抗凝劑的制備方法、抗凝劑及使用其制備血液涂片的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學領(lǐng)域，具體而言，涉及一種抗凝劑的制備方法、抗凝劑及使用 其制備血液涂片的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 血液涂片的制作，在臨床上應用極為廣泛，制備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的 血液涂片是血液學檢查的重要基本技術(shù)之一。
[0003] 在血液涂片的制作中，推片是整個制作技術(shù)中的難點和關(guān)鍵。在目前的本科教學 實驗中，有一個血液涂片的制作和觀察實驗。目前實驗室主要使用的方法是直接采血、直接 制作血液涂片，但對于絕大多數(shù)的同學們來說，他們都是第一次推片，沒有絲毫的經(jīng)驗，往 往是把鮮血滴在載波片上，還來不及推片，血已經(jīng)在載玻片上凝固了，所以就需要使用添加 了微量抗凝劑的血液，來進行血液涂片的制作了。
[0004] 而抗凝劑的準確劑量，在實際操作中，往往是用血液量越少難以把握，實際操作中 就曾多次因抗凝劑劑量的精準問題，導致所做出來的血液涂片中，紅細胞嚴重變形，從而導 致了整個實驗的徹底失敗。這是由于，制作血液涂片的用血量本來就很少，加入抗凝劑的 量也就要求非常少，在這種情況下，就要求加入的量非常的精準，用量過多會破壞細胞的形 態(tài)，尤其是紅細胞，會嚴重的變形，呈鋸齒狀；而用量偏少呢，則達不到抗凝的效果。然而，這 么小的精準用量，如果想要達到直接取用、直接加入的目的，需要非常精密的儀器量取，價 格昂貴；如果使用常規(guī)方法進行溶解、定容，不僅耗時，而且也需要豐富的操作經(jīng)驗。
[0005] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一目的，在于提供一種抗凝劑的制備方法，所述的方法具有操作簡單、 用量精準、抗凝血效果好等優(yōu)點。
[0007] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述抗凝劑的制備方法制得的抗凝劑，該抗凝劑 具有使用方便、抗凝血效果好等優(yōu)點。
[0008] 本發(fā)明的第三目的在于提供一種使用所述抗凝劑制備血液涂片的方法，該方法具 有操作簡單、尤其特別的適用于第一次或者沒有絲毫推片經(jīng)驗的學生、實習生群體練習使 用。
[0009] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0010] 一種抗凝劑的制備方法，所述方法包括以下步驟：
[0011] a.分別量取肝素鈉和蒸餾水，然后將肝素鈉充分溶于蒸餾水中，得抗凝劑母液；
[0012] b.用低容量注射器稀釋所述抗凝劑母液，得備烘抗凝劑稀釋液；
[0013] c.用所述低容量注射器向高容量注射器內(nèi)定量注入所述備烘抗凝劑稀釋液；
[0014] d.將裝有所述備烘抗凝劑稀釋液的所述高容量注射器在40-60°C下烘干備用。
[0015] 由于制作血液涂片的用血量只有一滴，所用抗凝劑的量也就要求非常少而且必須 精準，用量少達不到抗凝血效果，用量多又會使得紅細胞嚴重的變形，呈鋸齒狀，做出來的 血液涂片都是廢片。通過先制備母液，再用注射器進行稀釋，可以使得抗凝劑的量非常精 準，用來制作血液涂片效果非常好，制得的血液涂片非常清晰，成功率也非常高，特別適合 初次制作血液涂片，經(jīng)驗少、不熟練的學生或者實習人員使用。適當?shù)暮娓蓽囟葘τ诒ＷC抗 凝劑的狀態(tài)穩(wěn)定非常重要。
[0016] 需要說明的是，本申請中所述注射器的高容量和低容量均是相對而言的，并不是 一個絕對的概念。
[0017] 優(yōu)選地，所述低容量注射器為Iml注射器，所述高容量注射器為5ml注射器。
[0018] 選用Iml和5ml的注射器，能夠在其精度范圍內(nèi)進一步控制抗凝劑母液的使用量。
[0019] 更加優(yōu)選地，所述步驟b具體為：
[0020] 用蒸餾水將所述抗凝劑母液稀釋，然后用Iml注射器定量吸取稀釋后的所述抗凝 劑母液，再吸取蒸餾水至lml，得所述備烘抗凝劑稀釋液。
[0021] 先用蒸餾水稀釋，進一步降低液體中的肝素鈉的含量，再用Iml注射器進行稀釋 定容，能夠減小量取抗凝劑的誤差，進一步保證用量的精準。
[0022] 優(yōu)選地，所述步驟c之后、所述步驟d之前還包括：
[0023] 旋轉(zhuǎn)所述高容量注射器，使所述備烘抗凝劑稀釋液均勻附著于所述高容量注射器 的管壁之上。
[0024] 旋轉(zhuǎn)之后溶質(zhì)肝素鈉能夠均勻的分布在管壁上，在后續(xù)用其取血的時候能夠更好 的起到抗凝血作用，避免在注射器內(nèi)，因肝素鈉分布不均，造成局部過多、其余部分過少的 情況，進而避免產(chǎn)生局部凝固和局部紅細胞嚴重變形的現(xiàn)象。
[0025] 本申請還提供一種由所述的方法制得的抗凝劑。
[0026] 這種抗凝劑是針對初次制作血液涂片時，由于操作人員技術(shù)不熟練，或者是沒有 絲毫的推片經(jīng)驗，鮮血滴加在載玻片上，還來不及推片，血液就直接的凝固在了載玻片上的 問題；而直接取用抗凝劑不僅劑量不好控制，而且非常麻煩。在制作血液涂片之前進行大量 的預先制備該抗凝劑，取血時直接使用，非常的方便。而且這種抗凝劑的量十分精準，即使 不熟練或者沒有經(jīng)驗的人員也能夠制作出好的血液涂片。
[0027] 本申請還提供一種使用所述的抗凝劑制備血液涂片的方法，所述方法包括以下步 驟：
[0028] e.用裝有所述抗凝劑的所述高容量注射器采血；
[0029] f.混勻采血后的所述高容量注射器；
[0030] g.取步驟f得到的血，用載玻片制備血液涂片。
[0031] 使用裝有抗凝劑的注射器直接采血，使得血液脫離生物體后直接與抗凝劑接觸， 避免因人員操作不熟練造成血液凝固而需要再次采血。搖勻能夠進一步避免血液與抗凝劑 分布不均，從而使得血液內(nèi)的紅細胞保持最原始的形態(tài)結(jié)構(gòu)和特征。
[0032] 采血完畢之后，將血液倒入容器（如青霉素小瓶）中，放入冰箱保存?zhèn)溆?。存放時 間一般不超過5個小時，5個小時后需要重新采血。馬上取血推片為最佳。
[0033] 優(yōu)選地，所述步驟f具體為：
[0034] 采血完畢后，拔掉所述高容量注射器的針頭和活塞，用手指按住注射器的兩端上 下輕輕晃動，直到血的溫度與常溫相一致，然后將所述的血輕輕倒入容器中備用。
[0035] 必須輕輕的晃動，避免發(fā)生溶血而使紅細胞破裂，造成采血失敗。強調(diào)血液溫度與 常溫一致后再倒入容器中，也是為了避免溫度變化對紅細胞產(chǎn)生不利影響。
[0036] 優(yōu)選地，所述采血量為2ml，用來采血的所述高容量注射器內(nèi)裝有的所述抗凝劑含 有肝素鈉〇· 02-0. lmg。
[0037] 經(jīng)試驗驗證，使用上述方法，采血量為2ml、用來采血的所述高容量注射器內(nèi)裝有 的所述抗凝劑含有肝素鈉〇. 02-0.1 mg時，制作出的血液涂片的效果最好，其血細胞的形態(tài) 結(jié)構(gòu)特征完全達到了直接采血涂片一樣的效果。
[0038] 可選地，所述步驟g具體為：
[0039] 用火柴圓頭取1滴步驟f所得的血，滴于備用載玻片一端4-5mm處，另取一塊邊緣 光滑的載玻片，做推片并將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在 推片與載波片的接觸處，使之和載玻片形成一條垂直的血線；以一定傾角向另一端勻速平 穩(wěn)地推出，得所述血液涂片。
[0040] 采用這種方法制作血液涂片，能夠進一步的保證制作質(zhì)量。血量取1滴、位置處于 載玻片一端4-5mm處，能夠?qū)⒀亢洼d玻片的容量完美契合，做出的血液涂片中血液的位 置、可觀察的效果都極佳。
[0041] 優(yōu)選地，所述傾角為30-40度。
[0042] 采用這種角度推動血液，能夠最快、最好的制作好血液涂片，角度過大或者過小均 會給制作帶來操作困難，而且會影響血液涂片的質(zhì)量。
[0043] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0044] (1)用量精準，在保證抗凝效果的同時，能夠有效防止破壞紅細胞形態(tài)，還原了血 細胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)和特征；
[0045] (2)不需要昂貴的精密儀器，即可實現(xiàn)精準使用肝素鈉；
[0046] (3)操作簡單，不需要過多的操作經(jīng)驗，特別適合初學或者學生群體的操作實踐；
[0047] (4)大大提高無經(jīng)驗人員制作血液涂片的成功率。
【具體實施方式】
[0048] 下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限制本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0049] 實施例1
[0050] 量取肝素鈉 Ig和蒸餾水l〇〇ml，然后將肝素鈉充分溶于蒸餾水中，得抗凝劑母 液；用蒸餾水將抗凝劑母液稀釋得到〇. 5 %的抗凝劑；用Iml注射器吸取0. 5 %的抗凝劑 0. 2ml，加蒸餾水至lml，得備烘抗凝劑稀釋液；將這Iml稀釋后的抗凝劑平均滴加到10個 進行過無菌處理的5ml注射器中，旋轉(zhuǎn)每一個5ml注射器，使抗凝劑液體均勻的附著于注射 器的管壁之上；將裝有備烘抗凝劑稀釋液的5ml注射器在50°C下烘干備用。
[0051] 依照上述方法制備50個烘干的裝有抗凝劑的5ml注射器，每個實驗組一個，備用。
[0052] 取血前準備：75%酒精棉球，滅菌紗布、裝有抗凝劑的5ml注射器一個、麻醉藥乙 醚、青霉素小瓶一只、三黃雞每組1只（共50組）、無菌手套。
[0053] 戴好無菌手套，將三黃雞稱重并記錄；將實驗用三黃雞固定于手術(shù)臺上，乙醚吸 入麻醉，5-8分鐘后，雞心臟或者翅膀靜脈部位剪毛，備皮；75%酒精棉球，清潔消毒局部皮 膚。
[0054] 取血：
[0055] 用烘干的裝有抗凝劑的5ml注射器，從雞的心臟采血至刻度2ml，采血完畢后，拔 掉注射器的針頭和活塞，用手指按住注射器的兩端上下輕輕晃動，直到血的溫度與常溫相 一致，然后將血輕輕倒入青霉素小瓶中，青霉素小瓶貼上標簽，寫好組號，放冰箱保存?zhèn)溆茫?如果在取血過程中，回血不暢，可輕輕的按摩左側(cè)的心臟。
[0056] 需要注意的是：使用本申請?zhí)峁┑目鼓齽?，間隔時間越短越好，最長可抗5小時， 最好是血液放入青霉素小瓶后，馬上取血推片。且所取之血也可以是其他部位的血，如靜脈 血；此外，不局限于實驗所用的三黃雞，只要是適用于觀察血細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)實驗的動物血即 可。
[0057] 制備血液涂片：
[0058] 用火柴圓頭從青霉素小瓶中取血一滴，滴于備用好的載玻片一端4毫米處；另取 一塊邊緣光滑的載波片做推片，將其一端置于血滴前方，