一種同時檢測血漿中腦心通膠囊主要成分的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測血漿中腦心通膠囊主要成分的方法 及其在藥代動力學(xué)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腦心通膠囊是由陜西步長制藥有限公司獨家生產(chǎn)，其國家藥品批準(zhǔn)文號為國藥準(zhǔn) 字Z20090527。腦心通膠囊是由黃芪、赤芍、丹參、當(dāng)歸、川芎、桃仁、紅花、乳香（制）、沒藥 (制）、雞血藤、牛膝、桂枝、桑枝、地龍、全蝎、水蛭，十六味中藥組成的上市中成藥。臨床主 要用于氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻所致中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)，半身不遂、肢體麻木、口眼歪斜、舌強語謇及胸 痹心痛、胸悶、心悸、氣短；腦梗塞、冠心病心絞痛屬上述證候者。文獻(xiàn)報道其主要成分為黃 芪皂苷類、酚酸類、丹參酮類、黃酮類等，并且黃芪皂苷、酚酸類、丹參酮類成分在片劑中的 含量較高。芍藥苷、0蛻皮留酮、苦杏仁苷、桑皮苷A、咖啡酸、阿魏酸、丹酚酸B、黃芪甲苷、 芒柄花黃素、隱丹參酮、丹參酮IIA，分別是黃芪、赤芍、丹參、當(dāng)歸、川芎、桃仁、雞血藤、桑枝 中的主要成分，大量文獻(xiàn)對其藥理活性進(jìn)行了報道。但還沒有文獻(xiàn)同時對這幾種成分的藥 代動力學(xué)進(jìn)行報道，對腦心通膠囊藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研宄的文章也未見有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS)同時檢測血漿樣本 中腦心通膠囊的主要成分，如芍藥苷、0蛻皮留酮、苦杏仁苷、桑皮苷A、咖啡酸、阿魏酸、丹 酚酸B、黃芪甲苷、芒柄花黃素、隱丹參酮、丹參酮IIA等成分的方法。并采用該方法對前述 腦心通膠囊中的主要成分進(jìn)行藥代動力學(xué)研宄，以期進(jìn)一步明確腦心通膠囊的吸收入血成 分及其血藥濃度變化情況，從而為腦心通膠囊的用藥安全、用藥效果提供保障。
[0004] 本發(fā)明所提供的方法包括：步驟（1)樣品的制備和步驟（2)采用液相色譜串聯(lián)質(zhì) 譜法進(jìn)行檢測；
[0005] 步驟（1)樣品的制備采用包括以下步驟的方法：
[0006] a)向待測血漿樣品中加入混合內(nèi)標(biāo)溶液、甲酸，并混勻；
[0007] b)加入乙腈沉淀蛋白，混勻后靜置；
[0008] c)離心，收集上清液，氮氣吹干，收集干燥物；
[0009] d)將得到的干燥物用甲醇復(fù)溶，混勻、離心，取上清液。
[0010] 步驟a)中，所述混合內(nèi)標(biāo)溶液中所述內(nèi)標(biāo)為綠原酸、梔子苷、番瀉苷B、葛根素。所 述混合內(nèi)標(biāo)溶液具體通過包括下述步驟的方法配制：精密稱取綠原酸、梔子苷、番瀉苷B、 葛根素各lmg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，并定容至刻度線，分別配成內(nèi)標(biāo)綠原 酸、梔子苷、番瀉苷B、葛根素的儲備液；精密移取各內(nèi)標(biāo)儲備液適量，用甲醇稀釋，配制成 含綠原酸、梔子苷、番瀉苷B、葛根素均為1. 00yg/mL-1的混合內(nèi)標(biāo)溶液。
[0011] 所述步驟a)中，所述待測血漿樣品與甲酸的體積比為100:10。
[0012] 所述步驟b)中，所述靜置的時間為2-5min。所述待測血漿樣品與乙腈的體積比為 1:4〇
[0013] 所述步驟d)中，在離心步驟前還可包括對混勻后的產(chǎn)物進(jìn)行超聲的步驟。
[0014] 所述超聲的時間為30-60s。
[0015] 步驟a)、b)、c)和d)中，所述混勻均采用渦旋的方式，渦旋的時間均為l_2min。
[0016] 步驟c)和d)中，所述離心的條件均為18000Xg-19000Xg離心l〇-15min。
[0017] 步驟⑵檢測所用液相色譜條件如下：
[0018] 色譜柱為C18柱；
[0019] 流動相由乙腈和體積分?jǐn)?shù)為0. 1% (v/v)的甲酸水溶液組成；
[0020] 洗脫方式為梯度洗脫；
[0021] 所述梯度洗脫的程序如下：
[0022] 〇-1〇111；[11:乙腈的體積分?jǐn)?shù)維持在30%不變；
[0023] 10-15min:乙腈的體積分?jǐn)?shù)由30%增加至80% ;
[0024] 15_20min:乙腈的體積分?jǐn)?shù)由80%增加至95% ;
[0025] 2〇-3〇1^11:乙腈的體積分?jǐn)?shù)維持在95%不變；
[0026] 步驟⑵檢測所用質(zhì)譜條件如下：采用API3200?LC/MS/MS液質(zhì)分析系統(tǒng)；
[0027] TurbolonSpray?離子源，正負(fù)離子快速切換分析模式，MRM掃描方式。
[0028] 所述液相色譜條件中，色譜柱具體為AgilentEclipsePlusC18柱 (4. 6_X100mm, 1. 8ym);流動相流速為300yL/min;柱溫為30°C;進(jìn)樣量為10yL。
[0029] 所述質(zhì)譜條件中，所述正負(fù)離子快速切換分析模式中，正離子模式參數(shù)設(shè)置為：氣 簾氣（CUR) :10psi;碰撞氣（CAD) :80psi;離子噴霧電壓（IS) :5000V;溫度（TEM) :500°C; 氣流1 (GS1) :40psi;氣流2 (GS2) :30psi;加熱（Ihe) :0n;負(fù)離子模式參數(shù)設(shè)置為：氣簾氣 (CUR) :20psi;碰撞氣（CAD) :8psi;離子噴霧電壓（IS) :-4500V;溫度（TEM) :500°C;氣流 1(GS1) :30psi;氣流 2(GS2) :30psi;加熱（Ihe) :0n。
[0030] 所述MRM方法的參數(shù)如下：
[0031]芍藥苷：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :478.6;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :121. 1;解簇電壓 (DP) :-45V;入口電壓（EP) :-4V;采樣時間（DwellTime) :100;碰撞能：-30V;碰撞池出口 電壓（CXP) :_1V;保留時間（Rt) :4. 47min;
[0032] 0蛻皮留酮：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :478. 9 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :159. 0 ;解簇電壓 (DP) :-60V;入口電壓（EP) :-10V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：-37V;碰撞池出口 電壓（CXP) :_1V;保留時間（Rt) :4. 48min;
[0033] 苦杏仁苷：母離子質(zhì)量數(shù)（Q1) :455.8 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :322.8 ;解簇電 壓：-50V;入口電壓（EP) :-4. 5V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：-20V;碰撞池出口 電壓（CXP):_22V;保留時間（Rt) :4. 49min;
[0034] 桑皮苷A:母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :567. 0 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :242. 6 ;解簇電壓： 60V;入口電壓（EP) :10V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：38V;碰撞池出口電壓 (CXP) :16V;保留時間（Rt) :4. 53min;
[0035] 咖啡酸：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :178. 9 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :134. 9 ;解簇電壓： 35V;入口電壓（EP) :3. 5V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：24V;碰撞池出口電壓 (CXP) :0? 5V;保留時間（Rt) :5. 28min;
[0036] 阿魏酸：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :192.8 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :133.9 ;解簇電 壓：-31V;入口電壓（EP) :-4V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：-23V;碰撞池出口電 壓（CXP) :_1V;保留時間（Rt) :7. 32min;
[0037] 丹酚酸B:母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :716. 5;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :518. 5;解簇電 壓：-55V;入口電壓（EP) :-4. 5V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：-25V;碰撞池出口 電壓（CXP) :-40V;保留時間（Rt) :8. 92min〇
[0038] 黃芪甲苷：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :807. 0 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :807. 0 ;解簇電壓： 140V;入口電壓（EP) :10V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：50V;碰撞池出口電壓 (CXP) :55V;保留時間（Rt) :18.79min。
[0039] 芒柄花黃素：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :267. 0 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :251. 8 ;解簇電 壓：-16V;入口電壓（EP) :-2V;采樣時間（DwellTime) :100 ;碰撞能：-27V;碰撞池出口電 壓（CXP) :-5V;保留時間（Rt) :20. 43min。
[0040] 隱丹參酮：母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :297.0 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :254. 2 ;解簇電 壓：50V;入口電壓（EP) :9V;采樣時間（DwellTime) : 100 ;碰撞能：35V;碰撞池出口電壓 (CXP) : 15V;保留時間（Rt) :25. 64min。
[0041] 丹參酮IIA:母離子質(zhì)量數(shù)（Ql) :295. 2 ;碎片離子質(zhì)量數(shù)（Q3) :277. 1 ;解簇電 壓：58V;