本技術(shù)屬于植物育種，具體涉及一種用于濱海鹽堿地的蘆筍全生育期耐鹽性鑒定方法。

背景技術(shù)：

1、土壤鹽漬化是制約植物生長的主要脅迫因素之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界各類鹽堿土面積約8億公頃，占世界土地總面積的6％，在中國1億公頃土地受鹽害影響，充分開發(fā)利用鹽堿地是當(dāng)前農(nóng)業(yè)研究的重要方向。篩選和培育耐鹽作物及作物的耐鹽品種是充分利用鹽堿地最直接有效的途徑之一。蘆筍(asparagus?officinalis?l.)具有較強(qiáng)的耐鹽堿能力，在土壤含鹽量0.3％以下的中輕度鹽堿地上可以正常生長，但在土壤含鹽量0.4％以上的鹽堿地上生長受到抑制，并且不同品種間耐鹽性存在較大差異。因此，開展蘆筍種質(zhì)資源的耐鹽性鑒定和耐鹽種質(zhì)的篩選，對(duì)蘆筍耐鹽品種選育、耐鹽機(jī)制研究及促進(jìn)鹽堿地蘆筍栽培具有重要的意義。

2、近年來，國內(nèi)外學(xué)者在植物的耐鹽性鑒定方面開展了大量工作，對(duì)小麥、大豆、高粱、棉花等多作物種質(zhì)資源進(jìn)行了耐鹽性評(píng)價(jià)和鑒定指標(biāo)的篩選，并取得了一定的成果，然而蘆筍關(guān)于耐鹽性的研究還處于初始階段，在耐鹽性種質(zhì)鑒定評(píng)價(jià)的深度和廣度方面比較落后，并且目前大多作物耐鹽性評(píng)價(jià)是基于芽期或苗期的鑒定，雖然芽期和苗期的鑒定結(jié)果可以作為蘆筍耐鹽性強(qiáng)弱的參考指標(biāo)，但是作物不同發(fā)育階段耐鹽性存在差異，如果將篩選出的耐鹽品種應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，還必須在更接近于大田生產(chǎn)實(shí)際的田間進(jìn)行全生育期的耐鹽性鑒定。若將發(fā)芽期、幼苗期和田間生長期的鑒定結(jié)合起來，進(jìn)行全生育期耐鹽性篩選，結(jié)果會(huì)更可靠。

3、公告號(hào)為cn104472059b的中國專利一種蘆筍耐鹽性的鑒定方法，利用特定濃度的人工配制海水對(duì)蘆筍進(jìn)行芽期和苗期脅迫處理，調(diào)查芽期的發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、胚根長和苗期株高、莖數(shù)、莖粗、根鮮質(zhì)量、根干質(zhì)量以及根體積等農(nóng)藝性狀，計(jì)算各性狀的耐鹽系數(shù)，計(jì)算各品種的綜合耐鹽值，根據(jù)綜合耐鹽值的大小來鑒定不同蘆筍品種的耐鹽程度，公告號(hào)為cn109380072a的中國專利一種鹽堿地種植蘆筍前種子培育方法，在培育耐鹽的種子種時(shí)，將蘆筍。但是上述兩種方法均采用氯化鈉溶液進(jìn)行脅迫處理，雖然鹽堿地土壤中主要鹽分為氯化鈉，但是土壤中還存在碳酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸鹽、ca2+、mg2+等鹽分，植物在生長過程中，各組分是相互協(xié)同作用，因此并不能準(zhǔn)確真實(shí)反映蘆筍在鹽堿地生長環(huán)境中的耐鹽程度。

4、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中蘆筍耐鹽評(píng)價(jià)方法中涉及到鹽脅迫處理溶液配置不合理，評(píng)價(jià)生長階段不夠全面，本技術(shù)提出一種用于濱海鹽堿地的蘆筍全生育期耐鹽性鑒定方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中蘆筍耐鹽評(píng)價(jià)方法中涉及到鹽脅迫處理溶液配置不合理，評(píng)價(jià)生長階段不夠全面，本技術(shù)提出一種用于濱海鹽堿地的蘆筍全生育期耐鹽性鑒定方法。

2、本技術(shù)的具體方案如下：

3、一種用于濱海鹽堿地的蘆筍全生育期耐鹽性鑒定方法，包括如下步驟：

4、步驟s1.蘆筍發(fā)芽期耐鹽性鑒定

5、用鹽溶液和清水分別將蘆筍種子進(jìn)行處理，分別統(tǒng)計(jì)蘆筍種子經(jīng)鹽溶液和清水處理后的發(fā)芽率，并計(jì)算相對(duì)鹽害率，依據(jù)相對(duì)鹽害率劃定蘆筍種子耐鹽等級(jí)；

6、步驟s2.蘆筍苗期耐鹽性鑒定

7、將蘆筍種子盆栽培養(yǎng)為蘆筍幼苗，將蘆筍幼苗轉(zhuǎn)移至水培槽培養(yǎng)，隨后對(duì)蘆筍幼苗進(jìn)行鹽脅迫處理，統(tǒng)計(jì)苗期鹽害等級(jí)，并依據(jù)苗期鹽害等級(jí)計(jì)算鹽害指數(shù)，依據(jù)鹽害指數(shù)劃定蘆筍苗期耐鹽等級(jí)；

8、步驟s3.蘆筍田間生長期耐鹽性鑒定

9、先將蘆筍種子盆栽培養(yǎng)至苗期并分別移栽至土壤含鹽量大于0.5％的鹽堿地和土壤含鹽量小于0.1％的土壤中進(jìn)行栽培，之后繼續(xù)培養(yǎng)不少于50天，，最后測(cè)定蘆筍的生長指標(biāo)，并計(jì)算生長指標(biāo)的耐鹽系數(shù)和耐鹽性的隸屬函數(shù)值，基于模糊綜合評(píng)價(jià)法計(jì)算蘆筍的耐鹽性的修正隸屬函數(shù)值，依據(jù)耐鹽性的修正隸屬函數(shù)值的平均值劃定蘆筍品種生長期耐鹽等級(jí)；

10、步驟s4.蘆筍發(fā)芽期、苗期和田間生長期耐鹽性的全生育期鑒定

11、通過維恩圖來檢測(cè)蘆筍發(fā)芽期、苗期和田間生長期耐鹽性重疊集，篩選出全生育期耐鹽性強(qiáng)的蘆筍品種。

12、優(yōu)選的，所述步驟s1中鹽溶液的制備過程如下：將鹽堿土壤和蒸餾水按質(zhì)量比為1：2混合并攪拌，隨后過濾獲得土壤浸提液，并將土壤浸提液稀釋至含鹽量為10g/l的鹽溶液。

13、優(yōu)選的，所述步驟s1中鹽溶液和清水分別將蘆筍種子進(jìn)行處理的過程如下：

14、鹽溶液處理：將蘆筍種子在臭氧中消毒，并將蘆筍種子置于鹽溶液中培養(yǎng)，鹽溶液沒過蘆筍種子1/4，所述培養(yǎng)溫度為27℃；

15、清水處理：將蘆筍種子在臭氧中消毒，并將蘆筍種子置于清水中培養(yǎng)，清水沒過蘆筍種子1/4，所述培養(yǎng)溫度為27℃。

16、優(yōu)選的，所述步驟s1中蘆筍種子的發(fā)芽率的計(jì)算公式如式(1)：

17、發(fā)芽率＝(12d發(fā)芽種子總數(shù)/供試種子數(shù))×100％(1)。

18、優(yōu)選的，所述步驟s1中蘆筍種子的相對(duì)鹽害率計(jì)算公式如式(2)：

19、

20、優(yōu)選的，所述步驟s2中對(duì)蘆筍幼苗進(jìn)行鹽脅迫處理的過程如下：將土壤浸提液稀釋至含鹽量為12g/l，再與山崎營養(yǎng)液等體積混合，作為鹽脅迫處理的培養(yǎng)液，培養(yǎng)溫度8點(diǎn)到18點(diǎn)為28℃，18點(diǎn)至次日8點(diǎn)為19℃，光照強(qiáng)度為40000lux，每天8點(diǎn)～10點(diǎn)和15點(diǎn)～17點(diǎn)用通氣泵向培養(yǎng)液中通氣4h。

21、優(yōu)選的，步驟s2所述鹽害指數(shù)計(jì)算公式如式(3)：

22、

23、其中，n是總幼苗數(shù)量，n0為正常生長的幼苗的數(shù)量；n1為幼苗的癥狀正常生長，但新生莖頂部有黃化和黃化癥狀的幼苗的數(shù)量；n2為幼苗的所有新生莖的生長受到抑制，葉片黃化，莖干率低于20％的幼苗的數(shù)量；n3為幼苗的癥狀為生長受到抑制，地上葉片全部黃化，莖干率為20～60％間幼苗的數(shù)量；n4是幼苗的癥狀為死亡且莖干率超過60％幼苗的數(shù)量。

24、優(yōu)選的，所述步驟s3中測(cè)定的蘆筍生長指標(biāo)包括株高、莖粗、莖數(shù)、鱗莖盤直徑、地下部鮮重、地下部干重、根數(shù)、地上部鮮重和地上部干重。

25、優(yōu)選的，所述步驟s3中耐鹽系數(shù)的計(jì)算公式如式(4)：

26、

27、其中，sctg是基因型g的性狀t的耐鹽系數(shù)，xtgst和xtgck分別是鹽處理組和對(duì)照組中的基因型f的性狀t的性狀值。

28、優(yōu)選的，所述步驟s3中耐鹽性的隸屬函數(shù)值的計(jì)算公式如式(5)：

29、

30、其中，utg是基因型g的性狀t耐鹽性的隸屬函數(shù)值，sctmin和sctmax分別是性狀t的耐鹽系數(shù)的最小值和最大值。

31、優(yōu)選的，所述步驟s3中耐鹽性的修正隸屬函數(shù)值和耐鹽性的修正隸屬函數(shù)值的平均值計(jì)算的公式如式(6)和式(7)：

32、

33、其中，ug是耐鹽基因型g的所有測(cè)定性狀的隸屬函數(shù)的平均值，ptg為經(jīng)主成分分析所得的蘆筍各品種性狀t的貢獻(xiàn)率，w是耐鹽性修正隸屬函數(shù)值的平均值。

34、本技術(shù)的有益效果：

35、(1)本技術(shù)通過在蘆筍的發(fā)芽期、幼苗期以及田間生長期進(jìn)行品種的耐鹽性鑒定，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蘆筍全生育期耐鹽性的全面評(píng)估。這種多階段的鑒定方法能夠確保所選品種在各個(gè)生長階段均能展現(xiàn)出良好的耐鹽性能，從而在實(shí)際生產(chǎn)中具有更高的適應(yīng)性和穩(wěn)定性。

36、(2)本技術(shù)在蘆筍的發(fā)芽期和幼苗期，將傳統(tǒng)的氯化鈉脅迫方法改為使用鹽堿地土壤浸提液進(jìn)行鹽脅迫處理。這種方法更貼近實(shí)際生產(chǎn)中土壤的鹽分條件，能夠提供更為真實(shí)的模擬環(huán)境。通過這種方式，確保了耐鹽性評(píng)估的科學(xué)性和實(shí)用性。

37、(3)本技術(shù)在蘆筍田間生長期，采用了模糊綜合評(píng)價(jià)法來評(píng)估蘆筍品種的耐鹽性。這種方法通過綜合考慮鹽脅迫下多個(gè)表型指標(biāo)的貢獻(xiàn)率，計(jì)算出各品種的耐鹽性修正隸屬函數(shù)值。這種多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)的方法避免了僅依賴單一性狀指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)的局限性，能夠更全面、更準(zhǔn)確地反映品種的耐鹽性能。