專利名稱：精子的分離和檢出的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及精子的分離和檢出。本發(fā)明提供了用來分離和/或檢出樣品中活動精子的方法和成套用具(kit)，此方法和成套用具可應(yīng)用于許多應(yīng)用中，包括診斷和治療男性不育癥。
背景技術(shù)：
已經(jīng)推算，在全部試圖懷胎的配偶中大約有14～16％經(jīng)歷過困難，而且被生育治療學(xué)家確定為不育癥。這里面有40％是由于男性的因素。在這里的很大一部分當(dāng)中，需要獲得治療以改善或緩解導(dǎo)致不育癥的情況。
也存在著其它的情況，希望檢測在樣品中是否存在有活力的精子。比如，現(xiàn)在經(jīng)常進(jìn)行輸精管切除術(shù)作為避孕的措施，但是必須在術(shù)后一段時間通過確認(rèn)射出的精液不含有有活力的精子來證實輸精管切除的效果。
有許多方法評估樣品中精子的活力和數(shù)目。一種這樣的方法是顯微鏡分析，這一般是在醫(yī)院或商業(yè)實驗室中進(jìn)行。然而，最近對成套的測試用具提出了許多建議，力圖簡化精子的檢出，因此可以將它們用于男性不育癥的診斷當(dāng)中。比如，WO97/40386公開了一種成套用具，其基于檢測34kD人類附睪精子蛋白(P34H)。據(jù)認(rèn)為，在精子-透明區(qū)相互作用時涉及到此蛋白質(zhì)。在WO97/40386中公開的此成套測試用具使用了由P34H或相關(guān)的抗原引起的抗體，以及用于檢測與P34H結(jié)合的抗體的試劑。正如在WO97/40386中所公開的，在Dulbecco-磷酸鹽緩沖生理鹽水中，通過離心洗滌測試樣品三次。然后在95℃下加熱使樣品變性，在14000g下離心，然后用上層清液進(jìn)行分析。
EP-A-0387873也公開了一種評估男性不育癥用的成套用具。此成套用具使用了固體珠，在其上面結(jié)合了一種對人類精子頂體的抗原部位呈特異性的抗體。將這樣的珠與測試樣品混合，培養(yǎng)10～30min。然后從懸浮液中分離此測試珠，洗滌并優(yōu)選借助于顯微鏡檢測測定與固體珠結(jié)合的精子數(shù)。
在WO95/29188中也公開了檢測樣品中精子的成套用具，在此情況下，測試是基于對如人類精子SP-10抗原的抗體。
在上述的現(xiàn)有技術(shù)中公開的成套測試用具的明顯缺點是，它們不能區(qū)別活動的精子和非活動的精子。在檢測男性不育癥時，估計有活力精子數(shù)目的能力是男性不育癥最有預(yù)言性的指征。再有，許多現(xiàn)有技術(shù)成套測試用具涉及到的操作，比如離心或顯微鏡檢測，使得它們無法在家庭中使用，反而要求由有技術(shù)的實施者來進(jìn)行。
因此就希望提供能夠本身包括在多個組件中或由該組件提供的一種設(shè)施，提供將活動精子與非活動精子分離的方法，以及提供用來收集和檢測活動精子存在的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種設(shè)備，用來分離液體樣品中的活動精子和非活動精子，該設(shè)備包括(ⅰ)一個具有樣品接收入口、被過濾樣品出口和安裝在它們之間的樣品分離過濾器的容器，該樣品分離過濾器具有一個樣品接受表面和一個相反的表面，且其基本有效地防止樣品通過其流動，但當(dāng)所述樣品分離過濾器的反面與液體介質(zhì)接觸時，允許活動精子通過，以及(ⅱ)向所述過濾器的所述反面供應(yīng)液體的裝置。樣品可以含有活動精子、非活動精子和/或降低了活力的精子。
為了檢出分離的活動精子，可以在樣品分離過濾器的樣品出口側(cè)并與其有一定間隔處提供精子檢出裝置，如精子檢出過濾器。此檢出裝置可以與該設(shè)備為一個整體，或者可以作為其一個分離的組件提供，在放置該過濾器與液體介質(zhì)接觸之前、之中或之后插入到該設(shè)備中。該精子檢出過濾器可以具有與樣品分離過濾器類似的特性。
過濾器的厚度可以是100～2000μm，優(yōu)選200～1000μm，更優(yōu)選400～800μm。比如過濾器的厚度可以是大約600μm。過濾器的最小顆粒保留尺寸可以是5～100μm，優(yōu)選8～60μm，更優(yōu)選10～40μm。過濾器可以是纖維質(zhì)的，或者由玻璃纖維或聚丙烯制造，它們或者可以具有凝膠或泡沫的結(jié)構(gòu)。對于不能自己支撐的凝膠或泡沫結(jié)構(gòu)，可以提供底部隔柵或其它的支撐件。一種特別優(yōu)選的過濾器是玻璃纖維過濾器，它可以包括粘接劑如丙烯酸酯。應(yīng)該理解，使用凝膠作為過濾器可以避免對向其反面供應(yīng)液體的需要，因為凝膠本身就是可以實現(xiàn)這一點的適當(dāng)?shù)难b置。優(yōu)選的凝膠是透明質(zhì)酸和甲基纖維素。
可以在精子檢出裝置中放置一種試劑或組合的試劑，在與精子相互作用時會直接或間接地產(chǎn)生目視的信號。這些試劑或組合可以包括檢出在精子中存在的抗原和/或能夠與精子結(jié)合的抗體。當(dāng)精子被這樣的抗體固定時，使用與精子結(jié)合的目視檢出劑可以進(jìn)行目視檢出。正如在PCT/GB99/01929中所討論的，發(fā)現(xiàn)CD59的抗體是適合于本目的的，此專利的全部公開內(nèi)容在此引作參考。
如在PCT/GB99/01929中所鑒別的如卵胞液之類的精子化學(xué)吸引劑可以放在精子檢出裝置中。這些精子化學(xué)吸引劑優(yōu)選位于精子檢出裝置的遠(yuǎn)離樣品分離過濾器的部分上。
拾取區(qū)(pick-up zone)可以位于樣品分離過濾器中，或者在精子檢出裝置中，所述拾取區(qū)含有一種試劑或組合的試劑，能夠與精子結(jié)合并隨同它們一起轉(zhuǎn)移通過過濾器，到達(dá)精子檢出裝置的檢出區(qū)。拾取區(qū)的此一種試劑或組合試劑可以包括檢出存在于精子中的抗原的抗體。這些抗體可以用比如金顆粒標(biāo)記檢出。
位于精子檢出裝置的精子檢出區(qū)的抗體可以識別與位于拾取區(qū)的不同的精子抗原。
精子檢出裝置可以包括精子頂體溶解劑和用于檢測pH值變化的裝置。精子頂體溶解劑一般是溶解緩沖液，可以含有蛋白酶K和鈣離子載體A24297。pH值變化檢出裝置可以是一個pH值敏感探頭，或者是能夠目視檢測pH值變化的pH指示劑，比如溴甲酚紫。
樣品分離過濾器的樣品接收表面可以含有能夠引起精液液化的酶液化劑，如糜蛋白酶。
本發(fā)明還提供男性生育能力測試成套用具，它包括一個如上所述的設(shè)備，該成套用具還包括一個液體釋放機(jī)構(gòu)，其中一旦液體釋放機(jī)構(gòu)啟動，就從供液裝置中向樣品分離過濾器的所述反面供應(yīng)液體，提供與精子檢出裝置的液體通道。
精子檢出裝置可以與該設(shè)備制成一體，或者它可以作為該成套用具的分離的或可分離的組件提供。
該成套用具可以包括一個一體化的供液裝置，或者可以使用外部的供液裝置。應(yīng)該理解，此液體必須是這樣一種液體，即活動精子在這種液體中可以保存活力足夠的時間使其遷移到精子檢出裝置中，即此液體對精子一般是無毒的。然而，此液體可以是對精子的毒性是足夠的低的，完全可以使精子成功地到達(dá)檢出裝置。此液體優(yōu)選是一種緩沖液，如在PCT/GB99/01929中敘述的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)或Earle平衡鹽溶液(EBSS)。
應(yīng)該理解，在使用凝膠基的過濾器時，凝膠可以作為其自身的供液裝置。然而，可以希望向凝膠基過濾器的反面供應(yīng)液體，從而比如在通過過濾器分離之后稀釋樣品。
該成套用具可以包括兩個或多個可分離的組件，比如該設(shè)備和供該設(shè)備安裝的底座。將該設(shè)備放入該底座可以適當(dāng)?shù)貑右后w釋放機(jī)構(gòu)，借此潤濕精子檢出過濾器和樣品分離裝置。另外，可以提供一種用于液體的按鈕釋放。精子檢出過濾器的潤濕可以使放在精子檢出裝置上的檢出劑發(fā)生作用。
可以提供一個溢流容器，用來盛放當(dāng)液體釋放機(jī)構(gòu)啟動時向該設(shè)備供應(yīng)的過量的液體。
該供液裝置可以包括一個易破的隔室或易破部分，其中液體釋放機(jī)構(gòu)會破壞此隔室以釋放出裝在其中的液體。然后，如此釋放的液體就可以順著斜坡向成套用具的該設(shè)備和底座之間形成的槽的方向流下。該隔室是可以被穿透機(jī)構(gòu)狀的液體釋放機(jī)構(gòu)穿透的，該穿透機(jī)構(gòu)被一個比如制動機(jī)構(gòu)保持住，該制動機(jī)構(gòu)防止在用戶啟動該成套用具前穿透機(jī)構(gòu)會穿透該隔室。
本發(fā)明還提供一種檢測樣品中存在活動精子的方法，該方法包括如下步驟給一個過濾器提供第一和第二表面，當(dāng)液體放在其第二表面上時，該過濾器允許活動精子通過其遷移；把樣品放在第一表面上；把液體放在第二表面上；以及檢出遷移通過該過濾器的精子。樣品可以是含有活動精子和非活動精子的混合物。該過濾器可以是包含在如上所述的設(shè)備或成套用具中的過濾器。
附圖簡述

圖1顯示的是在容器放入底座前的本發(fā)明的成套用具。圖2顯示的是帶有溢流裝置的圖1的成套用具，在容器放入到底座以后的情況。圖3顯示的是另一種實施方案，這時檢出裝置是成套用具的一個可分離的組件。
實施本發(fā)明的模式圖1和圖2顯示的是用于測試男性生育能力的成套用具10。該用具包括一個容器12、一個底座14、一個裝有液體18的供液裝置16和兩個過濾器20和22。
第一個過濾器20是樣品分離過濾器20，由于其組成和結(jié)構(gòu)，它對精子的透過形成障礙。比如，此過濾器在其接受樣品的表面上將基本保留住沉積在其上的樣品中存在的精液和非活動精子。這可以依靠比如過濾器的孔隙度來實現(xiàn)。非活動的精子將不能通過此過濾器。然而，當(dāng)精子是活動的時候，它就可能藉“游泳”通過此過濾器。
人類精子的頭部一般直徑3～5μm，尾長將近50～60μm。此過濾器應(yīng)該讓這些精子能游泳通過在其反面涂布有液體的過濾器?？梢酝ㄟ^一系列簡單實驗來篩選適當(dāng)?shù)倪^濾器材料。
實驗1精子毒性的評估從精子樣品中制備活動精子制劑(swim up)(David Mortimor《實踐實驗室男性科學(xué)》(Practical Laboratory Andrology)，272頁)，并用得到的活動精子制劑來評估過濾器的精子毒性。將2cm×2cm的正方形過濾器剪成2mm×1cm的條。將3個新制備的1mL一份的活動精子樣品加入到圓底試管(如Falcon No.2001或2037)中，分別標(biāo)為副本A、副本B和對照組C。將10條過濾器的細(xì)條放入副本A和副本B中。然后將A、B和C放在37℃下培養(yǎng)1hr，同時伴以經(jīng)常的攪拌。然后對兩個副本和對照組進(jìn)行精子活動性和精子活性的評估(《實踐實驗室男性科學(xué)》p.49～50是有關(guān)活動性，p.66～69是有關(guān)活性的)。在裝有過濾器的樣品和對照組樣品之間，如果在精子活動性和精子活性上有明顯的差別，就表明此過濾器對精子是有毒的。
實驗2精子“透過”過濾器能力的評價在圓底試管中放入200μL液化的精液。然后在此精液樣品中放入一個0.5cm×4cm的過濾器條，使得只有過濾器最下面的1～2mm直接與精液樣品接觸。在某些過濾器中，精液樣品將藉毛細(xì)管作用運動，或者說攜帶著活動的和非活動的精子一起向上“透過”過濾器，這時是沒有分離效果的。從精液樣品中取出過濾器，用光學(xué)顯微鏡分析每2mm一段的過濾器精子存在的情況，就測定出在給定時間比如15min內(nèi)滲透的程度。為了成為從活動的和非活動的精子混合物中分離出活動精子的有效分離器，在過濾器中滲透的程度(在檢出或收集到過濾出的活動精子之前，樣品將留在并散布在過濾器上的時間內(nèi))應(yīng)該小于過濾器的厚度。
實驗3過濾器防止死精子或不活動精子穿透的效率在95℃的水浴中加熱精子樣品，或者加入10％的氰化物溶液得到死精子或不活動精子樣品。將200μL死精子或不活動精子樣品涂布在過濾器的上表面，過濾器的底側(cè)直接連著1mL EBSS。在間隔5、10、15和30min以后，取出10μL一份的過濾液，在光學(xué)顯微鏡下檢查精子的存在情況。在精液樣品與過濾器上表面接觸所需的時間之內(nèi)，一種有效的過濾器應(yīng)該不允許死精子或不活動精子穿透。
實驗4過濾器選擇性地允許活動精子通過的效率對精液樣品的濕制劑進(jìn)行評估(見《實踐實驗室男性科學(xué)》49～50頁)并注意其特征。將250μL精液樣品涂布在過濾器的上表面，過濾器的底側(cè)直接連著1mL EBSS。在間隔5、10、15和30min以后，取出10μL一份的過濾液，在光學(xué)顯微鏡下檢查活動精子的存在情況和過濾液中活動精子與不活動精子的比，并與原始樣品進(jìn)行比較。一種有效的過濾器應(yīng)該允許活動精子通過。比如，如果原始精液樣品中的活動率是40％(即60％是不活動精子)，那么過濾液中的活動率優(yōu)選至少是90％，只有少于10％的精子是不活動的。
此成套用具的第二個過濾器22是精子檢出過濾器22。此精子檢出過濾器22形成了用于檢出通過樣品分離過濾器20而遷移的精子的檢出區(qū)26。此檢出區(qū)26提供在精子檢出過濾器22當(dāng)中，并含有在與精子發(fā)生相互作用時能夠產(chǎn)生信號的試劑。然而，在兩個過濾器20和22之間形成了間隔24，防止在供應(yīng)轉(zhuǎn)移介質(zhì)(如供液裝置16中的液體18)去填充此間隔24，從而使精子穿過此檢出區(qū)26之前會使此成套用具啟動，這樣就用此成套用具來進(jìn)行生育能力的測試。
適當(dāng)?shù)倪^濾器20、22以及檢出區(qū)26的組成和結(jié)構(gòu)可以如在此處所述，或者如在現(xiàn)有技術(shù)中的更詳細(xì)的敘述。然而，優(yōu)選的組成和結(jié)構(gòu)是如在PCT/GB99/01929中所敘述的，此文獻(xiàn)的全部公開內(nèi)容在此引作參考。篩選出的一種特別優(yōu)選的過濾器材料是過濾器4622，這是從美國Ahlstrom Filtration公司(122W.Butler Street,PO BoxA,Mt.Holly Springs,PA 17065-0238,USA)得到的。這種過濾器包括帶丙烯酸類粘接劑的微玻璃纖維。該丙烯酸類膠乳是丙烯酸酯聚合物和共聚物在水基中的陰離子分散液。這些聚合物是基于丙烯酸酯的。孔隙度是20μm，厚度是580μm。
容器12具有圓形的截面，還具有側(cè)壁28、開口的頂部30、環(huán)形的底部32和在環(huán)形底部32上形成的開口嘴34。在開口嘴34中提供有精子檢測過濾器22。在開口頂部30上可以放一個蓋子(圖上未顯示)以保持容器12中的無菌環(huán)境。將樣品放入容器12中時，需要除去開口頂部30上的蓋子。
底座14包括供液裝置16、液體釋放機(jī)構(gòu)36和一個槽38。該槽38包括一個適合于接受開口嘴34的孔40?？?0可以有一個窗(圖上未顯示)，在此用來在成套用具10啟動后觀察檢出區(qū)26。底座14還包括一個用于從供液裝置16引導(dǎo)液體18到槽38的斜坡42，和一個容納從供液裝置16到槽38的過量液體18的溢流容器44。
液體釋放機(jī)構(gòu)36是以穿透元件37的形式，適于在把容器12放入底座14時啟動。在穿透元件37啟動前，一個制動機(jī)構(gòu)48卡住穿透元件37。放下容器12就帶動穿透元件37滑過制動機(jī)構(gòu)48?？梢詾楣┮貉b置16提供易破部分，當(dāng)穿透元件37滑過制動機(jī)構(gòu)48時，該易破部分被穿透元件37刺透。此易破部分可以包括一個錫箔壁部分。
實驗5用凝膠過濾器分離活動精子可以用各種凝膠過濾器來分離活動精子。將從Sigma-Aldrich公司或Pharmacia-Upjohn公司得到的凝膠介質(zhì)重新分散在EBSS(Gibco-BRL)中。測試4個不同的透明質(zhì)酸凝膠和一個甲基纖維素凝膠。
用再次懸浮的介質(zhì)充入尺寸為1.2×4.8mm，內(nèi)徑視通道(visionpath)0.4mm，一端封閉的平板玻璃毛細(xì)管(Camlab)。管的開口端放在裝有100μL或200μL液化精液的1.5mL microfuge管中。在室溫下讓精液遷移到凝膠中30min，擦拭該管并放在顯微鏡下面觀察。
記錄下距離管的開口端1cm處的精子數(shù)，以評估在各種凝膠中的穿透性和遷移性。用10倍或20倍的物鏡和10倍的目鏡，給出最終放大100倍或200倍，用Olympus BH-2顯微鏡數(shù)出視野內(nèi)的精子數(shù)。在100倍下觀察的面積是0.785mm2，在200倍下觀察的面積是0.196mm2。
對于4個透明質(zhì)酸產(chǎn)物得到的結(jié)果如下

對于粘度15cp的甲基纖維素得到的結(jié)果如下

對于粘度4000cp的甲基纖維素得到的結(jié)果如下

*這兩個測量值取自距開口端0.25cm處因此很明顯的是，這些凝膠可以用作從含精子的樣品中分離活動精子的過濾器。
下面將敘述用上述的成套用具測試男性生育能力的方法。
將精液的樣品46或射出的精液通過頂部開口30放入一個未用過的或回收的容器12中，并放在樣品分離過濾器20上?？梢酝ㄟ^比如使用者直接放置，或者從射出的精液樣品中用滴管放入樣品。然后把裝好的容器12放入一個未用過的或回收的裝有供應(yīng)新鮮液體裝置16的底盤14中，這時容器12的嘴34正好插入底盤14的孔40中。在將容器12放入底盤14的過程中，容器12的側(cè)壁28啟動了穿透元件37，此元件刺穿了供液裝置16，如圖2所示，在此圖上穿透元件37剛好刺穿供液裝置16的易破部分。另外，也可以提供如圖3的穿透按鈕50來刺穿供液裝置。
一旦刺穿供液裝置16，裝在供液裝置16中的液體18就順著斜坡42流入槽38中，用液體18充滿孔40和槽38，該液體18還通過位于底盤14的孔40內(nèi)的容器12的嘴34進(jìn)入。由此該液體就通過精子檢出過濾器22，用液體18填充兩個過濾器20和22之間的間隔24。過量的液體18溢流出槽38，被溢流容器44收集。
液體18的作用是遷移通過了樣品分離過濾器20的精子的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，使得透過了樣品分離過濾器20的精子能夠向著精子檢出過濾器22移動，從而被精子檢出過濾器22中的檢出區(qū)26檢出。一旦在檢出區(qū)26檢出了精子，在那里提供的試劑就會產(chǎn)生信號，這樣就表明有活動的精子存在。在樣品中沒有活動精子存在的情況下，將沒有精子到達(dá)檢出區(qū)26，因為非活動的或活動能力降低的精子是不會通過樣品分離過濾器20的。
圖3的成套用具是本發(fā)明的另一種實施方案，它有一個如上所述的曝露出樣品分離過濾器20的頂部開口30。樣品46顯示放在位于其樣品接受表面上的樣品分離過濾器20上。
成套用具10的側(cè)壁28決定了槽38。提供一個供液裝置16與成套用具10在槽38附近裝在一起，供液裝置16裝有液體18，并在其圓周上具有一塊易破部分60，用來在成套用具10啟動以前將供液裝置18與槽38分開。在一個滑動件56上提供精子檢出過濾器22，該滑動件可以滑動地附著在成套用具10上，或者它可以作為成套用具的分離組件提供，通過一個可密封的孔道58插入到側(cè)壁28上，用于在槽38中進(jìn)行精子檢出。
液體釋放機(jī)構(gòu)包括一個穿透按鈕50和一個穿透元件37。彈簧52使穿透按鈕50偏離到非穿透位置。按壓穿透按鈕就推動了穿透元件37刺入供液裝置的易破部分60，這樣就使裝在供液裝置16中的液體18流入到槽38中。
按另一種方式，可以采用滑動件56適于將供液裝置16中的液體18在其插入槽38時自動地釋放，比如在其上提供一個將穿透供液裝置16的易破部分60的穿透元件。
在槽38的側(cè)壁28上提供一個透明窗54，能夠進(jìn)行檢查精子檢出過濾器中所包含的檢出區(qū)26。然而，側(cè)壁28可以用透明材料制造，這就避免了對窗54的需要。
圖3的成套用具10的使用原理與圖1和圖2的實施方案是類似的。然而，可以在精子檢出過濾器插入到槽中之前、之中或之后釋放液體18。
當(dāng)然應(yīng)該理解，本發(fā)明，具體是成套用具及其使用方法，在上面純粹是以舉例的方式加以敘述。只要保持在本發(fā)明的范圍和精神之內(nèi)，可以進(jìn)行改變。
權(quán)利要求
1．將液體樣品中的活動精子與不活動精子分離的設(shè)備，該設(shè)備包括(ⅰ)一個具有樣品接收入口、過濾后樣品的出口和安裝在其間的樣品分離過濾器，該樣品分離過濾器具有一個樣品接受面和一個反面，該樣品分離過濾器能基本有效地避免樣品通過其流動，但當(dāng)所述樣品分離過濾器的所述反面被放置在與液體介質(zhì)接觸時，它允許活動精子通過，以及(ⅱ)向所述過濾器的所述反面提供液體的裝置。
2．如權(quán)利要求1的設(shè)備，其中樣品分離過濾器是凝膠或泡沫結(jié)構(gòu)。
3．如權(quán)利要求1的設(shè)備，其中過濾器是纖維性的。
4．如權(quán)利要求3的設(shè)備，其中纖維過濾器是由玻璃纖維或聚丙烯制造的。
5．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中樣品還包含非活動精子和活動能力降低的精子。
6．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，它包括在樣品分離過濾器出口側(cè)并與其有間隔的精子檢出裝置。
7．如權(quán)利要求6的設(shè)備，其中檢出裝置與該設(shè)備為一個整體。
8．如權(quán)利要求6的設(shè)備，其中檢出裝置是在樣品分離過濾器與液體介質(zhì)接觸之前、之中或之后用于插入到該設(shè)備中的可分離組件。
9．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中過濾器的厚度為100～2000μm。
10．如權(quán)利要求9的設(shè)備，其中過濾器的厚度為200～1000μm，優(yōu)選為400～800μm。
11．如權(quán)利要求10的設(shè)備，其中過濾器的厚度為大約600μm。
12．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中過濾器的最小顆粒保留尺寸為5～100μm，優(yōu)選為8～60μm，更優(yōu)選為10～40μm。
13．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中過濾器具有用于支持此過濾器的底隔柵。
14．如權(quán)利要求6至13中任何一項所述的設(shè)備，其中在精子檢出裝置中有當(dāng)與精子發(fā)生相互作用時能夠直接或間接產(chǎn)生可見信號的一種試劑或組合的試劑。
15．如權(quán)利要求14的設(shè)備，其中的一種試劑或組合試劑包括檢出存在于精子中的抗原并能與精子結(jié)合的抗體。
16．如權(quán)利要求15的設(shè)備，其中的精子，當(dāng)被抗體固定時，可以用與精子結(jié)合的目視檢出劑進(jìn)行目視檢出。
17．如權(quán)利要求6至16中任何一項所述的設(shè)備，其中在精子檢出裝置中有一種精子化學(xué)吸引劑。
18．如權(quán)利要求17的設(shè)備，其中精子化學(xué)吸引劑位于精子檢出裝置的與樣品分離過濾器有一定距離的部分上。
19．如權(quán)利要求6至18中任何一項所述的設(shè)備，其中的拾取區(qū)位于樣品分離過濾器上，或者位于精子檢出裝置上，所述拾取區(qū)包括能夠與精子結(jié)合，并能與其一起轉(zhuǎn)移到精子檢出裝置檢出區(qū)的一種試劑或組合的試劑。
20．如權(quán)利要求19的設(shè)備，其中拾取區(qū)的一種試劑或組合試劑包括檢出在精子中存在的抗原的抗體。
21．如權(quán)利要求20的設(shè)備，其中檢出在精子中存在的抗原的抗體是可以標(biāo)記檢出的。
22．如權(quán)利要求21的設(shè)備，其中檢出在精子中存在的抗原的抗體是可以用金顆粒標(biāo)記檢出的。
23．如權(quán)利要求20、21或22的設(shè)備，其中位于精子檢出裝置檢出區(qū)的抗體，可以識別與位于拾取區(qū)的抗體不同的精子抗原。
24．如權(quán)利要求20、21和22的設(shè)備，其中位于精子檢出裝置檢出區(qū)的抗體，可以識別與位于提取區(qū)的抗體相同的精子抗原。
25．如權(quán)利要求6至24中任何一項所述的設(shè)備，其中精子檢出裝置包括一個精子頂體溶解試劑和一個用于檢測pH值變化的裝置。
26．如權(quán)利要求25的設(shè)備，其中精子頂體溶解試劑是溶解緩沖液。
27．如權(quán)利要求26的設(shè)備，其中溶解緩沖液含有蛋白酶K或鈣離子載體A24297。
28．如權(quán)利要求25、26或27的設(shè)備，其中用于檢測pH值變化的裝置是pH值敏感探頭。
29．如權(quán)利要求25、26或27的設(shè)備，其中檢測pH值變化的裝置是能夠目視檢出pH值變化的pH值指示劑。
30．如權(quán)利要求29的設(shè)備，其中pH值指示試劑是溴甲酚紫。
31．如前面任何一項權(quán)利要求所述的設(shè)備，其中樣品分離過濾器的接收樣品的表面含有酶液化劑。
32．包括如權(quán)利要求6至31中任何一項所述設(shè)備的測試男性生育能力的成套用具，該成套用具包括一個液體釋放機(jī)構(gòu)，其中當(dāng)此液體釋放機(jī)構(gòu)動作時，來自供液裝置的液體供給樣品分離過濾器的樣品過濾端，提供與精子檢出裝置的液體聯(lián)系。
33．如權(quán)利要求32的成套用具，其中檢出裝置是該成套用具的一個可分離組件。
34．如權(quán)利要求32或33的成套用具，它包括一個整體的供液裝置。
35．如權(quán)利要求34的成套用具，其中在供液裝置中所含的液體是緩沖液。
36．如權(quán)利要求32至35中任何一項所述的成套用具，其中該設(shè)備和底座形成了成套用具的兩個可分離組件。
37．如權(quán)利要求36的成套用具，其中將該設(shè)備放入底座中引起液體釋放機(jī)構(gòu)的動作。
38．如權(quán)利要求32至36中任何一項所述的成套用具，其中提供一種按鈕釋放來啟動液體釋放機(jī)構(gòu)。
39．如權(quán)利要求32至38中任何一項所述的成套用具，其中用液體浸濕精子檢出裝置使在其上面的檢出劑活化。
40．如權(quán)利要求32至39中任何一項所述的成套用具，它還包括一個溢流容器，用來盛放任何當(dāng)液體釋放機(jī)構(gòu)啟動時放入該設(shè)備的過量液體。
41．如權(quán)利要求的32至40中任何一項所述的成套用具，它包括一個供液裝置，該供液裝置包括一個易破的隔室，其中液體釋放機(jī)構(gòu)使該隔室破裂而釋放出其中所裝的液體。
42．如權(quán)利要求41的成套用具，其中從隔室中釋放的液體通過斜面引向在該設(shè)備和成套用具底部之間形成的槽。
43．如權(quán)利要求41或42的成套用具，其中隔室是可穿透的，而液體釋放機(jī)構(gòu)是一個穿透機(jī)構(gòu)。
44．如權(quán)利要求43的成套用具，其中一個制動機(jī)構(gòu)固定住該穿透機(jī)構(gòu)，該制動機(jī)構(gòu)在用戶啟動設(shè)備前防止穿透機(jī)構(gòu)穿透該隔室。
45．檢測在樣品中存在活動精子的方法，該方法包括(a)提供一個具有第一表面和第二表面的過濾器，當(dāng)液體放到第二表面上時，該過濾器允許活動精子遷移過，(b)將樣品施加到第一表面上，(c)將液體施加到第二表面上，以及(d)檢出遷移過該濾器的精子。
46．如權(quán)利要求45的方法，其中過濾器是裝在權(quán)利要求1至31中任何一項所述的設(shè)備中的過濾器。
47．如權(quán)利要求43的方法，其中過濾器是裝在權(quán)利要求32至44中任何一項所述的成套用具中的過濾器。
48．參照附圖基本如前面所敘述的將活動精子與非活動精子分離的設(shè)備。
49．參照附圖基本如前面所敘述的測試男性生育能力的成套用具。
50．參照附圖基本如前面所敘述的用于檢測樣品中分析物的方法。
51．參照附圖基本如前面所敘述的檢出樣品中活動精子的方法。
全文摘要
一種測試男性生育能力的成套用具(10),包括一個容器(12)、一個底座(14)、一個裝有液體(18)的供液裝置(16)和兩個過濾器(20、22)。第一過濾器(20)是樣品分離過濾器(20),它對精子的轉(zhuǎn)移構(gòu)成阻礙。該成套用具的第二過濾器(22)是包含用于鑒別精子的試劑的精子檢出過濾器(22)。直到轉(zhuǎn)移介質(zhì)如液體充填到間隔(24)從而使精子轉(zhuǎn)移到檢出區(qū)(26)以前,要防止成套用具的啟動。此成套用具可以是一件的結(jié)構(gòu),并使用了一件薄過濾材料將活動精子與非活動精子分離。
文檔編號G01N33/53GK1312855SQ9980965
公開日2001年9月12日 申請日期1999年8月13日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月14日
發(fā)明者P·N·巴特曼 申請人:基因診斷有限公司