一種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包含丹參鑒別的步驟，所述的丹參鑒別是采用薄層色譜法進(jìn)行丹參的鑒別，并以丹參素鈉為對(duì)照品，以氯仿∶乙酸乙酯∶丙酮∶甲酸體積比為20∶10∶15∶4的混合液為展開(kāi)劑；還包括以橙黃決明素和大黃酚為對(duì)照品，采用高效液相色譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定步驟。本發(fā)明的丹參鑒別方法和決明子含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，在產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程中，用本發(fā)明方法能有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，從而確保復(fù)方草決明茶的臨床療效和安全性。
【專利說(shuō)明】
_種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法。屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，人們的生活節(jié)奏越來(lái)越緊張，加班、熬夜、生活壓力大等導(dǎo) 致生活不規(guī)律，出現(xiàn)了便秘等常見(jiàn)的臨床疾病，長(zhǎng)此以往，體內(nèi)毒素?zé)o法及時(shí)排出，可誘發(fā) 腫瘤等更加嚴(yán)重的疾病。復(fù)方草決明茶具有瀉濁潤(rùn)腸的功能，適用于氣虛腸燥型高脂血癥 的輔助治療，其處方中包含丹參和決明子，但是現(xiàn)行檢測(cè)方法存在缺陷:對(duì)丹參的薄層色譜 法鑒別項(xiàng)以原兒茶酸為對(duì)照，方法專屬性差，不能有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，且展開(kāi)劑中含 苯，對(duì)人體不利;決明子的含量測(cè)定方法復(fù)雜、準(zhǔn)確度低、重現(xiàn)性差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，包含丹參鑒別的步驟， 所述的丹參鑒別是采用薄層色譜法進(jìn)行丹參的鑒別，并以丹參素鈉為對(duì)照品，以氯仿：乙酸 乙酯：丙酮：甲酸體積比為20:10:15:4的混合液為展開(kāi)劑;還包括以橙黃決明素和大黃酚為 對(duì)照品，采用高效液相色譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定步驟，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)。
[0004] 本發(fā)明所述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于:包含丹參鑒別的步驟，所 述的丹參鑒別是采用薄層色譜法進(jìn)行丹參的鑒別，并以丹參素鈉為對(duì)照品，以氯仿：乙酸乙 酯:丙酮：甲酸體積比為20:10:15:4的混合液為展開(kāi)劑。
[0005] 上述薄層色譜法采用硅膠GF254薄層板，展出后以氨蒸氣熏后，置紫外光燈 (365nm)下檢視。
[0006] 上述質(zhì)量檢測(cè)方法還包括以橙黃決明素和大黃酚為對(duì)照品，采用高效液相色譜法 對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定。
[0007]上述質(zhì)量檢測(cè)方法中高效液相色譜的條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充 劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。
[0009]上述質(zhì)量檢測(cè)方法中高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm，理論板數(shù)按大黃酚峰計(jì) 算應(yīng)不低于10000。
[0010] 上述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法中所述的丹參鑒別包括如下步驟：
[0011] (1)復(fù)方草決明茶用水進(jìn)行超聲提取，提取液調(diào)pH值至酸性，用有機(jī)溶劑提取，制 得供試品溶液；
[0012] (2)取丹參素鈉對(duì)照品，制成對(duì)照品溶液；
[0013] (3)吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙 酸乙酯-丙酮-甲酸（20:10:15:4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，經(jīng)氨蒸氣熏，置紫外光燈(365nm)下檢 視。
[0014]具體地，上述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法中所述的丹參鑒別包括如下步驟： [0015] (1)取復(fù)方草決明茶lg，研細(xì)，加水20ml，超聲處理10分鐘，離心，取上清液，用稀鹽 酸調(diào)節(jié)pH值至2,用乙酸乙酯20ml振搖提取，提取液低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為 供試品溶液；
[0016] (2)取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每lml含O.lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0017] (3)照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液2μ1， 對(duì)照品溶液ΙμL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(20: 10:15:4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，瞭干，置氨蒸氣中熏10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。
[0018] 上述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法中所述高效液相色譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行 測(cè)定步驟包括：
[0019] (1)復(fù)方草決明茶用有機(jī)溶劑提取，酸水解，用有機(jī)溶劑提取，制得供試品溶液；
[0020] (2)取橙黃決明素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品，分別制成對(duì)照品溶液；
[0021] (3)分別吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定。
[0022] 具體地，上述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法中所述高效液相色譜法對(duì)決明子的含 量進(jìn)行測(cè)定步驟包括：
[0023] (1)取復(fù)方草決明茶1 g，研細(xì)，加入甲醇50ml，加熱回流2小時(shí)，放冷，濾過(guò)，取濾液 25ml蒸干，殘?jiān)酉←}酸30ml，水浴加熱1小時(shí)，冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml， 合并三氯甲烷液，回收溶劑蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2:1)混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至 25ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；
[0024] (2)取橙黃決明素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品，加無(wú)水乙醇和乙酸乙酯（2:1)混合溶液 制成每lml含橙黃決明素1 Oyg、大黃酚20yg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0025] (3)測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)，分別吸取對(duì)照品 溶液與供試品溶液各?〇μ1，注入高效液相色譜儀測(cè)定，高效液相色譜的條件為：以十八烷基 硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相Β，按如下方式進(jìn)行 梯度洗脫：
[0027] 本發(fā)明所采用的丹參鑒別方法和決明子含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、 重現(xiàn)性好，在產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程中，用本發(fā)明方法能有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，從而確保復(fù)方草 決明茶的臨床療效和安全性。
[0028] 本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的【具體實(shí)施方式】部分予以詳細(xì)說(shuō)明。
【附圖說(shuō)明】
[0029] 圖1是實(shí)施例1和對(duì)比例1供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0030] 圖2是實(shí)施例1中耐用性試驗(yàn)的供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0031] 圖3是實(shí)施例1中耐用性試驗(yàn)的供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0032] 圖4是對(duì)比例2供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0033] 圖5是對(duì)比例2供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0034] 圖6是對(duì)比例2供試品溶液和對(duì)照品溶液的薄層色譜圖。
[0035] 圖7是實(shí)施例2大黃酚對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0036] 圖8是實(shí)施例2橙黃決明素對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0037] 圖9是實(shí)施例2供試品溶液的高效液相色譜圖。
[0038] 圖10是實(shí)施例2陰性對(duì)照液的高效液相色譜圖。
[0039] 圖11是實(shí)施例2橙黃決明素對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0040] 圖12是實(shí)施例2大黃酚對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0041 ]圖13是實(shí)施例2供試品溶液（140304)的高效液相色譜圖。
[0042] 圖14是實(shí)施例2橙黃決明素對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0043] 圖15是實(shí)施例2大黃酚對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0044]圖16是實(shí)施例2供試品溶液（140304)的高效液相色譜圖。
[0045] 圖17是實(shí)施例2橙黃決明素對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0046] 圖18是實(shí)施例2大黃酚對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
[0047]圖19是實(shí)施例2供試品溶液（140304)的高效液相色譜圖。
[0048] 附圖標(biāo)記說(shuō)明
[0049] 圖1、圖4、圖5和圖6中：1、2、3-供試品溶液，4-丹酚酸B對(duì)照品溶液，5-丹參素鈉對(duì) 照品溶液，6-陰性對(duì)照液。
[0050] 圖2、圖3中：1、2、3_供試品溶液，4-丹參素鈉對(duì)照品溶液，5-陰性對(duì)照液。
【具體實(shí)施方式】
[0051]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描 述的【具體實(shí)施方式】?jī)H用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0052] 實(shí)施例1 [0053]丹參的鑒別 [0054] 1鑒別方法
[0055] (1)取復(fù)方草決明茶1袋內(nèi)容物粉碎，過(guò)三號(hào)篩，取lg，加水20ml使溶解，離心，取上 清液，用稀鹽酸調(diào)pH值至2,加乙酸乙酯20ml，振搖提取，回收提取液至干，殘?jiān)蛹状?ml使 溶解，作為供試品溶液；
[0056] (2)取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液;取不 含丹參的陰性樣品lg，加水20ml使溶解，離心，取上清液，用稀鹽酸調(diào)pH值至2,加乙酸乙酯 20ml，振搖提取，回收提取液至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為陰性供試品溶液；
[0057] (3)照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B薄層色譜法，吸取供試品溶液2μ1，對(duì)照品 溶液各ΙμL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷：乙酸乙酯:丙酮：甲酸= 20:10:15:4 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置氨蒸氣中熏10分鐘后，置紫外光燈(365nm)下檢視，結(jié)果見(jiàn)附 圖1。
[0058]由圖可知以丹參素鈉為對(duì)照，以氯仿：乙酸乙酯：丙酮：甲酸= 20:10:15:4為展開(kāi) 劑，供試品色譜中在與丹參素鈉對(duì)照品相應(yīng)位置上有相同顏色的熒光斑點(diǎn)，分離效果較好， 陰性無(wú)干擾。
[0059] 2耐用性試驗(yàn)
[0060] 取供試品溶液、陰性供試品溶液各2μ1及對(duì)照品溶液?μL分別點(diǎn)于不同來(lái)源的硅膠 G薄層板上(圖2為自制手鋪板，圖3為ΜΝ預(yù)制板）。
[0061] 結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且 陰性樣品均無(wú)干擾。結(jié)果表明，該方法的專屬性和耐用性均較好。
[0062] 對(duì)比例1 [0063]丹參的鑒別
[0064] 以丹酚酸Β為對(duì)照品，供試品溶液、對(duì)照品溶液的制備方法以及測(cè)定方法同實(shí)施例 1，結(jié)果見(jiàn)附圖1。
[0065] 由圖可知，供試品色譜中在與丹酚酸Β對(duì)照品相應(yīng)位置上有相同顏色的熒光斑點(diǎn)， 但對(duì)照品色譜斑點(diǎn)有拖尾，鑒別效果不及實(shí)施例1。
[0066] 對(duì)比例2 [0067]丹參的鑒別
[0068] (1)供試品溶液的制備方法同實(shí)施例1;
[0069] (2)分別以丹參素鈉和丹酚酸Β為對(duì)照品，對(duì)照品的制備方法同實(shí)施例1;
[0070] (3)測(cè)定方法同實(shí)施例1，分別以①三氯甲烷-丙酮-甲酸（25:10:4)、②三氯甲烷-丙酮-甲酸-水(20:10:4:0.5)、③三氯甲烷-丙酮-甲酸-水(25:10:4:0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)， 取出，晾干，置氨蒸氣中熏10分鐘后，置紫外光燈(365nm)下檢視，見(jiàn)附圖4、5、6。
[0071] 由圖可知，展開(kāi)劑①供試品色譜中在與丹酚酸B和丹參素鈉對(duì)照品相應(yīng)位置上有 相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但對(duì)照品色譜斑點(diǎn)有拖尾;展開(kāi)劑②供試品色譜中在與丹酚酸B和丹 參素鈉對(duì)照品相應(yīng)位置上有相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但與丹參素鈉相應(yīng)位置上背景有干擾； 展開(kāi)劑③陰性有干擾。
[0072]以上試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的復(fù)方?jīng)Q明茶質(zhì)量檢測(cè)方法，即包含丹參鑒別的步驟， 所述的丹參鑒別是采用薄層色譜法進(jìn)行丹參的鑒別，以丹參素鈉為對(duì)照品，以氯仿：乙酸乙 酯:丙酮：甲酸體積比為20:10:15:4的混合液為展開(kāi)劑，采用硅膠GF254薄層板，展出后以氨 蒸氣熏后，置紫外光燈(365nm)下檢視，方法專屬性強(qiáng)，分離效果好，重現(xiàn)性好，能夠有效測(cè) 定復(fù)方?jīng)Q明茶的質(zhì)量。
[0073] 實(shí)施例2
[0074]復(fù)方?jīng)Q明茶的含量測(cè)定
[0075] 1測(cè)定方法
[0076] 1.1儀器、試藥及試劑
[0077] 儀器：島津LC-2010C HT高效液相色譜儀：日本，島津公司；色譜柱:Diamonsil C18 150 X4.6mm?5um；Aglient ZOBARX C18 250 X4.6mm；Phenomenex luna C18 250X4.6mm； SCL-LC-lOAvp紫外可見(jiàn)檢測(cè)器;電子天平:CP22?，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。
[0078]對(duì)照品：橙黃決明素（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：111900-201202)，大黃 酚（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110796-200513)。
[0079]試劑：乙腈(色譜純）；供試品及對(duì)照品制備所用試劑均為分析純。
[0080] 樣品：復(fù)方草決明茶（批號(hào)：140302,140304,140311)。
[0081] 1.2測(cè)定
[0082] (1)取橙黃決明素對(duì)照品、大黃酚對(duì)照品，精密稱定，加無(wú)水乙醇和乙酸乙酯（2:1) 混合溶液制成每lml含橙黃決明素10yg、大黃酚20yg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0083] (2)取復(fù)方草決明茶(批號(hào)：140302)，研細(xì)，過(guò)三號(hào)篩，取lg，精密稱定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的 重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘?jiān)酉←}酸30ml，置水浴中加熱水解1小 時(shí)，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)?無(wú)水乙醇和乙酸乙酯（2:1)混合溶液適量使溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻， 濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0084] (3)測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)，分別精密吸取對(duì) 照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙 腈為流動(dòng)相Α，以0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相Β，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為 284nm，理論板數(shù)按大黃酸峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。
[0085]表1梯度洗脫條件
[0087] 2測(cè)定方法的評(píng)價(jià)
[0088] 2.1物質(zhì)測(cè)定
[0089] 采用如本發(fā)明測(cè)定方法，所得大黃酚對(duì)照品溶液、橙黃決明素對(duì)照品溶液和供試 品溶液的色譜圖見(jiàn)附圖7、8、9。
[0090] 通過(guò)對(duì)比可以看出，供試品溶液在與橙黃決明素和大黃酚相同的保留時(shí)間處存在 吸收峰，表明檢測(cè)效果好、方法專屬性強(qiáng)。
[0091] 2.2陰性對(duì)照試驗(yàn)
[0092] 在處方中除去決明子藥材，按處方中相同的比例和制備方法制成陰性制劑，用本 發(fā)明供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液，按相同測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，觀察在與橙黃 決明素和大黃酚相同保留時(shí)間處是否存在吸收峰，結(jié)果見(jiàn)附圖10。
[0093] 結(jié)果表明，在選定條件下測(cè)得的陰性對(duì)照溶液液相色譜中，在與2個(gè)對(duì)照品色譜峰 相同保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，因此說(shuō)明選定的條件測(cè)定該2種成分具有較強(qiáng)的專屬性。
[0094] 2.3方法學(xué)考察（除耐用性試驗(yàn)外，其余方法學(xué)考察項(xiàng)目選取樣品批號(hào)均為 140311)
[0095] 2.3.1線性關(guān)系考察
[0096]分別精密稱取橙黃決明素、大黃酚對(duì)照品7.52mg、10.43mg，置10ml量瓶中，加無(wú)水 乙醇-乙酸乙酯（2:1)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻（1 )，從（1)中精密吸取5ml，置10ml量瓶 中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2:1)稀釋至刻度，搖勻（2)，從（2)中精密吸取2ml，置10ml量瓶 中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2:1)稀釋至刻度，搖勻（3)，從（3)中精密吸取2ml，置10ml量瓶 中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2:1)稀釋至刻度，搖勻（4)，從(4)中精密吸取2ml，置10ml量瓶 中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻(5)。分別吸取10μ1，注入液相色譜儀，按實(shí)施例2中2.1.2(C)相 同條件測(cè)定，記錄積分值，并以峰面積的積分值為橫坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn) 曲線，計(jì)算回歸方程，數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。
[0097]表2線性關(guān)系考察
[0099] 橙黃決明素回歸方程為：Y= 1.13 X 10-7X+0.0703，r = 0.999,橙黃決明素在 0.0286yg~7.144yg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；大黃酚的回歸方程為：Y = 3.31X10-7X+ 0.0149，r = 1.000，大黃酚在0.042yg~10.43yg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
[0100] 2.3.2重復(fù)性試驗(yàn)
[0101]分別精密量取復(fù)方草決明茶(140311)樣品6份，按本發(fā)明方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣 品的RSD%值，結(jié)果見(jiàn)表3。
[0102]表3重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表(n = 6)
[0104] 結(jié)果表明，橙黃決明素和大黃酚含量的RSD分別為1.8%和2.5%，此含量測(cè)定方法 的重現(xiàn)性良好。
[0105] 2.3.3準(zhǔn)確度試驗(yàn)
[0106] (1)橙黃決明素準(zhǔn)確度試驗(yàn)
[0107]精密量取已知含量(含量為〇.494mg/g)的樣品9份，每份各0.5g，分別加入橙黃決 明素對(duì)照品溶液各1.80ml、2.20ml、3.00ml (濃度為0.108205mg/ml)，按本發(fā)明供試品溶液 制備方法制備，并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。
[0108] 平均回收率為100.5%，RSD = 2.1 %，本檢測(cè)方法準(zhǔn)確度較好。
[0109] (2)大黃酚的準(zhǔn)確度試驗(yàn)
[01 ?0]精密稱取已知含量(含量為0.680mg/g)的樣品9份，每份各0.5g，分別加入大黃酸 對(duì)照品溶液各2.30ml、3.00ml、4.00ml (濃度為0.1008mg/ml)，按本發(fā)明供試品溶液制備方 法制備，并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。
[0111] 平均回收率為91.6%，RSD = 4.5%(n = 9)，本檢測(cè)方法準(zhǔn)確度較好。
[0112] 表4橙黃決明素回收率測(cè)定結(jié)果
[0114]表5大黃酚回收率測(cè)定結(jié)果
[0116] 2.4耐用性試驗(yàn)
[0117]取本品含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液(140304)，采用本發(fā)明含量測(cè)定高效液相色譜條 件，分別以下列色譜柱進(jìn)行測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果重現(xiàn)性好，見(jiàn)表6。
[0118]表6含量測(cè)定結(jié)果
[0120] (l)Aglient ZOBAX C18(250X4.6mm)，色譜圖見(jiàn)附圖 11、12、13;
[0121] (2)Diamonsil C18(150X4.6mm)，5ym，色譜圖見(jiàn)附圖 14、15、16;
[0122] (3)Phenomenex luna C18(250X4.6mm)，色譜圖見(jiàn)附圖 17、18、19〇
[0123] 由圖11-19可以看出，對(duì)于同一色譜柱，供試品溶液在與橙黃決明素和大黃酚相同 的保留時(shí)間處存在吸收峰，表明檢測(cè)效果好、方法專屬性強(qiáng)、耐用性好。
[0124] 以上結(jié)合附圖詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí) 施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn) 單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于包含丹參鑒別的步驟，所述的丹參 鑒別是采用薄層色譜法進(jìn)行丹參的鑒別，并以丹參素鈉為對(duì)照品，以氯仿：乙酸乙酯:丙酮： 甲酸體積比為20:10:15:4的混合液為展開(kāi)劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述薄層色譜法采用硅膠GF254薄 層板，展出后以氨蒸氣熏后，置紫外光燈(365nm)下檢視。3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于還包括以橙黃決明素和大黃酚 為對(duì)照品，采用高效液相色譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中高效液相色譜的條件為：以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相B，按如下方式進(jìn)行梯度 洗脫：5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中高效液相色譜的檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm，理論 板數(shù)按大黃酚峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5所述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的丹參鑒別 包括如下步驟： (1) 復(fù)方草決明茶用水進(jìn)行超聲提取，提取液調(diào)pH值至酸性，用有機(jī)溶劑提取，制得供 試品溶液； (2) 取丹參素鈉對(duì)照品，制成對(duì)照品溶液； (3) 吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙 酯-丙酮-甲酸(20:10:15:4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)后，經(jīng)氨蒸氣熏，置紫外光燈(365nm)下檢視。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的丹參鑒別包 括如下步驟： (1) 取復(fù)方草決明茶lg，研細(xì)，加水20ml，超聲處理10分鐘，離心，取上清液，用稀鹽酸調(diào) 節(jié)pH值至2,用乙酸乙酯20ml振搖提取，提取液低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試 品溶液； (2) 取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每lml含0. lmg的溶液，作為對(duì)照品溶液； (3) 照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液2μ1，對(duì)照 品溶液ΙμL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（20:10: 15:4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置氨蒸氣中熏10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7所述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的高效液相 色譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定步驟包括： (1) 復(fù)方草決明茶用有機(jī)溶劑提取，酸水解，用有機(jī)溶劑提取，制得供試品溶液； (2) 取橙黃決明素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品，分別制成對(duì)照品溶液； (3) 分別吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀測(cè)定。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述復(fù)方草決明茶的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的高效液相色 譜法對(duì)決明子的含量進(jìn)行測(cè)定步驟包括： (1) 取復(fù)方草決明茶lg，研細(xì)，加入甲醇50ml，加熱回流2小時(shí)，放冷，濾過(guò)，取濾液25ml 蒸干，殘?jiān)酉←}酸30ml，水浴加熱1小時(shí)，冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml，合并 三氯甲烷液，回收溶劑蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇-乙酸乙酯(2:1)混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至25ml 量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液； (2) 取橙黃決明素對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品，加無(wú)水乙醇和乙酸乙酯（2:1)混合溶液制成 每lml含橙黃決明素10yg、大黃酚20yg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液； (3) 測(cè)定:照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)，分別吸取對(duì)照品溶液 與供試品溶液各1〇μ1，注入高效液相色譜儀測(cè)定，高效液相色譜的條件為：以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相Β，按如下方式進(jìn)行梯度 洗脫：
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105866274SQ201610203876
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月5日
【發(fā)明人】劉梅森, 黃靖梅, 筆雪艷, 金星, 宋莉萍, 高俊清, 張洪昌, 劉淑梅, 陳立紅, 劉德峰, 周振東, 李佳, 李佳一, 劉洋
【申請(qǐng)人】牡丹江友搏藥業(yè)股份有限公司