一種多組分綜合量化的中藥質(zhì)量評(píng)控方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請(qǐng)涉及一種多組分綜合量化的中藥質(zhì)量的評(píng)價(jià)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)一直是中藥研宄與生產(chǎn)中的熱點(diǎn)和難點(diǎn),也是中藥現(xiàn)代化的重要基 礎(chǔ)和關(guān)鍵。目前,中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)大多參照植物化學(xué)和西藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的模式,采用單一測(cè)定藥 材中某些化學(xué)成分的含量來評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量。從傳統(tǒng)的中醫(yī)藥觀點(diǎn)來看,單一成分的控制 難以真正反映中藥的功效,尤其是復(fù)方制劑,檢測(cè)任何一種指標(biāo)成分均不能反映其所體現(xiàn) 的整體療效。生物評(píng)價(jià)因具有藥效相關(guān)、整體可控等技術(shù)優(yōu)勢(shì),符合中醫(yī)藥特點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 控制模式及方法[1],已成為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的重要發(fā)展方向之一,并且已經(jīng)有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào) 道[2、3]。
[0003] 大黃別名將軍、黃良、火參、膚如等,是我國(guó)"中藥四維"之一。2010版《中國(guó)藥典》 收載的正品大黃藥材的3個(gè)重要基原包括:寥科植物掌葉大黃RheumpalmatumL.、唐古特 大黃RheumtanguticumMaxim,exBalf?或藥用大黃RheumofficinaleBaill.的干燥根 和根莖[4],主產(chǎn)于甘肅東南部、四川西部、青海東部、西藏東部等高寒地區(qū),具有瀉下攻積, 瀉火解毒,涼血止血,活血祛瘀,清瀉濕熱的功效[5]。但是現(xiàn)有的大黃藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn), 多數(shù)測(cè)定以經(jīng)過鹽酸水解后的游離蒽醌苷元含量作為其質(zhì)量?jī)?yōu)劣的評(píng)價(jià)指標(biāo)[4],這與大 黃瀉下通便的臨床療效關(guān)聯(lián)度不強(qiáng),不能整體全面的評(píng)價(jià)大黃的質(zhì)量?,F(xiàn)有文獻(xiàn)表明[6、7、 8],大黃中蒽醌類和二蒽酮類成分是其瀉下通便的主要藥效成分。
[0004] 生物效價(jià)的定義:所謂生物效價(jià)通常是以其完成某種特定的生理作用的程度作指 標(biāo)來衡量,而且標(biāo)準(zhǔn)參比物作為100 %進(jìn)行比較而得,故生物效價(jià)是相對(duì)值,可大于或小于 100%〇
[0005] 文獻(xiàn)[9、10]雖然涉及了基于小鼠復(fù)方地芬諾酯便秘模型的致瀉效價(jià)測(cè)定,但是 文獻(xiàn)中均采用的是大黃的水煎煮粗提物給藥,并不能具體的反映出單個(gè)致瀉效應(yīng)成分的瀉 下強(qiáng)度,這也就無法與其含量測(cè)定結(jié)果相關(guān)聯(lián)。因此是一種粗略的效價(jià)測(cè)定。
[0006] 鑒于大黃飲片是臨床用于便秘、慢性腎病、肝膽疾病的常用中藥,如何評(píng)價(jià)不同批 次、不同產(chǎn)地、不同來源的大黃飲片質(zhì)量穩(wěn)定性、均一性是擺在人們面前的一個(gè)亟須關(guān)注、 解決的難點(diǎn),因此開發(fā)一種能從整體上反映大黃瀉下療效的生物效價(jià)測(cè)定方法顯得十分必 要和急迫。
[0007] 參考文獻(xiàn)
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【發(fā)明內(nèi)容】
[0018] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。
[0019] 本發(fā)明的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,包括(1)測(cè)定與所述中藥的臨床療效相關(guān)的活性成 分的含量;(2)測(cè)定所述活性成分的生物效價(jià);(3)利用下述公式I來計(jì)算所述中藥的活 性成分的效應(yīng)成分當(dāng)量值:(4)利用效應(yīng)成分當(dāng)量值通過適當(dāng)換算得到藥材的實(shí)際用量數(shù) 值;
[0020] EV=A:XC!+A2XC2+......AjXCj-------公式I
[0021] 其中EV表示活性成分的效應(yīng)成分當(dāng)量值;
[0022] Ai表示活性成分1的效應(yīng)成分當(dāng)量系數(shù);
[0023] Q表示每1克中藥中活性成分1的含量(mg/g);
[0024] A2表示活性成分2的效應(yīng)成分當(dāng)量系數(shù);
[0025] C2表示每1克中藥中的活性成分2的含量(mg/g);
[0026] Ai表示活性成分i的效應(yīng)成分當(dāng)量系數(shù);
[0027] Q表示每1克中藥中活性成分1的含量(mg/g)。
[0028] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種基于大黃原藥材或大黃飲片的致瀉效應(yīng)當(dāng)量因 子來調(diào)節(jié)大黃原藥材或大黃飲片的用量的方法。
[0029] 本發(fā)明的基于大黃原藥材或大黃飲片的致瀉效應(yīng)當(dāng)量因子來調(diào)節(jié)大黃原藥材或 大黃飲片的用量的方法包括以下步驟:
[0030] (a)采用液相色譜法測(cè)量所述大黃原藥材或大黃飲片中的蘆薈大黃 素-8-0- -D-葡萄糖苷、大黃酸-8-0- -D-葡萄糖苷、大黃酚-8-0- -D-葡萄糖苷、大黃 素-8-0-0 -D-葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、 大黃酚、大黃素甲醚、番瀉苷A、番瀉苷B共計(jì)12種活性成分的含量;
[0031] (b)利用公式II計(jì)算待測(cè)大黃藥材的致瀉效應(yīng)成分當(dāng)量值EV:
[0032] EV= 1. 000XQ+0. 647XC2+0. 659XC3+0. 722XC4+0. 455XCs+0. 475XC6+0. 559X C7+0. 383XC8+0. 468XC9+0. 273XC10+0. 263XCn+0. 521XC12-------公式II
[0033] Q代表每1克大黃藥材/飲片中的番瀉苷A的含量,mg/g;
[0034] C2代表每1克大黃藥材/飲片中的番瀉苷B的含量,mg/g;
[0035] C3代表每1克大黃藥材/飲片中的蘆薈大黃素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量,mg/ g;
[0036] C4代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃酸-8-0- 0 -D-葡萄糖苷的含量,mg/g;
[0037] C5代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃酚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量,mg/g;
[0038] C6代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃素-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量,mg/g;
[0039] C7代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃素甲醚-8-0-0 -D-葡萄糖苷的含量,mg/ g;
[0040] C8代表每1克大黃藥材/飲片中蘆薈大黃素的含量,mg/g;
[0041] C9代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃酸的含量,mg/g;
[0042] C1(l代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃酚的含量,mg/g;
[0043] Cn代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃素的含量,mg/g;
[0044] C12代表每1克大黃藥材/飲片中的大黃素甲醚的含量,mg/g。
[0045] (c)根據(jù)計(jì)算得到的致瀉效應(yīng)成分當(dāng)量值EV來調(diào)節(jié)大黃原藥材或大黃飲片的用 量。
[0046] 在一個(gè)實(shí)施方案中,步驟(a)包括:
[0047] 色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,C18柱;
[0048] 流動(dòng)相:以甲醇(A)_0. 1 %磷酸水溶液⑶為流動(dòng)相;
[0049] 流動(dòng)相流速:0? 1-0. 4ml/min;
[0050] 洗脫條件:0 ~5min:38 - 43 (A),5 ~7min:43 - 52 (A),7 ~12min:52 - 57 (A), 12 ~15min:57 - 72 (A),15 ~17min:72 - 79 (A),17 ~20min:79 - 85 (A);
[0051] 檢測(cè)波長(zhǎng):250-420nm;
[0052] 柱溫:22-42°C;
[0053] 進(jìn)樣量:1. 0-4. 0u1 ;
[0054] 理論塔板數(shù)按大黃素甲醚計(jì)算應(yīng)不低于50000 ;
[0055] 對(duì)照品溶液的配制:
[0056] 以色譜級(jí)甲醇作溶劑;精密稱取蘆薈大黃素-8-0-0 -D-葡萄糖苷等10個(gè)對(duì)照品 適量置于棕色容量瓶,配制成濃度為50yg/ml、55yg/ml、35yg/ml、20yg/ml、15yg/ml、 8yg/ml、10yg/ml、7yg/ml、8yg/ml、7yg/ml的混合對(duì)照品溶液。
[0057] 待測(cè)供試品溶液的配制:
[0058] 取大黃粉末0. 20g(過四號(hào)篩),精密稱定,置50ml棕色容量瓶中,精密加入25ml 甲醇,稱定重量,超聲處理60分鐘,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,取上清液過 0. 22ym微孔濾膜,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0059] 測(cè)定:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2y1進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算峰面積,按 照外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)定含量。
[0060] 超高效液相色譜儀:本發(fā)明中優(yōu)選WatersAcquity超高效液相色