如L
[0156] 檢測波長：235nm
[0157] 實驗步驟
[015引精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(85: 15)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液I(K)化置于IOmL容量瓶中，正 己燒-無水乙醇(85:15)溶液定容到刻度，配制成濃度為IOiig/血的（±)-苯甲酯科立內醋供 試品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0159] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0160] 實施例12
[0161] 儀器與條件
[0162] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0163] 流動相:正己燒-無水乙醇(87:13)
[0164] 柱溫:室溫
[01 化]流速:〇.8mL/min
[0166] 樣品濃度：化g/mL
[0167] 進樣體積：10化
[0168] 檢測波長：230nm
[0169] 實驗步驟
[0170] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋lOmg，置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(87: 13)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液10化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-無水乙醇（87:13)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試 品溶液，吸取供試品溶液IOiiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0171] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0172] 實施例13
[0173] 儀器與條件
[0174] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[01巧]流動相：正己燒-無水乙醇（85:15)
[0176] 柱溫:室溫
[0177] 流速:〇.6mL/min [017引樣品濃度：10yg/mL
[0179] 進樣體積:如L
[0180] 檢測波長：230nm
[0181] 實驗步驟
[0182] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(85: 15)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液I(K)化置于IOmL容量瓶中，正 己燒-無水乙醇(85:15)溶液定容到刻度，配制成濃度為IOiig/血的（±)-苯甲酯科立內醋供 試品溶液，吸取供試品溶液化L進入液相色譜，記錄色譜圖。
[0183] 實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
[0184] 實施例14
[0185] 儀器與條件
[0186] 色譜柱:BC chiral AS-H(250X4.6mm,5.0皿）
[0187] 流動相:正己燒-無水乙醇(88:12)
[018引柱溫:室溫
[0189] 流速:〇.8mL/min
[0190] 樣品濃度：5iig/mL
[0191] 進樣體積：IOuL
[0192] 檢測波長:230nm
[0193] 實驗步驟
[0194] 精密稱?。ā?-苯甲酯科立內醋IOmg,置于IOmL容量瓶中，正己燒-無水乙醇(88: 12)溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為供試品母液。精密吸取母液50化置于IOmL容量瓶中，正己 燒-無水乙醇（88:12)溶液定容到刻度，配制成濃度為化g/mL的（±)-苯甲酯科立內醋供試 品溶液，吸取供試品溶液IOiiL進入液相色譜，記錄色譜圖。
[01%]實驗結果：（ + )-苯甲酯科立內醋和(-)-苯甲酯科立內醋兩個對映異構體的分離度 為1.6，苯甲酯科立內醋對映異構體能夠完全分離。
【主權項】
1. 一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法，采用直鏈淀粉類手性色 譜柱，使用正相混合溶劑為流動相的正相色譜法進行分析分離，其特征在于，所述的直鏈淀 粉類手性色譜柱填料為硅膠表面涂覆有直鏈淀粉-三(s) -α-甲基苯基氨基甲酸酯。2. 根據權利要求1所述的一種通過HPLC分析分離苯甲酰科立內酯對映異構體的方法， 其特征在于，所述的正相混合溶劑可以為正己烷/異丙醇混合溶劑、正己烷/無水乙醇混合 溶劑中的一種。3. 根據權利要求2所述的一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法， 其特征在于，所述的正己烷/異丙醇混合溶劑的體積比例為90:10~80:20。4. 根據權利要求3所述的一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法， 其特征在于，所述的正己烷/異丙醇混合溶劑的體積比例為90:10~85:15。5. 根據權利要求2所述的一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法， 其特征在于，所述的正己烷/無水乙醇混合溶劑的體積比例為95:5~84:16。6. 根據權利要求5所述的一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法， 其特征在于，所述的正己烷/無水乙醇混合溶劑的體積比例為92:8~85:15。7. 根據權利要求1所述的一種通過HPLC分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的方法， 其特征在于，包括以下步驟： (1) (±)_苯甲酰科立內酯供試品用流動相溶解，配制成ImL含（±)_苯甲?？屏弱? ~I Oyg的供試品溶液;進樣量為1~20yL; (2) 設置正己烷/異丙醇流動相流速為0.8~1.5mL/min，正己烷/無水乙醇流動相流速 為:0.3~1.5mL/min，檢測波長為210~235nm，柱溫為室溫； (3) 取步驟（1)所制供試品溶液5~IOyL注入手性色譜柱（250 X 4 · 6mm，5 · Ομπι)，完成苯 甲?？屏弱τ钞悩嬻w的分析與分離。8. 如權利要求7所述的一種分析分離苯甲?？屏弱τ钞悩嬻w的HPLC方法，其特征 在于，步驟(2)中所述正己烷/異丙醇流動相流速為0.9~1.5mL/min，正己烷/無水乙醇流動 相流速為〇 · 4~1 · OmL/min;檢測波長為230nm〇
【文檔編號】G01N30/02GK105954447SQ201610574784
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年7月21日
【發(fā)明人】王淑紅, 李黎, 彭悅, 李宇珈, 李志波, 修志明
【申請人】長春百純和成醫(yī)藥科技有限公司