一種羊絨與羊毛的鑒別方法、用于該方法的標(biāo)志物肽段的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及紡織品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種羊絨與羊毛的鑒別方法、用于該 方法的標(biāo)志物肽段。
【背景技術(shù)】
[0002] 山羊絨屬于稀有的特種動物纖維，素有"纖維鉆石"和"軟黃金"之稱。中國是世 界最大的羊絨生產(chǎn)國，羊絨產(chǎn)量占世界總量的75%左右。中國也是世界第一大羊絨輸出國， 羊絨及其制品年出口總額超過15億美元，同時國內(nèi)的羊絨制品市場也十分廣闊。
[0003] 在巨大的經(jīng)濟利益驅(qū)使下，行業(yè)內(nèi)摻雜使假和假冒偽劣等現(xiàn)象反復(fù)出現(xiàn)，這些都 嚴重妨礙了羊絨產(chǎn)業(yè)的健康、良性、可持續(xù)性發(fā)展?，F(xiàn)今市場上對羊絨類紡織纖維產(chǎn)品的混 合摻假多為以羊毛等低價值原料摻入珍稀的山羊絨原料中，制成的織物在形貌和手感上都 極難分辨。
[0004] 目前對羊絨產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗方法以物理性的顯微觀察法為主，由檢驗人員對纖維 的細度、異型纖維率、含雜率、長度、強度、伸長度等進行檢驗（參見《關(guān)于山羊絨國家質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)的制定意見》）。這類檢測方法需要檢驗人員接觸過大量的羊絨樣品，積累數(shù)十年的實 踐經(jīng)驗，主觀性強。除了最常用的光學(xué)顯微鏡檢測法，國外研宄者也嘗試過使用掃描電鏡觀 察紡織纖維的表面形態(tài)和精細結(jié)構(gòu)，但這種方法實驗成本高、操作繁瑣，而且無法區(qū)分與羊 絨纖維形、結(jié)構(gòu)非常近似的其他種類纖維，其中就以羊毛的混淆作用最為突出。另外，研宄 者也通過分析纖維材料中的脂質(zhì)分子、DNA序列差異或者制備特異性識別羊絨的抗體來鑒 別羊絨成分，這類探索性的方法往往受到生產(chǎn)過程中多種化學(xué)處理（比如漂白、染色）的干 擾，使得結(jié)果出現(xiàn)偏差。因而行業(yè)內(nèi)亟需一種科學(xué)、客觀、準(zhǔn)確的羊絨類紡織纖維產(chǎn)品成分 鑒別分析新技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種羊絨與羊毛的鑒別方法、用于該 方法的標(biāo)志物肽段，用以解決現(xiàn)有技術(shù)中缺乏一種用以區(qū)分羊絨與羊毛的、簡便、快速且準(zhǔn) 確的鑒別方法的技術(shù)缺陷。
[0006] 本發(fā)明解決的另一技術(shù)問題是提供一種以標(biāo)志性氨基酸序列為檢測、鑒定依據(jù)的 羊絨、羊毛鑒別方法。
[0007] 本發(fā)明解決的再一技術(shù)問題是提供一種專用于上述方法的羊絨標(biāo)志性肽段；
[0008] 本發(fā)明解決的又一技術(shù)問題是提供一種專用于上述方法的羊毛標(biāo)志性肽段。
[0009] 為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0010] 一種羊絨與羊毛的鑒別方法，其特征在于包括以下步驟：
[0011] 1)自待測樣品中提取總蛋白質(zhì)；
[0012] 2)檢測步驟1)所述的總蛋白質(zhì)中是否含有：序列為YEEEVALR的羊毛標(biāo)志性肽段 或序列為QCCESNLEPLFSGYIETLR的羊絨標(biāo)志性肽段。
[0013] 針對該方法優(yōu)選的，步驟1)包括以下步驟：將待測樣品分別通過乙醇、氯仿-甲醇 溶液浸泡；收集固形物干燥，加入蛋白提取溶液提取；棄沉淀、取上清液待用。
[0014] 針對該方法優(yōu)選的，步驟2)所述檢測是氨基酸序列測定；在此基礎(chǔ)上進一步優(yōu)選 的，步驟2)包括以下步驟：對步驟1)得到的總蛋白進行胰酶酶解；而后通過生物質(zhì)譜分析 酶解產(chǎn)物中是否含有：序列為YEEEVALR的羊毛標(biāo)志性肽段或序列為QCCESNLEPLFSGYIETLR 的羊絨標(biāo)志性肽段；進一步優(yōu)選的，步驟2)所述胰酶酶解包括以下步驟：將步驟1)得到的 總蛋白洛解后加-硫鍵還原劑!桴育，而后加入疏基封閉試劑，最后加入膜蛋白酶于35~ 39°C下孵育，將酶解后的蛋白脫鹽、干燥，即得到酶解產(chǎn)物；其中，所述二硫鍵還原劑可以優(yōu) 選為蘇糖醇；所述巰基封閉試劑可以優(yōu)選為碘乙酰胺。
[0015] 針對該方法優(yōu)選的，步驟2)所述生物質(zhì)譜分析是通過色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢 測實現(xiàn)的。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種用于以上方法的肽段，該肽段作為羊毛的標(biāo)志性肽段具有如 下的氨基酸序列：YEEEVALR。
[0017] 本發(fā)明還提供了一種用于以上方法的肽段，該肽段作為羊絨的標(biāo)志性肽段具有如 下的氨基酸序列：QCCESNLEPLFSGYIETLR。
[0018] 在利用以上方法對待測樣品執(zhí)行檢測后，若檢測結(jié)果顯示待測樣品總蛋白中含有 序列為YEEEVALR的肽段則判定該樣品中含有羊毛成分，反之則不含有羊毛成分；若檢測結(jié) 果顯示待測樣品總蛋白中含有序列為QCCESNLEPLFSGYIETLR的肽段則判定該樣品中含有 羊絨成分，反之則不含有羊絨成分。依據(jù)該鑒別原則形成鑒別結(jié)論。
[0019] 本發(fā)明是一種針對特定蛋白質(zhì)分子標(biāo)志物的檢測技術(shù)，該標(biāo)志物本身特異性強、 穩(wěn)定性好、靈敏度高，不會因生產(chǎn)過程中受到的理化處理（比如漂白、染色）所干擾，因此 該標(biāo)志對羊絨和羊毛的指向性穩(wěn)定、可靠，利用該方法對羊絨和羊毛執(zhí)行鑒別、檢測有效性 強。利用該技術(shù)我們能夠快速、準(zhǔn)確、客觀的判斷毛絨類紡織產(chǎn)品中是否含有羊絨、羊毛，為 該類產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗提供科學(xué)、可靠的檢測手段。
【附圖說明】
[0020] 圖1是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0021] 圖2是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0022] 圖3是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維與標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維混合物的液相色譜-生物 質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0023] 圖4是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維與標(biāo)準(zhǔn)牦牛毛纖維混合物的液相色譜-生 物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0024] 圖5是本發(fā)明實施例1中標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維與標(biāo)準(zhǔn)牦牛毛纖維混合物的液相色譜-生 物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0025] 圖6是本發(fā)明實施例2中含有5%標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維的羊絨-牦牛毛纖維混合樣品的 液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0026] 圖7是本發(fā)明實施例2中含有5%標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維的羊毛-牦牛毛纖維混合樣品的 液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0027] 圖8是本發(fā)明實施例3中代號為S1的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0028] 圖9是本發(fā)明實施例3中代號為S2的樣品的液相色譜-生物質(zhì)譜檢測結(jié)果圖；
[0029] 在以上附圖1~9中，所有可檢出的標(biāo)準(zhǔn)肽段均標(biāo)注在譜圖中，未標(biāo)注表示該標(biāo)準(zhǔn) 肽段未被檢出。
【具體實施方式】
[0030] 以下將對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在 以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。
[0031] 以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情 況下可允許數(shù)量有一定的變動。因此，用"大約"、"左右"等語言所修正的數(shù)值不限于該準(zhǔn) 確數(shù)值本身。在一些實施例中，"大約"表示允許其修正的數(shù)值在正負百分之十（10%)的 范圍內(nèi)變化，比如，"大約100"表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在"大約第 一數(shù)值到第二數(shù)值"的表述中，大約同時修正第一和第二數(shù)值兩個數(shù)值。在某些情況下，近 似性語言可能與測量儀器的精度有關(guān)。
[0032] 除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人 員普遍理解的相同含義。
[0033] 實施例1 (羊絨、羊毛組成鑒別方法的特異性實驗）
[0034] 一、材料
[0035] 標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維樣品及標(biāo)準(zhǔn)牦牛毛纖維由天津紡織工程研宄院 提供。
[0036] 二、方法
[0037] 分別取羊絨纖維標(biāo)準(zhǔn)品、羊毛纖維標(biāo)準(zhǔn)品、牦牛毛纖維進行兩兩混合。將上述混 合樣品及標(biāo)準(zhǔn)羊絨纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)羊毛纖維樣品、標(biāo)準(zhǔn)牦牛毛纖維樣品作為受試物，提取 總蛋白質(zhì)并采用生物質(zhì)譜分析技術(shù)檢測標(biāo)志性肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及標(biāo)志性肽段 YEEEVALR。
[0038] (1)自紡織纖維樣品中提取蛋白：
[0039] 將紡織纖維樣品剪碎，乙醇浸泡，氯仿_甲醇溶液浸泡。濾去浸泡溶液后干燥纖維 樣品，加入蛋白提取溶液提取。過濾，濾液離心，取上清液待進一步處理。
[0040] (2)胰酶酶解處理：
[0041] 提取得到的蛋白樣品采用碳酸氫銨溶解，加入二硫蘇糖醇并于室溫下孵育，再加 入碘乙酰胺室溫避光孵育，最后加入胰蛋白酶于37°C下孵育。酶解后的樣本脫鹽后熱干，低 溫保存待分析。
[0042] (3)生物質(zhì)譜分析
[0043] 將上述處理后的紡織纖維蛋白的酶解樣品注入色譜-生物質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)檢測，利 用生物質(zhì)譜分析方法獲得羊絨標(biāo)志肽段QCCESNLEPLFSGYIETLR及羊毛標(biāo)志肽段YEEEVALR 的檢測信號。
[0044] 三、結(jié)果
[0045