大型溞測(cè)定農(nóng)藥懸浮劑毒性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種大型潘測(cè)定農(nóng)藥懸浮劑毒性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 大型潘是世界范圍內(nèi)廣泛分布的甲殼綱枝角類(lèi)無(wú)脊椎動(dòng)物，它W浮游植物為食， 同時(shí)又是魚(yú)類(lèi)和大型無(wú)脊椎動(dòng)物的巧料，是水生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)的重要環(huán) 節(jié)。由于其分布廣、繁殖快、生活周期短、易于培養(yǎng)和馴化，對(duì)環(huán)境中的毒物敏感且實(shí)驗(yàn)方法 簡(jiǎn)便，因此受到眾多國(guó)家毒理學(xué)工作者的重視?，F(xiàn)已成為一種標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)生物，被廣泛用于水 生生物毒理學(xué)的研究中。
[0003] 目前，已經(jīng)廣泛采用大型潘進(jìn)行農(nóng)藥環(huán)境安全性評(píng)價(jià)的研究，但是采用大型潘作 為農(nóng)藥懸浮劑毒性篩選模型的研究較少，缺乏相關(guān)的研究數(shù)據(jù)評(píng)估模型的實(shí)用性和可靠 性。因此，提供一種易操作、實(shí)用性強(qiáng)的大型潘篩選農(nóng)藥懸浮劑毒性的方法尤其重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種大型潘測(cè)定農(nóng)藥懸浮 劑毒性的方法，具有操作簡(jiǎn)便、實(shí)用性強(qiáng)、檢測(cè)速度快，精確度高等優(yōu)勢(shì)。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，提供了一種大型潘測(cè)定農(nóng)藥懸浮劑毒性的方法，包括W下 步驟：
[0006] (1)將農(nóng)藥懸浮劑用Elemlt M4培養(yǎng)液溶解制成農(nóng)藥儲(chǔ)備液；
[0007] (2)將所述農(nóng)藥儲(chǔ)備液與Elendt M4培養(yǎng)液混合配制成梯度濃度的混合液，將所述 混合液做為大型潘的生活用水，持續(xù)培養(yǎng)48h，培養(yǎng)過(guò)程中，每隔2地時(shí)記錄大型潘的生物效 應(yīng)參數(shù)和所述混合液的理化參數(shù)；
[000引（3)根據(jù)大型潘的生物效應(yīng)參數(shù)和農(nóng)藥儲(chǔ)備液的理化參數(shù)計(jì)算農(nóng)藥對(duì)半數(shù)抑制濃 度ECsq，判斷農(nóng)藥懸浮劑的毒性。
[0009] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟(2)中所述大型潘為來(lái)源于同一母系的孤雌繁殖3 代W上，出生時(shí)間小于2地的非頭胎健康幼潘。
[0010] 上述的方法，優(yōu)選的，在所述步驟(2)進(jìn)行的過(guò)程中，所述大型潘不喂食。
[0011] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟（2)中所述Elendt M4培養(yǎng)液為空氣曝氣累曝氣處 理24hW上的Elemlt M4培養(yǎng)液。
[001 ^ 上述的方法，優(yōu)選的，所述Elemlt M4培養(yǎng)液的抑為6.0~9.0，硬度為140~250mg/ U溶解氧^3mg/L。
[0013] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟(2)進(jìn)行的過(guò)程中，所述大型潘不離開(kāi)水，轉(zhuǎn)移時(shí)用 滴管轉(zhuǎn)移。
[0014] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述生物效應(yīng)參數(shù)為大型潘的抑制率;所述 理化參數(shù)為混合液的水溫、pH值、溶解氧含量。判斷所述大型潘抑制的標(biāo)準(zhǔn)為輕晃燒杯，潘 在15s內(nèi)不游動(dòng)視為活動(dòng)抑制，但允許附肢微弱擺動(dòng)。
[0015] 上述的方法，優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述培養(yǎng)過(guò)程控制水溫為18°C~22°C、每日 光照16h、溶解氧濃度不低于3. Omg/L。
[0016] 上述的方法，優(yōu)選的，所述農(nóng)藥懸浮劑的毒性的判斷標(biāo)準(zhǔn)為:EC50> 10.0 mg a. i . /L 表示低毒，l.OOmg a.i./L<EC 己 〇<10.0mg a.i./L 表示中毒，O.lOOmg a.i./L<ECs〇< l.OOmg a.i./L表示高毒，EC5〇<0.100mg a.i./L表示劇毒。
[0017] 上述的方法，優(yōu)選的，所述大型潘測(cè)定農(nóng)藥懸浮劑毒性的方法還設(shè)有空白對(duì)照組； 所述空白對(duì)照組WElendt M4培養(yǎng)液為大型潘的生活用水。所述空白對(duì)照組的受抑制率不 能超過(guò)10%則證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0019] (1)本發(fā)明提供了一種操作簡(jiǎn)便、實(shí)用性強(qiáng)的模式生物大型潘篩選農(nóng)藥懸浮劑毒 性的方法;該方法可初步判斷出農(nóng)藥懸浮劑的毒性，速度快，精確度高。
【具體實(shí)施方式】
[0020] W下結(jié)合具體優(yōu)選的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但并不因此而限制本發(fā)明的 保護(hù)化圍。
[0021 ]實(shí)施例
[0022] W下實(shí)施例中所采用的材料和儀器均為市售。
[0023] 實(shí)施例1:
[0024] (1)農(nóng)藥儲(chǔ)備液的配制：
[00巧]稱(chēng)取21%嚷蟲(chóng)嗦懸浮劑1.1905旨，用61611扣14培養(yǎng)液溶解并定容至10〇1^容量瓶 中，配制成濃度為2.50X 103mg a.i ./L的農(nóng)藥儲(chǔ)備液。
[00%] (2)試驗(yàn)液的配制：
[0027] Elemlt M4培養(yǎng)液的制備:將Elendt M4培養(yǎng)液進(jìn)行空氣曝氣累曝氣處理24hW上， 檢測(cè)Elemlt M4培養(yǎng)液的pH為7.18，硬度為175mg/L，溶解氧為7.83。
[002引實(shí)驗(yàn)組:依次移取儲(chǔ)備液0.100血、0.180血、0.324mL、0.583mL、1.050血步驟（1)中 的農(nóng)藥儲(chǔ)備液分別用Elemlt M4培養(yǎng)液定容至250血容量瓶中，得到濃度為1 .OOmg a. i ./L、 l.SOmg a.i./L、3.24mg a.i./L、5.83mg a.i./L、10.5mg a.i./L的試驗(yàn)液。
[0029] 空白對(duì)照組(CKi):WElerKlt Μ婚養(yǎng)液作為試驗(yàn)液。
[0030] (3)染毒
[0031] 挑選來(lái)源于同一母系的孤雌繁殖6代，出生時(shí)間在化~24h的非頭胎健康幼潘，隨 機(jī)加入到上述步驟(2)的試驗(yàn)液中。每燒杯5只潘，進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程控制水溫為20°C、每 日光照下培養(yǎng)16h，黑暗培養(yǎng)化、溶解氧濃度不低于3.Omg/L。大型潘在染毒過(guò)程中不喂食。
[0032] 在染毒開(kāi)始后，于第24h、4她測(cè)定并記錄燒杯中試驗(yàn)液的溫度、pH值、溶氧量等。于 染毒后2地、4她觀察并記錄大型潘的抑制數(shù)。判斷所述大型潘抑制的標(biāo)準(zhǔn)為輕晃燒杯，潘在 15s內(nèi)不游動(dòng)視為活動(dòng)抑制，但允許附肢微弱擺動(dòng)。
[0033] 表1為21%嚷蟲(chóng)嗦懸浮劑對(duì)大型潘急性毒性活動(dòng)抑制試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄結(jié)果。表2為試 驗(yàn)期間各濃度組的水溫，pH值，溶解氧的檢測(cè)結(jié)果。
[0034] 表1:21 %嚷蟲(chóng)嗦懸浮劑對(duì)大型潘急性毒性試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表
[0035]
[0036] 在處理過(guò)程中，大型潘出現(xiàn)了游動(dòng)不積極，原地打轉(zhuǎn)，附肢和觸角微弱擺動(dòng)等生物 抑制效應(yīng)，濃度越高時(shí)間越久，癥狀也會(huì)更加的嚴(yán)重。
[0037] 表2:水缸中生活用水的水溫、pH值、溶解氧的檢測(cè)結(jié)果表
[00；3 引
[0039]
[0040] 實(shí)驗(yàn)組2至4的化、溫度、溶解氧含量等均在實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組5組成的范圍內(nèi)。
[0041] (4)數(shù)據(jù)處理
[0042] 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0，W處理濃度的對(duì)數(shù)值為自變量x，W(校正)抑制率的機(jī)率 值為因變量y，建立毒力回歸方程。計(jì)算21 %嚷蟲(chóng)嗦懸浮劑對(duì)大型潘的的抑制濃度ECso和 95 %置信限，具體計(jì)算結(jié)果參見(jiàn)表3。
[0043] 表3:21 %嚷蟲(chóng)嗦懸浮劑水分散粒劑對(duì)大型潘急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表
[0044]
[0045] (5)結(jié)果評(píng)價(jià)
[0046] 根據(jù)ECsg值判斷農(nóng)藥毒級(jí)。毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：低毒化C5G> 10 . Omg a. i . /L)，中毒 (l.OOmg a.i./L<EC已〇<10.0mg a.i./L)，高毒（O.lOOmg a.i./L<EC已〇<