專利名稱：白細(xì)胞分類和網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于分析抗凝全血的靜態(tài)樣品的裝置和方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種用于分析靜態(tài)血樣以便提供白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)分析、帶核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和檢測(cè)屬于罕有事件的異常帶核循環(huán)細(xì)胞(諸如癌細(xì)胞)的裝置和方法。
背景領(lǐng)域近來在血液分析學(xué)中的進(jìn)展已經(jīng)提高了從患者血樣中獲得的信息的質(zhì)量和數(shù)量。結(jié)果是對(duì)使用患者血樣作為診斷工具感興趣的醫(yī)療團(tuán)體也得到了增加，對(duì)抗凝全血進(jìn)行的最普遍進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)是全血計(jì)數(shù)(或CBC)，這是一套試驗(yàn)，除對(duì)細(xì)胞成分和血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)外，它還可以包括紅細(xì)胞度量、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和屬于存在于血樣中的白細(xì)胞類型的分類的白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(LDC或“Diff”)。樣品的一般物理特性即各種細(xì)胞或計(jì)數(shù)必須使用與整個(gè)樣品相關(guān)的定量方法來分析。在常規(guī)的測(cè)量裝置和方法中，要求精確的樣品計(jì)量和稀釋、其次是特定的測(cè)定裝置。另外，該儀器必須測(cè)定各細(xì)胞的定量情況，通常包括給一種高度稀釋的樣品提供稀釋的物質(zhì)通過使用電學(xué)或光學(xué)方式測(cè)定該池的流動(dòng)池的連續(xù)通道。再進(jìn)一步說，將定性測(cè)定用于對(duì)由特異性亞群組成的總白細(xì)胞百分比進(jìn)行分類。亞群的數(shù)量取決于所涉及儀器的精致程度，它可以是僅兩個(gè)或7個(gè)以上的分類。
從歷史的觀點(diǎn)來看，使用從用于計(jì)數(shù)的那些方法分離出來的方法已經(jīng)完成了CBC的分類方面。例如，通過將小量的未稀釋的血液涂在栽玻片上、染色干燥固定的涂片并在顯微鏡下檢驗(yàn)所述的涂片可以傳統(tǒng)地進(jìn)行CBC的LDC部分。從這類涂片中可以獲得合理的結(jié)果，但是數(shù)據(jù)的精確性和可靠性主要取決于技師的經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)。這類涂片的一個(gè)難題在于必須將細(xì)胞殺死并將其固定，且這會(huì)使結(jié)果取決于活細(xì)胞的許多類型的超活體染色和分析變得不可能，諸如某些細(xì)胞化學(xué)分析。此外，血液涂片的應(yīng)用是使得勞動(dòng)密集且成本過高，且由此一般不利于商業(yè)化應(yīng)用。
另一種進(jìn)行LDC的方法使用電阻抗或光學(xué)流式細(xì)胞儀。流式細(xì)胞儀涉及使稀釋的血樣流過小導(dǎo)管，其中當(dāng)它們連續(xù)流過導(dǎo)管時(shí)電阻抗或光學(xué)傳感器可以評(píng)估組成的細(xì)胞。還可以將相同的裝置用于同時(shí)統(tǒng)計(jì)并提供細(xì)胞計(jì)量數(shù)據(jù)。為了評(píng)估WBC’S，必須將血樣稀釋并必須將樣品進(jìn)行處理以便調(diào)節(jié)相對(duì)于WBC’S來說占優(yōu)勢(shì)的RBC’s的數(shù)量。盡管比上述涂抹法更為方便而穩(wěn)定，但是流式細(xì)胞儀也具有幾個(gè)缺陷。流式細(xì)胞儀的一個(gè)缺陷是對(duì)于控制稀釋血樣通過傳感器的流速所必須的管道系統(tǒng)和流量控制。目前的流式細(xì)胞儀中的管道系統(tǒng)可以且經(jīng)常發(fā)生滲漏，由此可潛在地危害儀器的精確度和安全性。這些分析還通常不能夠提供任何類型的形態(tài)測(cè)量分析，這是因?yàn)闆]有得到各細(xì)胞的實(shí)際影象；僅可以分析來自任意得到細(xì)胞的總信號(hào)。許多目前的流式細(xì)胞儀的另一個(gè)缺陷與內(nèi)部液體的流量控制和自動(dòng)稀釋裝置的精確度相關(guān)。流式細(xì)胞儀的精確度取決于液體流量控制和樣品稀釋裝置的精確度及其保持精確校準(zhǔn)的能力。流量控制和稀釋裝置需要定期重新校準(zhǔn)。對(duì)重新校準(zhǔn)的需求說明了使用許多目前可得到的流式細(xì)胞儀存在的不精確結(jié)果和不理想的操作成本的潛在性。由John L．Haynes所著并公開在《細(xì)胞計(jì)量術(shù)增刊》(Cytometry Supplement)37-17(1988)的文章描述了流式細(xì)胞儀(電阻抗和光學(xué))的原理和這類技術(shù)在所致力的各領(lǐng)域中的應(yīng)用。無論在何種情況下，均將流式細(xì)胞儀中所檢驗(yàn)的血樣從10∶1稀釋至50，000∶1。
另一種用于細(xì)胞分析的手段是如美國(guó)專利5，547，849；5，585，246及其它中所概括的容量毛細(xì)管掃描法，其中將相對(duì)未稀釋的全血樣品放入已知體積和厚度的毛細(xì)管中并在血液處于靜態(tài)時(shí)檢驗(yàn)它們。該項(xiàng)技術(shù)通過限定掃描波長(zhǎng)到紅細(xì)胞相對(duì)透明的波長(zhǎng)而處理紅細(xì)胞的存在，且它需要將樣品處理成紅細(xì)胞在測(cè)定過程中不聚集。因此，該項(xiàng)技術(shù)被限定到應(yīng)用較長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光，且無法保障對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞或帶核紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。另外，如同流式細(xì)胞儀一樣，從掃描中無法得到形態(tài)信息。存在許多用于進(jìn)行CBC或相關(guān)檢測(cè)試驗(yàn)的可得到的商品儀器，而那些可提供幾種以上CBC檢測(cè)試驗(yàn)的儀器很快會(huì)變得復(fù)雜、昂貴的情況并易發(fā)生故障。此外，存在大量推薦用于特異性血液檢測(cè)試驗(yàn)的方法，但它們無法提供在CBC中所預(yù)計(jì)的所有臨床上有用的信息。
所有上述方法通常均被限定到單一的分析模式，其中組織化學(xué)染色和細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)合起來是不可能的。具有進(jìn)行這兩類檢測(cè)試驗(yàn)的能力將擴(kuò)展可以由所述方法識(shí)別的類別的數(shù)量。
理想的情況是存在一種用于檢驗(yàn)抗凝全血的靜態(tài)樣品的方法和裝置，該方法和裝置能夠提供精確的LDC、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和帶核紅細(xì)胞與異常的循環(huán)帶核細(xì)胞(諸如癌細(xì)胞)的檢測(cè)的結(jié)果且不需樣品液體在樣品分析過程中流過取樣室。
本發(fā)明的公開內(nèi)容本發(fā)明涉及一種用于檢驗(yàn)并獲得來自在室中所包含的靜態(tài)的基本上未稀釋的抗凝全血樣品的信息的方法和裝置。與本發(fā)明相關(guān)所用的術(shù)語(yǔ)“基本上未稀釋的”指的是按不超過1∶1且優(yōu)選更低比例稀釋的血樣。一般來說，在實(shí)施本發(fā)明方法中所用的僅有的試劑是染料、染色劑和抗凝劑且不將這些試劑(即使它們是液體)用來稀釋樣本?？梢栽诰哂泄潭ㄉ疃鹊氖覂?nèi)進(jìn)行分析，條件是該深度可支持形成的紅細(xì)胞聚集和胞隙(lacunae)，這種聚集和胞隙可在一種具有約7至約40微米厚度的層中形成，這取決于樣品的血細(xì)胞比容。然而，具有固定的深度使得更難以分析具有廣泛變化的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的樣品且對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞同時(shí)計(jì)數(shù)在這類室中是不可能的。優(yōu)選的情況是使用具有如下所述的可變通過面厚度的室。在該室中的幾個(gè)區(qū)會(huì)在該室的所有區(qū)中產(chǎn)生足夠的毛細(xì)管力以便使血樣擴(kuò)散至整個(gè)室中，這最終在該室中產(chǎn)生靜態(tài)血樣。在分析時(shí)，血樣中的唯一運(yùn)動(dòng)是血樣的成形組分的布朗運(yùn)動(dòng)，這種運(yùn)動(dòng)并不使本發(fā)明變得無用。所述的裝置包括具有相對(duì)的樣品容納壁(其中至少一個(gè)是透明的)的樣品收集室，所述的壁優(yōu)選在該室的至少一部分中會(huì)聚。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述室的通過面厚度由此在該室的不同區(qū)內(nèi)變化。本公開內(nèi)容中所用的術(shù)語(yǔ)“通過面(though plane)”指的是相當(dāng)于所述室的任何區(qū)內(nèi)的會(huì)聚壁之間最短距離的視線。正如下文所述，在所述室內(nèi)的任意特定點(diǎn)處的兩壁會(huì)聚程度即兩壁之間的距離是已知的或者在將樣品放入該室后可以測(cè)定它。
可以依一定尺寸來制造室中的最薄區(qū)以便當(dāng)血樣充滿該室時(shí)存在于樣品中的各個(gè)紅細(xì)胞單層形成。所述室中該區(qū)的厚度應(yīng)在約2至約7微米的范圍，且優(yōu)選約為5微米。由此在所述室的該區(qū)中可以得出紅細(xì)胞的網(wǎng)織紅細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的測(cè)定值。
從該室的薄部分起增加室的厚度以便在用于區(qū)分和以區(qū)分方式對(duì)血樣中的各種白細(xì)胞類和帶核紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的該室中逐漸形成較厚的區(qū)。帶核紅細(xì)胞趨向于接近小淋巴細(xì)胞的大小，但是它們可以更大。在該區(qū)中室的厚度一般在約7至約40微米的范圍。所述的室包含在可抽入血樣的樣品收集器內(nèi)。
將所檢測(cè)的樣品與可以是例如一種或多種熒光染料的著色劑進(jìn)行混合并使所得的混合物擴(kuò)散在該室內(nèi)以便形成因室中壁會(huì)聚而具有可變厚度的靜態(tài)樣品?？梢栽趯悠芳尤氲绞抑兄疤砑又珓┗蛟跇悠诽幱谑业姆秶鷥?nèi)的同時(shí)將著色劑添加到樣品中，諸如通過將著色劑干燥涂布在室壁上。在室中有意義的區(qū)受到具有選擇的一種或多種波長(zhǎng)的光源選擇性地照射，這導(dǎo)致樣品中的著色劑發(fā)出熒光。在血樣中包含有紅細(xì)胞單層和白細(xì)胞和紅細(xì)胞錢串的室中的區(qū)由此得到掃描(優(yōu)選被一種光學(xué)儀器掃描)且可以將掃描的結(jié)果數(shù)字化并進(jìn)行分析。正如由熒光所確定的，在所述室的該區(qū)中還可以得到具有由大小和RNA含量所分類的血小板的血小板分類計(jì)數(shù)，而在所述的室的該區(qū)中紅細(xì)胞錢串物和胞隙形成。具有增加的RNA的血小板是較新鮮的血小板。
本發(fā)明提供了一種用于在抗凝全血樣品中進(jìn)行至少三部分白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，該方法包括下列步驟提供一種尺寸的取樣室以便使在導(dǎo)入室的基本上未稀釋的抗凝全血樣品中的紅細(xì)胞群聚集并使各個(gè)白細(xì)胞與紅細(xì)胞分離開來。在取樣室中形成發(fā)熒光的一種或多種著色劑與抗凝全血樣品的混合物。所述的一種或多種著色劑可有效地以區(qū)分方式使全血中的至少三種不同的白細(xì)胞類型、且優(yōu)選使五種不同的白細(xì)胞類型變得突出。使該混合物經(jīng)所述的室分散以便在樣品的光學(xué)工作視野中的血漿開放胞隙內(nèi)形成一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立的白細(xì)胞的分離的靜態(tài)群體。應(yīng)理解當(dāng)紅細(xì)胞聚集時(shí)將所述的白細(xì)胞大規(guī)模從紅細(xì)胞團(tuán)中除去。然而，為了本發(fā)明的目的，白細(xì)胞可以位于紅細(xì)胞聚集體的各紅細(xì)胞上部而仍然會(huì)得到檢測(cè)和估計(jì)，條件是白細(xì)胞對(duì)于掃描儀來說是可見的。通過在合適發(fā)光條件下的室中對(duì)分散的混合物進(jìn)行逐個(gè)視野的X-Y-Z掃描來對(duì)視野進(jìn)行光學(xué)掃描，所述的合適的發(fā)光條件會(huì)使得至少三種且優(yōu)選五種或五種以上的不同白細(xì)胞類型由所述一種或多種著色劑以區(qū)分方式變得突出。對(duì)所述混合物中檢測(cè)的全部差示突出的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)且所計(jì)數(shù)的細(xì)胞由細(xì)胞類型來分類。因?yàn)樵诩?xì)胞中存在核物質(zhì)，所以可以將相同的著色劑和光照條件用于在血樣中完成網(wǎng)織紅細(xì)胞或帶核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。就網(wǎng)織紅細(xì)胞而言，細(xì)胞中的核物質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞核的剩余部分諸如胞內(nèi)RNA，且某些情況中是胞內(nèi)DNA。存在于網(wǎng)織紅細(xì)胞中的差示發(fā)出熒光的胞內(nèi)物質(zhì)可以稱為“胞內(nèi)帶核物質(zhì)剩余物”在所述室的最薄區(qū)內(nèi)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞和不帶核紅細(xì)胞參數(shù)分析，其中，各個(gè)成熟紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞單層以及網(wǎng)織紅細(xì)胞可望根據(jù)其大小來檢測(cè)。
因此本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于在靜態(tài)抗凝全血樣品中獲得某些帶核血細(xì)胞和血小板的血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法和裝置。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種具有所述特征的方法和裝置，其能夠?qū)Υ龣z測(cè)的基本上未稀釋的全血樣品進(jìn)行白細(xì)胞亞群分類計(jì)數(shù)、總白細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、帶核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)并檢測(cè)異常帶核循環(huán)細(xì)胞(諸如癌細(xì)胞)。
附圖的簡(jiǎn)要說明當(dāng)結(jié)合附圖考慮時(shí)，本發(fā)明的這些和其它目的和優(yōu)點(diǎn)將從下列本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方案的具體描述中變得更為顯而易見，其中附

圖1是包括樣品接收室的血樣分析裝置的透視示意圖，所述的室包括可變的通過面厚度區(qū)；附圖2是從室中最小通過面厚度區(qū)至室中任意其它通過面厚度區(qū)的室的厚度與距離之間關(guān)系圖，實(shí)線是代表諸如附圖1中所示線性室且虛線是代表非線性可變厚度室；附圖3是按照本發(fā)明制成的可變厚度室的一部分的平面示意圖且圖面意義說明了靜態(tài)血樣中各種大小的成形組分如何分離入室中的不同的厚度的區(qū)以便在室中的不同視野內(nèi)是各自可見的；附圖4是表示可由樣品掃描儀觀測(cè)到的四個(gè)不同視野的室的一部分的平面示意圖；附圖5是可用于鑒定、計(jì)數(shù)和分析室中放置的抗凝全血樣品成形成分某種特征的掃描儀的示意圖；附圖6是表示在一套特定分析條件下白細(xì)胞群群集情況的二維圖；附圖7是表示在第二套分析條件下附圖6的群體之一的亞群的二維圖；且附圖8是表示在第三套分析條件下附圖6群體之一的亞群的二維圖。
本發(fā)明特定實(shí)施方案的具體描述現(xiàn)在參照附圖解釋，附圖1是通常由數(shù)字2指示的裝置的圖解說明，該裝置2包括裝樣品的室14，該室具有可變的通過面厚度。所述的裝置2包括下部承載壁4，對(duì)于解釋的目的來說，它可以是例如一種顯微鏡栽玻片。該裝置還可以包括直線圍繞的墊片6和上部壁8，對(duì)于解釋目的來說，所述的上部壁可以是例如一種顯微鏡栽玻片的蓋玻片。壁4和8中至少一個(gè)是透明的以便可以通過透明壁4或8檢驗(yàn)分布在兩壁之間的樣品。如果需要，那么壁4和8兩者均可以是透明的。壁8具有依托于(或非常接近于)壁4的一邊10且相對(duì)的邊12置于墊片S的上表面。正如附圖1中所觀察到的，壁4和8之間的會(huì)聚關(guān)系的結(jié)果是形成具有可變通過面厚度的室14，所述的通過面厚度從壁8的邊10增加到相對(duì)的邊12。
附圖2是表示室14的厚度如何可以在最薄邊10至最厚邊12之間改變的圖解表示。實(shí)線PL表示由線性室構(gòu)造導(dǎo)致的厚度-距離關(guān)系且虛線PNL表示由非線性室構(gòu)造導(dǎo)致的厚度-距離關(guān)系。
附圖3是包括室14的裝置2的平面圖以及存在于所檢驗(yàn)血樣中任何不同大小的成形組分在所述室14充滿樣品時(shí)以靜止方式分布在室14中的方式的圖解表示。數(shù)字10指示室14中厚度較小的區(qū)，而數(shù)字12指示室14中厚度較大的區(qū)。在附圖3中所述裝置2的表示中，所描繪的室14的部分中存在三個(gè)不同厚度的區(qū)A、B和C。A區(qū)是室14中厚度較小的區(qū)；B區(qū)是室14中中等厚度的區(qū)；而C區(qū)是室14中厚度最大的區(qū)。顯然，僅將這種特定數(shù)量的不同厚度的區(qū)用來說明本發(fā)明優(yōu)選的室14的主要特征、而不用來限定本發(fā)明，這是因?yàn)槿缟纤龅氖?4可以包括實(shí)質(zhì)上不定數(shù)量的不同厚度的區(qū)。還存在附圖3中所示的三個(gè)不同視野1、3和5。將這些視野1、3和5描繪成圓圈形以便說明由一種光學(xué)儀器諸如顯微鏡所觀察到的視野。在附圖3中所描繪的說明中，血樣已經(jīng)充滿室14且已經(jīng)靜止了至少幾秒鐘。在室14最薄的A區(qū)中發(fā)現(xiàn)了扁平的紅細(xì)胞，其呈單獨(dú)形式存在32或以單層形式31存在。在A區(qū)中還發(fā)現(xiàn)了幾個(gè)血小板30。在室14的A區(qū)中可以進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞和不帶核紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，正如下文所述。
在B區(qū)中的下部中，有足夠的空間供紅細(xì)胞形成紅細(xì)胞錢串物或其它聚集體33，它們由因形成紅細(xì)胞錢串物而不含紅細(xì)胞的血漿胞隙圍繞。在視野3中有足夠的室體積以便進(jìn)行白細(xì)胞34以及帶核紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分類。由此可以在該區(qū)中檢測(cè)白細(xì)胞34的表面受體位點(diǎn)；可以對(duì)白細(xì)胞34進(jìn)行分類；可以對(duì)白細(xì)胞34進(jìn)行容量測(cè)定；可以對(duì)其進(jìn)行形態(tài)研究；且有關(guān)白細(xì)胞34的另外的一些信息可以來源于B區(qū)上部中的血樣。當(dāng)室的厚度增加到C區(qū)中所示的厚度時(shí)，紅細(xì)胞聚集體33形成匯合層，且盡管可以將該區(qū)用于極少的白細(xì)胞計(jì)數(shù)，但是探測(cè)白細(xì)胞的能力降低了。
附圖4是室14的一段的平面圖，其中數(shù)字12指示室14較厚的端且數(shù)字10指示室14較薄的端。具有在最薄部分10處約0微米至在最厚部分12處約200微米之間變化的可變厚度的室14允許每單位體積樣品有100倍動(dòng)態(tài)范圍的血樣顆粒狀物計(jì)數(shù)。有4個(gè)附圖4中所示的圖解視野7’、7、9和11。在視野7、9和11的每一個(gè)中描繪了成形組分32，而在視野7’中沒有顯示出任何成形組分。在視野7’、7和9中還描繪了胞隙35，而在視野11中沒有。
附圖5是通常由數(shù)字54指示的自動(dòng)比色顯微儀器組件的圖解描繪，且可以將它用于掃描裝置2中所包含的血樣并且它可以對(duì)來自血樣中不同白細(xì)胞類型、網(wǎng)織紅細(xì)胞和帶核紅細(xì)胞的顏色發(fā)射波長(zhǎng)進(jìn)行比色分析而沒有明顯的人為干擾，由此對(duì)這些細(xì)胞類型彼此進(jìn)行鑒定和區(qū)分。將儀器組件54設(shè)計(jì)成可生成并儲(chǔ)存或輸送經(jīng)掃描血樣中的不同白細(xì)胞類型、網(wǎng)織紅細(xì)胞和帶核紅細(xì)胞的影象。所述的儀器組件54包括包含可接合樣品收集器2的夾子58并能夠在掃描樣品收集器2中的內(nèi)含物時(shí)使樣品收集器2沿X和Y方向橫向運(yùn)動(dòng)的工作臺(tái)56。
可以將可逆電動(dòng)機(jī)59用于選擇性地以相反方向旋轉(zhuǎn)驅(qū)動(dòng)螺桿60以便樣品收集器2沿X和Y方向橫向運(yùn)動(dòng)。在這種方式中，可以掃描樣品收集器2中的全部?jī)?nèi)含物。所公開的自動(dòng)實(shí)施方式的儀器組件54包括CCD照相機(jī)62、光束分離器64和可以沿Z方向選擇性運(yùn)動(dòng)以便聚焦在樣品收集器組件2中的含樣品的部分上的透鏡組66。CCD照相機(jī)62可通過安裝在選擇性旋轉(zhuǎn)濾器輪74上的多個(gè)不同發(fā)射光波濾器68、70和72來查看并記錄樣品的影象。所述的儀器組件54還包括通過光束分離器64和聚焦透鏡組66將激發(fā)光束射向樣品收集器2的高強(qiáng)度激發(fā)光源75(諸如鹵素光源)?？蓪⒁幌盗屑ぐl(fā)光波長(zhǎng)濾器76、78和80安裝在選擇性旋轉(zhuǎn)濾器輪82上。通過光束分離器64使激發(fā)光束發(fā)生折射到聚焦透鏡66且該光束被透鏡66聚焦在樣品收集器2上。因此，兩個(gè)濾器輪74和82使得可以控制并改變激發(fā)光源以及發(fā)射光源的波長(zhǎng)。預(yù)編程的微處理機(jī)控制器84可有效地選擇性控制樣品收集器2的運(yùn)動(dòng)、濾器輪74和82的轉(zhuǎn)動(dòng)和CCD照相機(jī)62的操作。控制器84由此能夠使儀器組件12全自動(dòng)操作而無需明顯的人為干擾。
如上所述，在進(jìn)行包括在室14中得到白細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞和帶核紅細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)的樣品檢驗(yàn)過程中，當(dāng)掃描儀對(duì)室14尋找室14中的有用區(qū)時(shí)，可以觀察到附圖4中所示的視野諸如7’、7、9和11。
當(dāng)掃描儀已經(jīng)觀測(cè)到具有顯著臨床意義數(shù)量的有用細(xì)胞時(shí)，它會(huì)完成白細(xì)胞分類的示差分析以及網(wǎng)織紅細(xì)胞和帶核紅細(xì)胞的分析。什么構(gòu)成了統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的計(jì)數(shù)組分的確定將取決于預(yù)定的臨床上對(duì)計(jì)數(shù)程序誤差接受的限度?？梢岳斫膺@種數(shù)量將隨所計(jì)數(shù)的是何種組分的不同而改變。
白細(xì)胞、帶核紅細(xì)胞和含有核物質(zhì)的核糖體剩余物的網(wǎng)織紅細(xì)胞可以通過由485nm范圍內(nèi)的光激發(fā)時(shí)細(xì)胞在530nm處、585nm處和660nm處的特征熒光并通過當(dāng)560nm光激發(fā)時(shí)細(xì)胞在610nm處的熒光來鑒定，所述的細(xì)胞存在于樣品中并是用著色劑諸如堿性橙21超活體染色。儀器54可以在所述室內(nèi)將靜態(tài)白細(xì)胞分離成由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞組成的可區(qū)分的組?？梢允褂镁哂蓄愃撇ㄩL(zhǎng)的其它染料諸如吖啶橙來進(jìn)行類似的分析。
分類或區(qū)分不同血細(xì)胞的優(yōu)選方法如下所述。用485nm的激發(fā)波長(zhǎng)照射含有白細(xì)胞且還可以含有大的帶核紅細(xì)胞的多個(gè)視野并確定白細(xì)胞和任意帶核的紅細(xì)胞的位置。定位的算法依賴于這樣一個(gè)事實(shí)，即白細(xì)胞和某些大的帶核紅細(xì)胞在發(fā)出熒光的任何視野中是唯一的大目標(biāo)。確定所需數(shù)量白細(xì)胞的位置并記錄5個(gè)發(fā)射值，其中L1、L2和L3是分別來自530nm、580nm和660nm處各細(xì)胞的總發(fā)射值，且其中通過加合來自細(xì)胞影象的象素強(qiáng)度來確定總發(fā)射值；AL1是在485nm處激發(fā)時(shí)各細(xì)胞在530nm處的平均象素強(qiáng)度；AL5是用560nm的光激發(fā)細(xì)胞時(shí)在610nm處測(cè)定的各細(xì)胞的平均象素強(qiáng)度；且A580是當(dāng)在488nm處激發(fā)時(shí)由580nm處的發(fā)射值確定的細(xì)胞的面積。因此，用于區(qū)分細(xì)胞類型的數(shù)據(jù)包括光測(cè)數(shù)據(jù)(L1、L2、L3)以及形態(tài)測(cè)量數(shù)據(jù)(AL1、AL5、A580)。
附圖6表示由儀器54成象的作為二維空間顯示的細(xì)胞，其中Y軸是L1／L2之比且X軸是L2／L3之比。使用群分析法，將細(xì)胞分類成三種群體，其中群體40代表嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，群體41代表單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞且群體42代表嗜堿性粒細(xì)胞。這些是僅以光測(cè)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)的細(xì)胞分離類型。為了得到更為確定的分離，附加形態(tài)測(cè)量數(shù)據(jù)將進(jìn)一步細(xì)分所述群體以便進(jìn)行更多細(xì)胞類型的鑒定。
附圖7表示正在進(jìn)行進(jìn)一步二維群體分析的群體40，其中X軸是AL1／AL5之比且Y軸是L1／L3之比。目前這種群體分析將原始群體40分成兩個(gè)代表嗜酸性粒細(xì)胞43和嗜中性粒細(xì)胞44的獨(dú)立群體。
如果對(duì)群體41進(jìn)行如附圖8中所示的另外的群體分析，其中X軸是A580且Y軸是L1／L3之比，那么可以將群體41分離成其兩個(gè)成分即單核細(xì)胞46和淋巴細(xì)胞45。因此，上述步驟能夠?qū)准?xì)胞群體細(xì)分成至少5個(gè)亞群。通常將所鑒定并計(jì)數(shù)的不同類型的白細(xì)胞記錄為該過程中掃描的白細(xì)胞總數(shù)的百分比。
通過測(cè)定在485nm處激發(fā)時(shí)來自各紅細(xì)胞的585nm和660nm熒光的總強(qiáng)度來確定紅細(xì)胞群體中網(wǎng)織紅細(xì)胞的存在，且將具有的總熒光高于正常紅細(xì)胞的那些細(xì)胞確定為網(wǎng)織紅細(xì)胞。類似地，將在530nm處顯示出強(qiáng)熒光的那些紅細(xì)胞看作是帶核紅細(xì)胞。
上述實(shí)施例已經(jīng)使用了表示細(xì)胞一般特性的超活體染色，但是也能夠使用可以用熒光染料標(biāo)記或用著色或熒光顆粒狀物標(biāo)記的特異性表位結(jié)合劑諸如抗體。它們可以用于基于表面抗原或其它結(jié)合基進(jìn)一步分離帶核細(xì)胞的亞群。這些實(shí)例是將CD4和CD8淋巴細(xì)胞與一般淋巴細(xì)胞群體區(qū)分開來的標(biāo)記物。本發(fā)明的方法不會(huì)受到視野內(nèi)所掃描血樣中存在的紅細(xì)胞的不利影響且由此不需顯著的樣品制備過程，諸如各種細(xì)胞類型的稀釋或重量分離過程。形態(tài)測(cè)量信息諸如大小、粒度、帶核物質(zhì)的含量、表面受體等可以通過本發(fā)明的技術(shù)來檢測(cè)。
由于可以對(duì)本發(fā)明所公開的實(shí)施方案進(jìn)行許多修改和變化而不會(huì)脫離本發(fā)明的基本原則，因此除作為所附權(quán)利要求書的要求外，均不用來限定本發(fā)明。
權(quán)利要求
1．一種用于在取樣室(14)中包含的抗凝全血樣品中進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，所述方法的特征在于a)在所述取樣室中裝入至少一種熒光著色劑和抗凝全血的混合物的步驟，所述的著色劑可有效地以區(qū)分方式使全血中的不同白細(xì)胞類型(34)變得突出；b)使所述混合物充份分散至所述室中以便形成與樣品光學(xué)工作視野內(nèi)一個(gè)或多個(gè)單個(gè)的白細(xì)胞靜態(tài)群相關(guān)的紅細(xì)胞聚集體(33)的步驟；c)在會(huì)產(chǎn)生由所述著色劑以區(qū)分方式突出的不同白細(xì)胞類型的合適光照條件下在所述室中對(duì)所分散的混合物進(jìn)行多視野X-Y-Z光學(xué)掃描的步驟；d)以光測(cè)和／或形態(tài)測(cè)量方式將不同白細(xì)胞亞群分離成不同群體(40、41、42、43、44、45、46)以便區(qū)分所述掃描步驟中檢測(cè)的白細(xì)胞亞群的步驟；e)在各亞群群體中對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類的步驟；和f)獲得在由所述分離步驟中產(chǎn)生的各群體中的白細(xì)胞各不同亞群的分類計(jì)數(shù)的步驟。
2．權(quán)利要求1的方法，其中所述的室中配有可變通過面，或Z軸，厚度，該厚度可在進(jìn)行所述掃描步驟的所述室的區(qū)域內(nèi)從最小約為0至約10微米到最大約為20微米至約為50微米的范圍變化。
3．權(quán)利要求1的方法，其中將所述的白細(xì)胞分離成不同的靜態(tài)群體，該群體包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。
4．一種用于在具有可變通過面厚度的取樣室(14)中所包含的抗凝全血樣品中進(jìn)行帶核血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，所述的方法的特征在于a)在所述取樣室中裝入至少一種熒光著色劑和抗凝全血的混合物的步驟，所述的著色劑可有效地以區(qū)分方式使全血中的不同帶核血細(xì)胞類型(34)變得突出；b)在會(huì)產(chǎn)生由所述著色劑以區(qū)分方式突出不同帶核細(xì)胞類型的合適光照條件下在所述室中對(duì)所分散的混合物進(jìn)行多視野X-Y-Z光學(xué)掃描的步驟；c)以光測(cè)和／或形態(tài)測(cè)量方式將至少一種帶核血細(xì)胞亞群分離成不同群體(40、41、42、43、44、45、46)以便將帶核血細(xì)胞亞群與在所述掃描步驟中檢測(cè)的其它帶核細(xì)胞區(qū)分開來的步驟；d)對(duì)所述帶核血細(xì)胞亞群群體中的帶核血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類的步驟；和e)在由所述分離步驟中產(chǎn)生的所述群體中產(chǎn)生帶核血細(xì)胞各亞群的細(xì)胞計(jì)數(shù)的步驟。
5．一種用于在與一種或多種可有效地以區(qū)分方式使血樣中網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)帶核物質(zhì)的剩余物變得突出的熒光著色劑混合的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，所述的血樣和著色劑包含在具有可變厚度區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)，所述的方法的特征在于a)用具有視野的光學(xué)儀器(54)掃描血樣的步驟；b)在所述靜態(tài)血樣中確定視野(7’、7、9、11)位置的步驟，該視野含有單個(gè)紅細(xì)胞或紅細(xì)胞單層；c)用所選擇波長(zhǎng)的光照射靜態(tài)血樣中的所述確定的視野以便以區(qū)分方式使所述確定的視野內(nèi)紅細(xì)胞中帶核物質(zhì)的任何剩余物變得突出的步驟；和d)在所述視野中對(duì)任何以區(qū)分方式突出的紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的步驟。
6．一種用于在與一種或多種可有效地以區(qū)分方式使血樣內(nèi)白細(xì)胞(34)中帶核物質(zhì)變得突出的熒光著色劑混合的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，所述的血樣和著色劑包含在具有可變厚度區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)，所述的方法的特征在于a)用具有視野(7’、7、9、11)的光學(xué)儀器(54)掃描血樣的步驟；b)在所述靜態(tài)血樣中確定并掃描視野的步驟，該視野中包含單個(gè)白細(xì)胞和紅細(xì)胞聚集體(33)；c)用所選擇波長(zhǎng)的光照射靜態(tài)血樣中的所述視野以便以區(qū)分方式使所述確定的視野內(nèi)白細(xì)胞中任何帶核物質(zhì)變得突出的步驟；和d)在所述確定并掃描的視野中對(duì)所有以區(qū)分方式突出的白細(xì)胞進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)以便獲得白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的步驟，所述的分類步驟基于發(fā)源自所述以區(qū)分方式突出的白細(xì)胞的光發(fā)射差異。
7．權(quán)利要求6的方法，其中所述的著色劑可有效地根據(jù)發(fā)源自各種類型白細(xì)胞的不同信號(hào)特征來彼此區(qū)分白細(xì)胞類型，由此白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)可以產(chǎn)生于所述的血樣。
8．權(quán)利要求6的方法，其中所述的分類步驟包括使用獲自所述光發(fā)射差異的光測(cè)和形態(tài)測(cè)量的細(xì)胞信息。
9．一種用于在與一種或多種可有效地以區(qū)分方式使血樣內(nèi)白細(xì)胞(34)中胞內(nèi)染料結(jié)合的物質(zhì)變得突出的熒光著色劑混合的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，所述的血樣和著色劑包含在具有可變通過面厚度區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)，所述的方法的特征在于a)在所述靜態(tài)血樣中確定有用的視野(9)的步驟，其包含至少一種預(yù)定量的分離自紅細(xì)胞聚集體(33)的單個(gè)白細(xì)胞；b)用至少一種預(yù)定波長(zhǎng)的光照射所述有用的視野的步驟，所述波長(zhǎng)的光以區(qū)分方式使白細(xì)胞中所包含的胞內(nèi)結(jié)合染料的物質(zhì)變得突出并使所照射的白細(xì)胞發(fā)射光；c)以兩種或多種不同波長(zhǎng)測(cè)定所述照射的白細(xì)胞的發(fā)射光的步驟；和d)以一種區(qū)分白細(xì)胞彼此類型的方式分析所述不同波長(zhǎng)的發(fā)射光的步驟。
11．權(quán)利要求10的方法，其中通過使用來源于所述發(fā)射光的光測(cè)信息和／或形態(tài)測(cè)量信息進(jìn)行所述的區(qū)分步驟，且進(jìn)一步包括對(duì)這類所區(qū)分的白細(xì)胞類型進(jìn)行計(jì)數(shù)的步驟。
12．一種用于鑒定至少一種含有帶核物質(zhì)或含有帶核物質(zhì)胞內(nèi)剩余物的靶細(xì)胞亞群的方法，所述的靶細(xì)胞包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含單個(gè)分離細(xì)胞的(A)區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中，所述的區(qū)具有約0微米至約40微米范圍的通過面厚度，所述的方法的特征在于a)在所述區(qū)內(nèi)對(duì)所選擇的視野(1、3)進(jìn)行光學(xué)掃描的步驟，該視野包含有單個(gè)紅細(xì)胞(32)和／或紅細(xì)胞單層(31)和／或紅細(xì)胞聚集體(33)；b)用一種或多種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑產(chǎn)生多個(gè)已知波長(zhǎng)的帶核物質(zhì)或剩余帶核物質(zhì)熒光發(fā)射，該發(fā)射是各細(xì)胞亞群的特征；和c)在所述的多個(gè)已知波長(zhǎng)處分析所述的發(fā)射以便鑒定視野中細(xì)胞亞群的步驟。
13．權(quán)利要求12的方法，其中所述的觀測(cè)室包括附加的C區(qū)，該區(qū)具有大于約40微米的通過面厚度。
14．權(quán)利要求12的方法，其中所述的著色劑是超活體染色劑。
15．權(quán)利要求12的方法，其中所述的帶核細(xì)胞亞群是白細(xì)胞(34)亞群。
16．權(quán)利要求12的方法，其中所述的帶核細(xì)胞亞群是紅細(xì)胞(32)亞群。
17．權(quán)利要求12的方法，其中所述的著色劑是針對(duì)帶核細(xì)胞亞群上表位的結(jié)合顆粒的部分。
18．權(quán)利要求12的方法，其中所述的發(fā)射的特征在于可用于鑒定所研究的亞群的光測(cè)和／或形態(tài)測(cè)量特征。
19．一種用于鑒定至少一種包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含紅細(xì)胞聚集體(33)和各自分離的帶核細(xì)胞(34)的B區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中的帶核血細(xì)胞亞群的方法，所述的區(qū)具有不大于約50微米的通過面厚度，所述的方法的特征在于a)用一種光學(xué)掃描儀(54)在所述區(qū)內(nèi)掃描所選擇的視野的步驟；b)用一種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑在多個(gè)已知波長(zhǎng)處產(chǎn)生熒光發(fā)射，該發(fā)射是帶核細(xì)胞亞群的特征；和c)在所述的多個(gè)已知波長(zhǎng)處分析所述的發(fā)射以便鑒定視野中任何帶核細(xì)胞亞群的步驟。
20．一種鑒定包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含各自分離的帶核細(xì)胞(34)的(B)區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中的帶核細(xì)胞亞群的方法，所述的區(qū)具有不大于約50微米的通過面厚度，所述的方法的特征在于a)用一種光學(xué)掃描儀(54)在所述區(qū)內(nèi)掃描所選擇的視野(3、5)的步驟；b)用一種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑在多個(gè)已知波長(zhǎng)處產(chǎn)生熒光發(fā)射，該發(fā)射是帶核細(xì)胞亞群的特征；和c)在所述的多個(gè)已知波長(zhǎng)處分析所述的發(fā)射以便鑒定視野中帶核細(xì)胞亞群的步驟。
21．一種鑒定包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含單個(gè)紅細(xì)胞(32)和／或單層(31)紅細(xì)胞和／或紅細(xì)胞聚集體(33)的(A、B)區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中的帶核細(xì)胞(34)的靶亞群的方法，且所述的區(qū)具有不大于約50微米的通過面厚度，所述的方法包括a)用一種光學(xué)掃描儀(54)在所述區(qū)內(nèi)掃描所選擇的視野(1、3、5)的步驟；b)用一種或多種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑在一個(gè)或多個(gè)已知波長(zhǎng)處產(chǎn)生熒光發(fā)射，該發(fā)射是所述帶核細(xì)胞的靶亞群的特征；和c)在所述的已知波長(zhǎng)處分析所述的發(fā)射以便鑒定并區(qū)分所述帶核細(xì)胞的靶亞群的步驟。
22．權(quán)利要求21的方法，其中所述的觀測(cè)室(14)基本上是楔形的且包括具有大于約40微米通過面厚度的附加(C)區(qū)。
23．一種鑒定包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含單個(gè)紅細(xì)胞(32)和／或單層(31)紅細(xì)胞的(A)區(qū)的觀測(cè)室(14)內(nèi)的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中的網(wǎng)織紅細(xì)胞的方法，且所述的區(qū)具有不大于約20微米的通過面厚度，所述的方法的特征在于a)用一種光學(xué)掃描儀(54)在所述區(qū)內(nèi)掃描所選擇的視野(1、3)的步驟；b)用一種或多種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑在一個(gè)或多個(gè)已知波長(zhǎng)處產(chǎn)生熒光發(fā)射，該發(fā)射是包含在所述網(wǎng)織紅細(xì)胞中帶核物質(zhì)的剩余物的特征；和c)在所述的已知波長(zhǎng)處分析所述的發(fā)射以便在樣品中的所述所選擇的視野內(nèi)鑒定所述網(wǎng)織紅細(xì)胞并將其與其它細(xì)胞區(qū)分開來的步驟。
24．一種用于在取樣室(14)中包含的抗凝全血樣品中進(jìn)行帶核血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的方法，所述方法的特征在于a)在所述取樣室中裝入至少一種熒光著色劑和抗凝全血的混合物的步驟，所述的著色劑可有效地以區(qū)分方式使全血中的不同帶核血細(xì)胞類型(34)變得突出；b)在會(huì)產(chǎn)生由所述著色劑以區(qū)分方式突出不同白細(xì)胞類型的合適光照條件下在所述室中對(duì)所分散的混合物進(jìn)行多視野X-Y-Z光學(xué)掃描的步驟；c)以光測(cè)和／或形態(tài)測(cè)量方式將至少一個(gè)帶核血細(xì)胞亞群分離成不同群體(40、41、42、43、44、45、46)以便將該帶核血細(xì)胞亞群與所說掃描步驟中檢測(cè)的其它帶核細(xì)胞區(qū)分開來的步驟；d)在所述帶核血細(xì)胞亞群群體中對(duì)帶核血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類的步驟；和e)在所述由所述分離步驟產(chǎn)生的所述群體中產(chǎn)生帶核血細(xì)胞亞群的細(xì)胞計(jì)數(shù)的步驟。
25．一種用于在與一種或多種可有效地以區(qū)分方式使血樣中網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)帶核物質(zhì)的剩余物變得突出的熒光著色劑混合的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法，所述的血樣和著色劑包含在觀測(cè)室(14)內(nèi)，所述的方法的特征在于a)用具有視野(7’、7、9、11)的光學(xué)儀器(54)掃描血樣的步驟；b)在所述靜態(tài)血樣中確定視野的步驟，該視野(1，3)包含單個(gè)紅細(xì)胞(32)或單層(31)紅細(xì)胞；c)用所選擇波長(zhǎng)的光照射靜態(tài)血樣中的所述確定的視野以便以區(qū)分方式使所述確定的視野內(nèi)紅細(xì)胞中帶核物質(zhì)的任何剩余物變得突出的步驟；和d)在所述視野中對(duì)任何以區(qū)分方式突出的紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的步驟。
26．一種鑒定包含在與熒光著色劑混合并分散在包括包含單個(gè)紅細(xì)胞(32)和／或單層(31)紅細(xì)胞和／或紅細(xì)胞聚集體(33)的(A)區(qū)的觀測(cè)室(14)中的基本上未稀釋的靜態(tài)抗凝全血樣品中的細(xì)胞或其它成形體靶亞群的方法，所述的方法的特征在于a)用一種光學(xué)掃描儀(54)在所述區(qū)內(nèi)掃描所選擇的視野的步驟；b)用一種或多種預(yù)選波長(zhǎng)的光源照射所述所選擇的視野的步驟，所述的預(yù)選波長(zhǎng)的光源可有效地使所述熒光著色劑在一個(gè)或多個(gè)已知波長(zhǎng)處產(chǎn)生熒光發(fā)射，這種發(fā)射可產(chǎn)生可有效地區(qū)分所述細(xì)胞和其它成形體的靶亞群的光測(cè)和形態(tài)測(cè)量信息；和c)分析所述的發(fā)射以便以光測(cè)方式和形態(tài)測(cè)量方式鑒定并區(qū)分所述的細(xì)胞和成形體靶亞群的步驟。
全文摘要
在因會(huì)聚相對(duì)的樣品室壁而具有可變的通過面厚度的樣品室(14)內(nèi)對(duì)存在于靜態(tài)抗凝全血樣品中的靶帶核細(xì)胞和含有剩余核糖體物質(zhì)的靶細(xì)胞進(jìn)行光學(xué)檢測(cè)、計(jì)數(shù)和分析。至少一個(gè)會(huì)聚壁(8)是透明的以便可以觀察到血樣。該室的可變厚度在室中形成了第一個(gè)厚度較小的區(qū)(A),其中樣品中各紅細(xì)胞(32)和紅細(xì)胞靜態(tài)單層(31)在將樣品導(dǎo)入并充滿該室后停留在該區(qū)。存在于樣品中的較大的成形組分諸如白細(xì)胞(34)和帶核紅細(xì)胞停留在該室中的厚度較大的區(qū)(B)內(nèi),而停留在這類厚度較大區(qū)中的不帶核的紅細(xì)胞團(tuán)聚成紅細(xì)胞錢串(33)。通過將熒光染料與血樣混合,借助于一種掃描儀(54)可以計(jì)數(shù)并區(qū)分樣品中的靶細(xì)胞,所述的掃描儀能夠測(cè)定發(fā)源自樣品中靶細(xì)胞的不同波長(zhǎng)的顏色信號(hào)并根據(jù)所發(fā)射的顏色信號(hào)的特性彼此區(qū)分靶細(xì)胞。
文檔編號(hào)G01N33/49GK1292874SQ99803774
公開日2001年4月25日 申請(qǐng)日期1999年2月22日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月7日
發(fā)明者斯蒂芬·C·沃德羅, 羅伯特·A·利費(fèi)恩, R·R·羅德里古茲 申請(qǐng)人:斯蒂芬·C·沃德羅, 沃德羅合伙有限公司, 羅伯特·A·利費(fèi)恩, 貝克頓·迪金森公司