本發(fā)明涉及螃蟹品質(zhì)評(píng)價(jià)，具體而言，涉及一種螃蟹的代謝物和脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法及螃蟹品質(zhì)的評(píng)價(jià)方法。

背景技術(shù)：

1、中華絨螯蟹(eriocheir?sinensis)，又名河蟹和大閘蟹，因其富含均衡的氨基酸、多不飽和脂肪酸和微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分而深受消費(fèi)者喜愛，所有這些營(yíng)養(yǎng)成分都有助于它具有獨(dú)特的風(fēng)味和較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于中華絨螯蟹的內(nèi)在特征品質(zhì)成分受養(yǎng)殖管理等人為因素和地理位置等環(huán)境因素影響較大，不可避免地導(dǎo)致蟹市場(chǎng)中的中華絨螯蟹的品質(zhì)參差不齊。

2、現(xiàn)階段，中華絨螯蟹品質(zhì)等級(jí)判定標(biāo)準(zhǔn)主要從重量、肥滿度和性別等外部形態(tài)特征判定中華絨螯蟹品質(zhì)的好壞，蟹市場(chǎng)中大蟹的價(jià)格一般會(huì)比小蟹高2-5倍。目前，對(duì)中華絨螯蟹內(nèi)在品質(zhì)特征成分的檢測(cè)，主要集中在對(duì)氨基酸、核苷酸、膽固醇和甜菜堿等營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，多數(shù)采用一種樣品前處理技術(shù)和儀器分析方法對(duì)應(yīng)靶向分析蟹樣品中特定的一類營(yíng)養(yǎng)成分，無法同時(shí)對(duì)中華絨螯蟹中的大量品質(zhì)特性組分進(jìn)行全面系統(tǒng)分析。但由于中華絨螯蟹本身具有復(fù)雜易變的生物特性，每一類營(yíng)養(yǎng)成分信息都難以精確代表蟹樣品的內(nèi)在品質(zhì)特性，導(dǎo)致內(nèi)在品質(zhì)特征成分指標(biāo)在中華絨螯蟹品質(zhì)評(píng)價(jià)上的應(yīng)用并不多，以代謝組學(xué)和脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)來構(gòu)建中華絨螯蟹代謝物和脂質(zhì)指紋圖譜更是未見報(bào)道。

3、因此，亟需一種能夠系統(tǒng)全面反映中華絨螯蟹內(nèi)在品質(zhì)組分的分析方法，對(duì)后續(xù)品質(zhì)特征組分挖掘和品質(zhì)調(diào)控機(jī)理研究尤為重要。

4、鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種螃蟹的代謝物和脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法及螃蟹品質(zhì)的評(píng)價(jià)方法以解決上述技術(shù)問題。

2、本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種螃蟹的代謝物指紋圖譜的構(gòu)建方法，其包括如下步驟：

4、s1：提取待測(cè)螃蟹組織的代謝物；

5、s2：運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)提取獲得的代謝物進(jìn)行檢測(cè)，獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和代謝物注釋，獲得螃蟹的代謝物指紋圖譜；

6、其中，檢測(cè)時(shí)采用的液相色譜柱為：acquity?uplc?beh?amide(1.7μm,2.1*100mmcolumn)，色譜柱溫度為40℃；液相色譜的條件包括：流動(dòng)相a為乙腈-水(5:5,v/v)和5～10mm乙酸銨，流動(dòng)相b為乙腈-水(95：5,v/v)和5～10mm乙酸銨，進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.2～0.4min/l,進(jìn)樣量為2～4μl；

7、梯度洗脫程序?yàn)椋?min，95％～98％的流動(dòng)相b；0-2min，95％～98％流動(dòng)相b；2-17min，50％流動(dòng)相b；17-21min，50％流動(dòng)相b；21-23min，95％～98％流動(dòng)相b；23-25min，95％～98％流動(dòng)相b；

8、或，0min，95％～98％的流動(dòng)相b；0-1min，95％～98％流動(dòng)相b；1-17min，50％流動(dòng)相b；17-21min，50％流動(dòng)相b；21-22min，95％～98％流動(dòng)相b；22-25min，95％～98％流動(dòng)相b；

9、質(zhì)譜參數(shù)為：以esi為離子源，采用正負(fù)模式進(jìn)行全掃描(full?ms)-ddms2，噴霧電壓(spray?voltage)：±4000-4500(v)；鞘氣壓力(sheath?gas?pressure)：40-50psi；輔助氣體壓力(auxiliary?gas?pressure)：10-12arbitrary?units(arb)；毛細(xì)管溫度(capillary?temperature)：320-350℃；full?ms掃描范圍為100-1500m/z，分辨率為70000，ddms2分辨率為17500，標(biāo)準(zhǔn)化碰撞能30ev。

10、第二方面，本發(fā)明提供了一種螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其包括如下步驟：s1：提取待測(cè)螃蟹組織的脂質(zhì)；

11、s2：運(yùn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)對(duì)提取獲得的脂質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，獲得的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和脂質(zhì)注釋，獲得螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜；

12、其中，檢測(cè)時(shí)采用的液相色譜柱為：xbridge?c18(3.5μm,4.6*100mm?column)，色譜柱溫度為40℃；液相色譜的條件包括：流動(dòng)相a為乙腈-水(6:4,v/v)和5-10mm乙酸銨，流動(dòng)相b為異丙醇-乙腈(9：1,v/v)和5-10mm乙酸銨，進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.3-0.4min/l,進(jìn)樣量為2-4μl；進(jìn)樣室溫度設(shè)置為20℃；

13、梯度洗脫程序?yàn)?min，20-30％的流動(dòng)相b；0-2min，40-43％流動(dòng)相b；2-4min，50-60％流動(dòng)相b；4-8min，70-75％流動(dòng)相b；8-16min，80％流動(dòng)相b；16-18min，85％流動(dòng)相b；18-19min，85-95％流動(dòng)相b；19-19.1min，20-30％流動(dòng)相b；19.1-20min，20-30％流動(dòng)相b；

14、質(zhì)譜參數(shù)為：以esi為離子源，采用正負(fù)模式進(jìn)行全掃描(full?ms)-ddms2，噴霧電壓(spray?voltage)：±4000-4500(v)；鞘氣壓力(sheath?gas?pressure)：40-50psi；輔助氣體壓力(auxiliary?gas?pressure)：10-12arbitrary?units(arb)；毛細(xì)管溫度(capillary?temperature)：320-350℃；full?ms掃描范圍為100-1500m/z，分辨率為70000，ddms2分辨率為17500，標(biāo)準(zhǔn)化碰撞能30ev。

15、第三方面，本發(fā)明還提供了一種螃蟹品種或螃蟹養(yǎng)殖方式的分類方法，其包括如下(1)-(2)中至少一項(xiàng)所示的方法：

16、(1)按照上述的螃蟹的代謝物指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得目標(biāo)螃蟹的代謝物指紋圖譜；根據(jù)所測(cè)得的多個(gè)螃蟹的代謝物指紋圖譜進(jìn)行比較，從而對(duì)螃蟹品種或養(yǎng)殖方式進(jìn)行歸類；

17、(2)按照上述的螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得目標(biāo)螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜；根據(jù)所測(cè)得的多個(gè)螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行比較，從而對(duì)螃蟹品種或養(yǎng)殖方式進(jìn)行歸類。

18、第四方面，本發(fā)明還提供了一種螃蟹品種或養(yǎng)殖方式的鑒別方法，其包括如下(1)-(2)中至少一項(xiàng)所示的方法：

19、(1)按照上述的螃蟹的代謝物指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得多個(gè)已知品種或養(yǎng)殖方式的螃蟹的代謝物指紋圖譜；再根據(jù)上述的螃蟹的代謝物指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得待鑒定螃蟹的代謝物指紋圖譜；將所鑒定螃蟹的代謝物指紋圖譜與多個(gè)已知品種螃蟹的代謝物指紋圖譜進(jìn)行比較，從而對(duì)螃蟹品種或養(yǎng)殖方式進(jìn)行鑒定；

20、(2)按照上述的螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得多個(gè)已知品種或養(yǎng)殖方式的螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜；再根據(jù)上述的螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得待鑒定螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜；將所鑒定螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜與多個(gè)已知品種或養(yǎng)殖方式螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行比較，從而對(duì)螃蟹品種或養(yǎng)殖方式進(jìn)行鑒定。

21、第五方面，本發(fā)明還提供了一種螃蟹品質(zhì)的評(píng)價(jià)方法，其包括如下步驟：

22、(1)按照上述的螃蟹的代謝物指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得至少兩個(gè)待評(píng)價(jià)螃蟹的代謝物指紋圖譜，和/或，按照上述的螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得至少兩個(gè)待評(píng)價(jià)螃蟹的脂質(zhì)指紋圖譜；

23、(2)注釋獲得的代謝物和/或脂質(zhì)成分進(jìn)行opls-da分析，基于opls-da模型進(jìn)行品質(zhì)特征組分篩選，以p<0.05且vip>1為篩選條件篩選差異代謝物和/或脂質(zhì)成分，根據(jù)篩選獲得的差異代謝物和/或脂質(zhì)成分對(duì)螃蟹品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

24、本發(fā)明具有以下有益效果：

25、本發(fā)明提供了一種螃蟹的代謝物及脂質(zhì)指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法能夠構(gòu)建螃蟹的代謝物及脂質(zhì)指紋圖譜，利用該代謝物和脂質(zhì)指紋圖譜可以準(zhǔn)確表征螃蟹(特別是中華絨螯蟹)的內(nèi)在品質(zhì)特性。利用代謝物和脂質(zhì)多維指標(biāo)，達(dá)到系統(tǒng)全面、高效和精準(zhǔn)評(píng)價(jià)判定螃蟹(特別是中華絨螯蟹)內(nèi)在品質(zhì)的效果，在技術(shù)理論和實(shí)際推廣上具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

26、本發(fā)明的提出，克服了現(xiàn)階段品質(zhì)組分分析方法無法對(duì)中華絨螯蟹中的大量品質(zhì)特征代謝物進(jìn)行全面系統(tǒng)分析的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)具有復(fù)雜基質(zhì)特性的蟹可食部位等組織中的大量?jī)?nèi)源性代謝物和脂質(zhì)進(jìn)行快速、靈敏、可量化全局分析，在挖掘螃蟹特征品質(zhì)指標(biāo)和完善蟹品質(zhì)等級(jí)判定標(biāo)準(zhǔn)方面具有突出優(yōu)勢(shì)。

27、本發(fā)明提供的指紋圖譜的構(gòu)建方法對(duì)其他水產(chǎn)品品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)的挖掘也具有借鑒意義。