本發(fā)明涉及分析檢測(cè)，尤其涉及一種雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、雷芬那辛(revefenacin)的化學(xué)名為：n-({1,1’-聯(lián)苯基}-2-基)氨基甲酸-1-(2-{4-[(4-氨基甲酰哌啶-1-基)甲基]-n-甲基苯甲酰氨基}乙基)哌啶-4-基-1-酯，其化學(xué)式如式(i)所示：

2、

3、雷芬那辛是一種長(zhǎng)效毒蕈堿拮抗劑，通常被稱為抗膽堿能藥，它通過(guò)與支氣管平滑肌上的m3毒蕈堿受體結(jié)合，抑制副交感神經(jīng)末端釋放乙酰膽堿所造成的氣管收縮，臨床主要用于慢性阻塞性肺病的維持治療，包括慢性支氣管炎、肺氣腫伴隨呼吸困難的維持治療及急性發(fā)作的預(yù)防，吸入用雷芬那辛溶液經(jīng)美國(guó)fda批準(zhǔn)上市，商品名為yupelri。

4、目前，雷芬那辛的合成路線較長(zhǎng)，容易引入多個(gè)雜質(zhì)，為了監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，需要對(duì)其雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，而目前針對(duì)雷芬那辛雜質(zhì)的檢測(cè)方法較少，檢出的雜質(zhì)也較少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于背景技術(shù)存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出了一種雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，本發(fā)明所述色譜條件可以使得雷芬那辛主峰與各雜質(zhì)之間實(shí)現(xiàn)有效分離，并且專屬性好，靈敏度高。

2、本發(fā)明提出了一種雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，包括如下步驟：采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相a為磷酸鹽緩沖水溶液，流動(dòng)相b為甲醇，進(jìn)行梯度洗脫；

3、梯度洗脫的程序?yàn)椋?-10min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由88-92％漸變?yōu)?3-77％；10-43min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由73-77％漸變?yōu)?8-42％；43-45min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由38-42％漸變?yōu)?8-92％；45-50min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)保持88-92％。

4、優(yōu)選地，梯度洗脫的程序?yàn)椋?-10min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由90％漸變?yōu)?5％；10-43min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由75％漸變?yōu)?0％；43-45min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由40％漸變?yōu)?0％；45-50min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)保持90％。

5、優(yōu)選地，流動(dòng)相a為磷酸二氫鈉緩沖水溶液。

6、優(yōu)選地，磷酸二氫鈉的濃度為2.3-2.5g/l，更優(yōu)選磷酸二氫鈉的濃度為2.4g/l。

7、優(yōu)選地，磷酸二氫鈉緩沖水溶液的ph＝2.3-2.7，更優(yōu)選磷酸二氫鈉緩沖水溶液的ph＝2.5。

8、可以用磷酸調(diào)節(jié)磷酸二氫鈉緩沖水溶液的ph。

9、優(yōu)選地，色譜柱的規(guī)格為250×4.6mm，5μm。

10、優(yōu)選地，色譜柱的型號(hào)為syncronis?c18。

11、優(yōu)選地，色譜柱溫度為35-45℃，更優(yōu)選色譜柱溫度為40℃。

12、優(yōu)選地，檢測(cè)波長(zhǎng)為233-237nm，更優(yōu)選檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。

13、優(yōu)選地，流速為0.8-1.2ml/min，更優(yōu)選流速為1.0ml/min。

14、優(yōu)選地，采用主成分自身對(duì)照法根據(jù)色譜峰面積計(jì)算雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的含量。

15、主成分自身對(duì)照法為本領(lǐng)域常規(guī)方法，其步驟一般為：分別配制空白溶液、供試品溶液、對(duì)照溶液，采用上述色譜條件，依次進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖并根據(jù)色譜峰面積，按照主成分自身對(duì)照法計(jì)算雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的含量。

16、上述進(jìn)樣體積可以為25μl。

17、上述空白溶液為：流動(dòng)相a和流動(dòng)相b按照體積比90:10混合制得。

18、上述供試品溶液為：取吸入用雷芬那辛溶液制劑即為供試品溶液或者取雷芬那辛原料藥用空白溶液配制成0.06mg/ml的溶液即為供試品溶液。

19、上述對(duì)照溶液為：精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度，搖勻。

20、優(yōu)選地，雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)包括：雜質(zhì)rf-ac、雜質(zhì)rf-al、雜質(zhì)rf-sm4-2abp、雜質(zhì)rf-bpa、雜質(zhì)rf-ipba、雜質(zhì)rf-cz20、雜質(zhì)rf-cz25、雜質(zhì)rf-cz6中的至少一種，各雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下所示：

21、雜質(zhì)rf-ac：

22、雜質(zhì)rf-al：

23、雜質(zhì)rf-sm4-2abp：

24、雜質(zhì)rf-bpa：

25、雜質(zhì)rf-ipba：

26、雜質(zhì)rf-cz20：

27、雜質(zhì)rf-cz25：

28、雜質(zhì)rf-cz6：

29、本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)單獨(dú)檢測(cè)其中的一個(gè)雜質(zhì)，也可以同時(shí)檢測(cè)上述8個(gè)雜質(zhì)。

30、本發(fā)明針對(duì)雷芬那辛的8個(gè)雜質(zhì)篩選色譜條件，最終篩選出本發(fā)明所述色譜條件，可以使得雷芬那辛主峰與各雜質(zhì)之間實(shí)現(xiàn)有效分離，分離度均大于1.5，并且本發(fā)明專屬性好，靈敏度高，可以為雷芬那辛的質(zhì)量監(jiān)控提供簡(jiǎn)易、可靠的檢測(cè)方法。

技術(shù)特征：

1.一種雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相a為磷酸鹽緩沖水溶液，流動(dòng)相b為甲醇，進(jìn)行梯度洗脫；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，梯度洗脫的程序?yàn)椋?-10min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由90％漸變?yōu)?5％；10-43min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由75％漸變?yōu)?0％；43-45min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)由40％漸變?yōu)?0％；45-50min內(nèi)，流動(dòng)相a的體積分?jǐn)?shù)保持90％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，流動(dòng)相a為磷酸二氫鈉緩沖水溶液；優(yōu)選地，磷酸二氫鈉的濃度為2.3-2.5g/l；優(yōu)選地，磷酸二氫鈉緩沖水溶液的ph＝2.3-2.7。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，色譜柱的規(guī)格為250×4.6mm，5μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，色譜柱的型號(hào)為syncronis?c18。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，色譜柱溫度為35-45℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，檢測(cè)波長(zhǎng)為233-237nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，流速為0.8-1.2ml/min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，采用主成分自身對(duì)照法根據(jù)色譜峰面積計(jì)算雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的含量。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，其特征在于，雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)包括：雜質(zhì)rf-ac、雜質(zhì)rf-al、雜質(zhì)rf-sm4-2abp、雜質(zhì)rf-bpa、雜質(zhì)rf-ipba、雜質(zhì)rf-cz20、雜質(zhì)rf-cz25、雜質(zhì)rf-cz6中的至少一種，各雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式如下所示：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種雷芬那辛有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法，包括如下步驟：采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為：固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相A為磷酸鹽緩沖水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，進(jìn)行梯度洗脫；梯度洗脫的程序?yàn)椋??10min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)由88?92％漸變?yōu)?3?77％；10?43min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)由73?77％漸變?yōu)?8?42％；43?45min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)由38?42％漸變?yōu)?8?92％；45?50min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)保持88?92％。本發(fā)明所述色譜條件可以使得雷芬那辛主峰與各雜質(zhì)之間實(shí)現(xiàn)有效分離，并且專屬性好，靈敏度高。

技術(shù)研發(fā)人員：解啟慧,魯玉婷,施亞琴
受保護(hù)的技術(shù)使用者：平光制藥股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26