專利名稱：診斷和識別胸痛早期發(fā)作的診斷盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的藥板形式的一步診斷試驗(yàn)法，用來作為一種精確、簡便、迅速和便攜的診斷方法，以判斷患者的胸痛是否源于心臟，并在患者胸痛的早期發(fā)作時區(qū)別出是易變性心絞痛還是心肌梗塞(“MI”)。特別是本藥板用酶免疫試驗(yàn)夾層干化學(xué)形式同時測定了心臟受損傷時或損傷后血清或血漿中出現(xiàn)的三種不同的物質(zhì)或標(biāo)示物的水平。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例中，這三個標(biāo)示物是肌酸激酶(CK)，肌紅蛋白和肌漿球蛋白輕鏈(MLC)。
心肌梗塞的緊急診斷取決于內(nèi)科長征的敏銳性和對患者癥狀的評估，例如胸痛或胸壓迫感，顯可能放射到下到臂部，上到頸部，疲勞，要死的感覺，呼吸短促，蒼白，皮膚冷濕，外周發(fā)紺或數(shù)絲狀脈。
大多數(shù)北美的胸痛患者在發(fā)作6小時內(nèi)報告給醫(yī)生或急診室。因此，在MI早期階段進(jìn)行有效的診斷試驗(yàn)是至關(guān)重要的。
有數(shù)種心臟檢查方法用于診察MI。這些檢查方法包括ECG，SGOT/AST，LDH，CK-MB免疫試驗(yàn)和NA乳液肌紅蛋白顆粒增強(qiáng)試驗(yàn)。然而還沒有用單一酶心臟檢查法能使急診室醫(yī)生確定胸痛是來自心臟或不是來自心臟的原因。而且只有在確證了是心肌梗塞后，才開始溶解血栓的治療。這種治療開始得越早，患者完全康復(fù)的可能性就越大或至少使心臟損傷只在最低程度。因此，內(nèi)科先生確定這種疼痛是心臟性的還是非心臟性的，是至關(guān)重要的。
心電圖(ECG)可用來診察MI。然而只有心臟受到嚴(yán)重?fù)p傷時心電圖才能診斷出。ECG的診斷特異性對開始階段的胸痛只有51%。因此，ECG不適宜用于MI的早期診察。
血清谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶/天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(SGOT/AST)在心肌中有高濃度，是占優(yōu)勢的酶。血清試驗(yàn)測定SGOT水平可用來診斷心肌梗塞。然而，SGOT只在胸痛發(fā)作后的大約8-10小時后才開始升高，在24-36小時內(nèi)達(dá)到峰值，5-7天后恢復(fù)正常。患者在胸痛早期和緊急處置時SGOT在診斷心肌梗塞上是沒有特殊幫助的。SGOT對心肌也不是特異的。已發(fā)現(xiàn)許多包含骨骼肌的組織，如肝和腎臟，由于肌肉注射，休克，肝臟病和肝充血時，SGOT被釋放，因此這在診察特異的心臟組織損害上價值不大。
乳酸脫氫酶(LDH)在許多組織中濃度很高，這些組織包括心臟，骨骼肌和肝臟，檢查血清中LDH的存在的試驗(yàn)被用來診斷心肌梗塞。在五種普通的同型中心臟主要含有LDH1和LDH2。胸痛發(fā)作24-36小時后LDH水平開始增高，48-72小時后達(dá)峰值，4-8天后回復(fù)正常。因此，患者在胸痛早期不能用LDH作為MI的指標(biāo)。此外對心臟損傷LDH不是特異的，在肺栓塞、溶血，肝充血，腎臟病和骨骼肌損傷時LDH會出現(xiàn)。這種特異性的缺乏降低了LDH作為診斷手段的應(yīng)用。
肌酸激酶(CK)是肌肉組織中的一種酶。CK催化肌酸和三磷酸腺苷(ATP)轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿峒∷岷投姿嵯佘?ADP)的反應(yīng)。CK的數(shù)個同功酶中的CK-MB在心臟組織中。CK-MB對診查心肌梗塞是個靈敏的標(biāo)示物，因?yàn)樗谛募〗M織受損傷時釋放出。故而CK-MB存在于受損傷患者的血清之中，

圖1說明了患者血清中CK濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)Lee T.H.等(1986)Ann.Intern.Med.105，221-233)。
CK-MB免疫試驗(yàn)是診斷心肌梗塞的標(biāo)準(zhǔn)檢查法。美國專利No.4900662公布了CK-MB的應(yīng)用方法，題目是“CK-MM心肌梗塞免疫試驗(yàn)”。
Shah在USP4900662中公布了在患者心肌梗塞后測定血清中初始增高的CK-MM-a(CK-MM的異型)濃度和同時測定CK-MM-a和CK-MM-b的方法。用這個方法可提供一種對梗塞的時間的精確估計(jì)。該方法包括測定血清中CK-MM-a和CK-MM-b的總濃度和CK-MM-a的濃度，以確定心肌梗塞急性期的時間。公布的試劑包括有CK-MM-a的多克隆抗體和單克隆抗體，這類抗體并不明顯地與CK-MB，CK-MM-b或CK-MM-c結(jié)合，有抗CK-MM-b抗體，它不會明顯地與CK-MB，CK-MM-a或CK-MM-c結(jié)合，有抗CK-MM-a+b抗體，它可與CK-MM-a和CK-MM-b結(jié)合，但不能明顯地與CK-MB或CK-MM-c結(jié)合，還包括這些抗體的標(biāo)記的衍生物，固著這些抗體的不溶性的支持物，以及含有一種或多種這些試劑的藥盒。酶標(biāo)記的和放射性標(biāo)記的CK試劑特別有用。
單獨(dú)使用CK-MB作為診斷標(biāo)示物是有些困難的。首先，心肌梗塞發(fā)作后只有在6-8小時后CK-MB的血清濃度才增高，而且12小時后才達(dá)峰，造成早期緊急診斷和治療的困難。
第二，CK-MB試驗(yàn)必須在實(shí)驗(yàn)室中由訓(xùn)練有素的技術(shù)員進(jìn)行。在非城區(qū)不易進(jìn)行這樣的試驗(yàn)，結(jié)果也不能迅速得的解析，致使延誤了診斷，因此，就患者等候診斷的住院費(fèi)而言，增加了保證機(jī)構(gòu)的負(fù)擔(dān)。
第三，CK-MB處于正常骨骼肌組織中，因此，使該試驗(yàn)結(jié)果對心臟不夠特異，診斷不夠肯定。
肌紅蛋白是位于骨骼肌或心肌細(xì)胞膜的鄰近的另一種蛋白質(zhì)。細(xì)胞膜的通透性一旦變得異常，例如心臟缺血時的一個可逆狀態(tài)，肌紅蛋白立即被細(xì)胞排出。在胸痛發(fā)作1.5小時內(nèi)，在血清中即可檢查出肌紅蛋白。醫(yī)學(xué)研究團(tuán)體認(rèn)為，心肌壞死釋放肌紅蛋白，因此它是心肌損傷的一個有用的早期標(biāo)示物。圖2說明了血清中肌紅蛋白濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)Grenadier E.等(1981)Am.Heart J.105，408-416;Seguin J.等(1988)J.Thorac Car-diovasc Surg.95，294-297)。
胸痛發(fā)作后2-3小時內(nèi)若未檢查出血清肌紅蛋白水平增高，則在確定疼痛原因時可排除急性心肌梗塞。
“NA乳液肌紅蛋白顆粒增強(qiáng)測定”是檢查肌紅蛋白的市場有售的藥盒。這種檢查試驗(yàn)是基于人體體液中存在的抗原與共價鏈偶聯(lián)于聚苯乙烯顆粒上的抗肌紅蛋白抗體間的反應(yīng)。把樣品、N肌紅蛋白試劑、一種除掉非特異性反應(yīng)的溶液和N反應(yīng)緩沖液自動地移液到比包池內(nèi)，溫孵12分鐘后用濁度法測定光散射，同標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算肌紅蛋白的濃度。
放射免疫試驗(yàn)也可測定肌紅蛋白，但還有一種無酶聯(lián)結(jié)的免疫吸附劑檢驗(yàn)(ELISA)裝置也能采用。
單用肌紅蛋白指標(biāo)診斷心肌梗塞具有困難性。肌紅蛋白不能指出心肌操作的特殊類型，例如心肌梗塞，在像休克、腎臟病，橫紋肌溶解和肌病等各樣不同的情況下，也可有肌紅蛋白存在。此外，血清和血漿中肌紅蛋白的濃度通常隨年令與性別而變，健康的正常人濃度變化范圍很寬，血清濃度高達(dá)90ug/l時通常認(rèn)為是健康人群的高限。因此，對此人可能是正常水平的濃度，對其它人就可能是嚴(yán)重問題的指征，做診斷時要比預(yù)料的準(zhǔn)確度略差。
肌漿球蛋白輕鏈(MLC)是肌漿球蛋白肌原纖維的整體部分，但其功能尚不清楚，MLC存在于快、慢、心房和心室肌肉之中，已知MLC對心臟缺血非常敏感。心肌壞死后血清中迅速出現(xiàn)MLC，提高的濃度可維持長達(dá)10天，圖3說明了患者血清中MLC濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)Wang J.等(1989)Clin.Chimica Acta 181，325-336;Jackowski G.，Symmes J.等(1989)Circulation Suppl 11，80，355)。
MLC確定溶血栓治療是否成功也有預(yù)后的價值。MLC的濃度越高，預(yù)后越差，也表明梗塞越嚴(yán)重。在數(shù)天內(nèi)濃度下降表示患者趨于康復(fù)，而高高低低或平臺樣曲線表明有梗塞趨勢需做手術(shù)。
MLC主要有兩種，稱作MLC1和MLC2，存在于心肌細(xì)胞胞漿的可溶性庫中，也可完整的存在于肌漿球蛋白肌原纖維中，心室肌細(xì)胞中的MLC2，或許還有MLC1與慢骨骼肌細(xì)胞中的同型是一樣的。心臟疼痛患者的MLC1水平提高80-85%。MLC1對易變性心絞痛和冠心病是非常靈敏的指征。
其它類的心臟標(biāo)示物，如低分子量的心肌蛋白(LMWCP)可作為心臟的標(biāo)示物。這類標(biāo)示物的實(shí)例包括收縮器官的成分，即肌鈣蛋白，肌鈣蛋白-T，肌鈣蛋白-I和肌鈣蛋白C，線粒體酶，如三糖P異構(gòu)酶，易自心臟釋放出的低分子量多肽，以及局部缺血發(fā)作后早期就釋放的肌纖維膜蛋白或蛋白片數(shù)，特別是分子量為15kd的肌纖維膜蛋白和100kd的復(fù)合糖蛋白對心臟是特異的。
該心臟肌鈣蛋白-I同型可抑制心肌收縮間靜止期的肌纖蛋白和肌漿球蛋白分子間的相互作用。在MI后4-6小時內(nèi)患者血清內(nèi)出現(xiàn)肌鈣蛋白I，并且這種增高的水平持續(xù)7-8天。圖4說明了肌鈣蛋白-I濃度與時間的關(guān)系。(文獻(xiàn)Cummins B.，Auckland M.L.和Cummins P.(1987)Am.Heart J.113，1333-1344)。肌鈣蛋白-I對心臟是特異的標(biāo)示物，在診查是心肌損傷還是骨骼肌損傷時，比其它標(biāo)示物更靈敏。
肌鈣蛋白-T是薄絲狀的肌鈣蛋白-原肌球蛋白的復(fù)合物的構(gòu)成成份，聯(lián)結(jié)原肌球蛋白骨架和肌鈣蛋白-I肌鈣蛋白C復(fù)合物，肌鈣蛋白-T是個堿性蛋白質(zhì)，在心臟和快、慢骨骼肌中具有同型。MI發(fā)作后3小時內(nèi)血清中即出現(xiàn)并且增高的水平至少持續(xù)10天。圖5說明了肌鈣蛋白-T的濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)Katus H.A.等(1989)J.Mol.Cell Cardiol.21，1349-1453)。肌鈣蛋白-T的釋放按雙相的樣式，對心臟是特異的，并且對MI非常靈敏。
肌漿球蛋白重鏈(MHC)和原肌球蛋白是分子量較大的蛋白質(zhì)，也可作為心臟的標(biāo)示物。MHC是肌肉主要收縮蛋白的構(gòu)成部分。在心肌細(xì)胞壞死和隨后的膜的不可逆損傷后，MHC的片斷就會由心室中釋放到血清中。雖然在心肌細(xì)胞壞死后，MHC片斷不會迅速出現(xiàn)于血清中，但在MI后MHC增高的濃度至少持續(xù)10天，并且在MI后第4天可觀測到MHC的峰值。圖6說明了MHC濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)Leger J.O.C.等(1985)Eur.J.of Clin.Invet.15，422-429;Sequin J.R.等(1989)J.Thorac.Cardiovase Surga，397-401)。MHC釋放曲線下面積與心肌細(xì)胞損傷程度有非常好的相關(guān)性。然而在MI的急性期MHC水平對臨床價值不大。
原肌球蛋白是由兩個多肽形成的二聚體，是肌肉收縮的調(diào)節(jié)系統(tǒng)的構(gòu)成部分。在心肌梗塞發(fā)作后大約7-8小時，可檢測出血清中的原肌球蛋白。如同CK-MB一樣，它對心肌梗塞非常敏感。圖7說明了MLC濃度與時間的關(guān)系(文獻(xiàn)CumminsP.等(1981)Clin.Sci.60，251-259)然而，骨骼肌損傷時，原肌球蛋白的濃度也會增高，因此它不是心臟特異性的。
現(xiàn)用的心肌梗塞的標(biāo)準(zhǔn)診斷方法都有局限性。在胸痛發(fā)作后，沒有一種方法能立即提供非常靈敏、特異迅速和簡便的診斷檢查，例如在急救車或醫(yī)生辦公室中。
本發(fā)明是在胸痛發(fā)作的早期測定患者血液或血清中因心臟損傷存在的至少三種不同的標(biāo)示物，并將它們綜合在一起，以提供一種心肌梗塞診斷的改良方法，用于易變性心絞痛或MI的早期診斷。
以前的診斷方法的缺陷可用一種準(zhǔn)確、快速和便攜的一步式診斷板加以克服，以用于急診處置中檢測心臟受損傷的患者血清中存在的至少三種標(biāo)示物。試驗(yàn)結(jié)果將確定患者是患了易變性心絞痛還是心肌梗塞。MI的早期診斷仍能在早期開始進(jìn)行溶血栓治療。因而心臟損傷會降到最低水平，從而增加了患者的生存機(jī)會。即使在疼痛發(fā)作數(shù)天之后，本診斷板的試驗(yàn)結(jié)果也可以區(qū)分易變性心絞痛和心肌梗塞。該診斷板是利用酶免疫試驗(yàn)夾層干化學(xué)型板。用這種板進(jìn)行系列的短暫的測定，可為內(nèi)科醫(yī)生提供關(guān)于心臟損傷的程度和溶血栓處置的預(yù)后的信息。本發(fā)明的優(yōu)越實(shí)施例中，這三個標(biāo)示物是肌酸激酶(CK)，肌紅蛋白和肌原纖維輕鏈(MLC)。
本發(fā)明的一個內(nèi)容是提供了一種診斷用試驗(yàn)盒，用以在患者胸痛的早期發(fā)作時檢查出心肌梗塞。該試驗(yàn)盒包括一個可容納和保留患者血液或血清樣品的貯存部和一個與血樣進(jìn)行反應(yīng)的檢測裝置。該檢測裝置的組成是，至少有三種懸浮于載體上的單克隆或多克隆抗體，每一種抗體與早期心肌梗塞時自心肌釋放的不同的蛋白質(zhì)相互補(bǔ)，以及獨(dú)立地與應(yīng)答互補(bǔ)的蛋白進(jìn)行反應(yīng)的各個抗體的相應(yīng)的試劑。與試劑反應(yīng)的效果的綜合，應(yīng)提示診斷時患者心臟的狀況。
本發(fā)明的實(shí)施例用圖加以說明。
圖1是血清中CK濃度與時間的關(guān)系作圖;
圖2是血清中肌紅蛋白濃度與時間的作圖;
圖3是血清中MLC濃度與時間的作圖;
圖4是血清中肌鈣蛋白-I濃度與時間的作圖;
圖5是血清中肌鈣蛋白-T濃度與時間的作圖;
圖6是血清中MHC濃度與時間的作圖;
圖7是血清中原肌球蛋白濃度與時間的作圖;
圖8是優(yōu)選的實(shí)施例的平面觀;
圖9是圖8實(shí)例的分解透視圖;
圖10是圖18的實(shí)例中膜的偏斜圖;
圖11是膜的第二個實(shí)例的偏斜圖。
本發(fā)總的用圖8加以說明。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例是一塊如1所示的板。
所用板的樣式是已知的，可以買到，該板的形狀與現(xiàn)用的綜合妊娠試驗(yàn)板相似，可以買到，商品名為BIOSIGN。
板是由聚丙烯片構(gòu)成，分前板10和后板12。前板10有一顯示窗口14，每一個心臟標(biāo)示物對應(yīng)一個口，還有一個樣品口16，如圖9所示。在前板10下面有一塊暴露的干化學(xué)膜18，后者用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕ尺B在前板10的背面。后板12有個繞其一周的邊20，以與前板10嚴(yán)格扣合。這樣，把膜18封在前后板之間。
前板和后板的扣合如所述的那樣，但還有許多其它的適宜的聯(lián)結(jié)方法，對熟悉此類技藝的人來說這是明顯的。
前板10也能提供一塊區(qū)域13，上面可寫上患者的姓名和身份，也可用來書寫測定結(jié)果。
關(guān)于圖10，膜18是單克隆和多克隆抗體的載體。在優(yōu)選的實(shí)例中，將血液或血清按箭頭方向由一端流向另一端。端點(diǎn)22與樣品窗口16對在一起。固定不動的抗體24層壓在或連到抗體一酶結(jié)合物26上，后者針對抗原的不同的表位，而不會被抗體24識別。抗體24與肌漿球蛋白互補(bǔ)。同樣，抗體28層壓在相應(yīng)的試劑30上?？贵w28互補(bǔ)于CK-MB。同樣，抗體32層壓在試劑34上?？贵w32與肌漿球蛋白輕鏈互補(bǔ)。抗體36與正常血液或血清中存在的任何蛋白互補(bǔ)。抗體36層壓在試劑38上。
單克隆和多克隆抗體可用常規(guī)方法，由制備多克隆抗體的哺乳動物中制取。
在優(yōu)選實(shí)例中用標(biāo)記的試劑，該抗體試劑標(biāo)記到或用化學(xué)方法鍵合于可被觀測或測定的特定的部位，以便對血清或血液中存在的抗體或干化學(xué)膜上抗體的存在加以驗(yàn)證或定量?？梢耘c本發(fā)明的用作診斷工具的抗體相結(jié)合的配基和基團(tuán)，包括有元素、化合物或生物物質(zhì)，它們所具有的物理或化學(xué)特性可用來區(qū)別與它們鏈合的抗體與其它的抗體。
每個心臟標(biāo)示物至少需要兩種類型為單/多或兔/多，山羊/多的抗體。這些抗體對它們的心臟免疫原進(jìn)行親合性純化，再用交叉吸附法對非相關(guān)種屬的免疫原進(jìn)一步純化，以除去非特異性免疫球蛋白。
使用時診斷師例如內(nèi)科醫(yī)生、急救車護(hù)理或護(hù)士將三滴或低于100ul的患者血清或血液加到樣品窗口16中。樣品會由于毛細(xì)作用沿膜18移動并相繼與抗體和試劑對(24和26，28和30，32和34以及36和38)相接觸。
若血樣中有特異的心臟標(biāo)示物，則與固定在膜上的抗體相結(jié)合。相應(yīng)的試劑也會與之反應(yīng)并可由試劑顏色的改變而看出。這種顏色的變化與血樣中標(biāo)示物的濃度成比例。這樣，若在一定時間間隔用此試驗(yàn)盒檢查，可以確定標(biāo)示物的濃度增高或降低，作為診斷工具。在3-5分鐘內(nèi)就能完成檢查結(jié)果。
在優(yōu)選的實(shí)例中，測定的樣品中的各個心臟標(biāo)示物均會出現(xiàn)一個藍(lán)色色帶。色帶的深淺強(qiáng)度可用反射計(jì)定量，顏色的強(qiáng)度與特定的標(biāo)示物的濃度相關(guān)。反射計(jì)可包括有微處理機(jī)，在板上被檢測的每個心臟標(biāo)示物的定量結(jié)果以濃度大小和患者的姓名或身份一起打印出來。
用三滴或低于100ul的血清或血漿測定時，標(biāo)示物的濃度為0.5ng/ml-25ng/ml最為敏感，每次測定和數(shù)次測定之間的精確度，變異系數(shù)低于15%。
在測定中所用的心臟標(biāo)示物將取決于那些標(biāo)示物的性質(zhì)。優(yōu)選實(shí)例用的板有肌紅蛋白、MLC和CK-MB，如圖8所示。
肌紅蛋白從心肌細(xì)胞中釋放非常早，它不是心臟所特異的，對心肌梗塞和壞死有非常高的靈敏性，在無壞死情況下的缺氧損傷是不會釋放出的。MLC是心臟特異性的，用以區(qū)別心臟性的和非心臟性的疼痛，它的釋放也快但不像肌紅蛋白那樣快。CK-MB可將心絞痛和心肌梗塞區(qū)分開，但只有在胸痛發(fā)作6小時后才能檢測出，因此不能單獨(dú)用于急診診斷。
如果所用的心臟的三個標(biāo)示物是CK-MB，肌紅蛋白和MLC，參考圖1，2，和3，其結(jié)果對診斷可用如下的解析。
若診斷板顯示陽性的MLC和陰性的肌紅蛋白和CK-MB，則提示患者的胸痛是心臟性的，原因是易變性心絞痛。
若肌紅蛋白和MLC是陽性結(jié)果，CK-MB是陰性的，提示為早期心肌梗塞，可開始干預(yù)治療。
若三種都是陽性結(jié)果，提示為心肌梗塞。
若MLC和CK-MB是陽性，肌紅蛋白為陰性，則提示為心肌梗塞。
若肌紅蛋白和CK-MB為陽性而MLC為陰性，則患者可能有骨骼肌損傷(假陽性)或是心肌梗塞中期。
在這種情況下該試驗(yàn)不能區(qū)分假陽性和“小”的心肌梗塞，因?yàn)镸LC釋放曲線在數(shù)個間隔中稍許下沉，病人可能有輕度心內(nèi)膜下梗塞，并且在“下沉”時刻測定。當(dāng)梗塞很小時，這種“下沉”幾乎達(dá)到正常水平，因而測定的患者M(jìn)LC為陰性。陽性診斷要依賴于CK-MB的存在。
心肌梗塞大的患者，MLC的“下沉”并不大到與正常水平一樣，因此MLC仍可檢測出。
其它實(shí)例的試驗(yàn)板是用同樣的格式，抗體有不同的組合，這樣來評估心臟的不同的標(biāo)出物。
為了保證在患者胸痛的早期能用這種試驗(yàn)板檢測出心肌組織的損傷，必須用至少一種相應(yīng)于在心臟損傷的初期有大量的存在的標(biāo)示物的抗體，即例如CK，肌漿球蛋白輕鏈或肌球蛋白。具有CK、肌漿球蛋白輕鏈或肌球蛋白特征和性質(zhì)的低分子量心臟蛋白也可用在藥盒中，適宜的蛋白和酶可選自肌鈣蛋白，肌鈣蛋白-I，肌鈣蛋白C，肌鈣蛋白-T和肌纖維膜蛋白，三糖磷酸異構(gòu)酶或者具有肌酸激酶、肌漿蛋白輕鏈或肌球蛋白特性和性質(zhì)的各種重分子量心臟蛋白。
其它蛋白質(zhì)例如原肌球蛋白和肌漿球蛋白重鏈也可加到診斷盒中。如果患者前來求診是在胸痛發(fā)作許多小時后而且患者的MI處于較晚階段，則該試驗(yàn)盒可檢測MI。
第二個實(shí)例是膜18上可有一層被捕獲的抗體124及相應(yīng)的試劑126。同樣為了檢測其它各個標(biāo)示物，要有成對的相應(yīng)的抗體和試劑，即128和130，132和134以及對照組對136和138。使用時，把血樣滴到每對試藥上，用上述相同的方式讀出結(jié)果。
干化學(xué)膜118可用吸收性物質(zhì)120支持。吸收性物質(zhì)120可增加血清向膜內(nèi)的透入力。
另一個試驗(yàn)盒的實(shí)例是用血樣品管，這種管通常用來從患者身上抽取血樣，管的內(nèi)壁作為單克隆和多克隆抗體及試劑的載體。從患者身上抽取血樣后，使用者只要振搖樣品管，抗體就會與血液反應(yīng)。如果血液中存在心臟蛋白，就會發(fā)生如前所述的顏色變化。
本發(fā)明書雖然對優(yōu)選實(shí)例作了闡述和說明，但不要認(rèn)為本發(fā)明只局限于這些持定的實(shí)例。對本技術(shù)熟悉的會作許多變換和改進(jìn)。本發(fā)明的界定可參見權(quán)利要求。
權(quán)利要求
1.在患者胸痛發(fā)作早期診察心肌梗塞的一種診斷試驗(yàn)盒，它包括有一個可容納和保留患者血液或血清樣品的貯存部和一個與血樣進(jìn)行反應(yīng)的檢測裝置。該檢測裝置的組成是，至少有三種懸浮于載體上的單克隆或多克隆抗體，每一種抗體與心肌梗塞早期自心肌釋放的各種蛋白之一相互補(bǔ)，以及獨(dú)自地應(yīng)與互補(bǔ)的蛋白進(jìn)行反應(yīng)的各個抗體的相應(yīng)的試劑，并把試劑反應(yīng)的結(jié)果綜合起來以提示作診斷時患者的心臟狀況。
2.按照權(quán)利要求1的一種診斷試驗(yàn)盒，其特征是，該單克隆和多克隆抗體與下列蛋白質(zhì)或酶的至少三種相互補(bǔ)肌酸激酶，肌紅蛋白，肌漿蛋白輕鏈，肌鈣蛋白，肌鈣蛋白-Ⅰ，肌鈣蛋白C，肌鈣蛋白-T和肌纖維膜蛋白，三糖磷酸異構(gòu)酶或者具有肌酸激酶、肌紅蛋白或肌漿球蛋白輕鏈、特征和性質(zhì)的各種低分子量心臟蛋白，肌球蛋白或者具有肌酸激酶、肌紅蛋白或肌漿球?qū)影纵p鏈特征和性質(zhì)的各種高分子量心臟蛋白，其中至少有兩種要選自肌酸激酶、肌紅蛋白、肌漿球蛋白輕鏈和肌鈣蛋白-T。
3.按照權(quán)利要求2的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該單克隆和多克隆抗體是一種固定不動的抗體，層壓在其相應(yīng)的試劑上，該試劑是抗體-酶結(jié)合物，針對不同的表位而不會被抗體識別。
4.按照權(quán)利要求3的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，當(dāng)每一種抗體與其相應(yīng)的蛋白反應(yīng)時的應(yīng)答，是該試劑改變顏色。
5.按照權(quán)利要求4的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該顏色的改變與樣品中互補(bǔ)的蛋白質(zhì)濃度成比例。
6.按照權(quán)利要求5的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該接受器是有一個用來接受樣品的樣品窗口和一個用來展現(xiàn)試劑的展示窗口的前板，一個后板和封閉裝置，用以確保前板和后板把載體封在當(dāng)中，從而形成整體。
7.按照權(quán)利要求6的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該載體是個干化學(xué)膜。
8.按照權(quán)利要求7的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，所說的膜是被吸收性物質(zhì)所支持，以增強(qiáng)樣品向檢驗(yàn)部位的滲入。
9.按照權(quán)利要求8的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該膜延伸到加樣窗口和顯示窗口處，抗體及其相應(yīng)的試劑在空間上的關(guān)系是從加樣窗口進(jìn)到顯示窗口。
10.按照權(quán)利要求9的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該前板用來顯示鑒定蛋白抗體反應(yīng)的定位。
11.按照權(quán)利要求10的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，前板還連接一反射計(jì)，以定量樣品中蛋白的濃度。
12.按照權(quán)利要求11的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該檢測手段包括一個對照抗體，它與血清中正常存在的蛋白質(zhì)相互補(bǔ)，和一個相應(yīng)的試劑，該試劑對于相互補(bǔ)的蛋白進(jìn)行反應(yīng)的對照抗體可作出應(yīng)答，這樣的應(yīng)答結(jié)果提示該試驗(yàn)是有效的。
13.按照權(quán)利要求12的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該對照抗體和相應(yīng)的蛋白在載體上的位置要遠(yuǎn)離加樣窗口以指示該試驗(yàn)真實(shí)地完成了。
14.按照權(quán)利要求5的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，該接受器是一種封閉式的清潔的容器，該載體是容器的邊。
15.按照權(quán)利要求13或14的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，單克隆和多克隆抗體與肌酸激酶和肌紅蛋白互補(bǔ)。
16.抗照權(quán)利要求15的一種診斷用試驗(yàn)盒，其特征是，這些抗體與肌酸激酶，肌紅蛋白和肌鈣蛋白-T互補(bǔ)。
17.按照權(quán)利要求15和一種診斷用試驗(yàn)，其特征是，這些抗體與肌酸激酶、肌紅蛋白和肌鈣蛋白-T互補(bǔ)。
18.按照權(quán)利要求15和一種診斷用試驗(yàn)，其特征是，在用少于100nl樣品時，該試驗(yàn)對標(biāo)示物濃度為0.5ng/ml-25ng/ml是靈敏的。每次測定和數(shù)次測定的準(zhǔn)確度，變異系數(shù)低于15%。
全文摘要
本發(fā)明公布的診斷用診驗(yàn)盒是為了評價在患者胸痛發(fā)作初期究竟胸痛是否源于心臟，以及將變異性心絞痛和心臟梗塞區(qū)別開。該試驗(yàn)盒是由一個為接受和保留患者血液和血清樣品的接受器和懸浮于載體上的至少三個單克隆和多克隆抗體。每個抗體與一不同的蛋白相互補(bǔ)，該蛋白是在心肌梗塞早期從心肌中釋放的，每個抗體有相應(yīng)的試劑，后者對每個抗體與相應(yīng)蛋白反應(yīng)時作出獨(dú)立的應(yīng)答。對試劑作出應(yīng)答的綜合揭示了患者診斷時的狀況。
文檔編號G01N33/566GK1060533SQ9110963
公開日1992年4月22日 申請日期1991年10月11日 優(yōu)先權(quán)日1990年10月12日
發(fā)明者喬治·杰克夫斯基 申請人:喬治·杰克夫斯基