本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，特別是涉及activin?a在制備新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎診斷試劑和治療藥物中的用途。

背景技術(shù)：

1、新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(neonatal?necrotizing?enterocolitis，nec)是新生兒期常見且極為嚴(yán)重的胃腸道急重癥，主要見于早產(chǎn)兒和低出生體重的新生兒，是新生兒特有的一種疾病，其特點(diǎn)是腸道損傷由黏膜損傷到全層壞死、穿孔等不同程度的損傷。據(jù)統(tǒng)計(jì)，妊娠≤33w或出生體重≤2500g的嬰兒nec發(fā)病率高達(dá)13％，nec死亡率約為20％～30％；接受手術(shù)的兒童死亡率高達(dá)50％。當(dāng)前，nec的臨床診斷和治療仍面臨諸多困境。診斷方面，目前主要依據(jù)臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查，由于臨床表現(xiàn)不特異，且受限于醫(yī)務(wù)人員的醫(yī)療水平，易發(fā)生漏診或誤診；影像學(xué)檢測可以較準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)合并腸穿孔以及大面積腸壞死的情況，但很難做到早期診斷。目前尚無用于nec診斷的血清學(xué)標(biāo)志物，當(dāng)腸道病變發(fā)生在分子層面、細(xì)胞層面或局部組織層面等微觀情況時(shí)，影像學(xué)無法辨別，但某些血清學(xué)生物標(biāo)志物會發(fā)生顯著改變，通過檢測血液或體液中的生物標(biāo)志物可以早期及時(shí)診斷，做到早診斷早治療。目前nec的臨床治療仍以內(nèi)科保守治療為主要方式，因?yàn)槭中g(shù)治療的患兒在術(shù)后往往會并發(fā)諸多的并發(fā)癥，如短腸綜合癥、膽汁淤積、生長顯著受損以及神經(jīng)發(fā)育不良等疾病。此外，這些嬰兒需要長期護(hù)理，治療復(fù)雜且花費(fèi)高昂。因此，僅當(dāng)合并腸穿孔或內(nèi)科保守治療無效或疾病進(jìn)展，需進(jìn)行外科手術(shù)治療。目前公認(rèn)的觀點(diǎn)是，早期及時(shí)治療仍然是提高nec患兒生存率的最佳方式。因此，發(fā)現(xiàn)新型標(biāo)志物用于nec的早期診斷和免疫新療法對nec的臨床治療具有重要意義。

2、激活素(activin)是一種多功能的細(xì)胞因子，屬于轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowth?factor-β,tgf-β)超家族，該家族的其他成員還包括抑制素(inhibin)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bmps)、生長分化因子(gdfs)等。其中，激活素a(activin?a)是一種由兩個(gè)βa亞基組成的二聚體蛋白。有研究表明激活素參與了機(jī)體的多種生理和病理過程，包括炎癥，代謝，體內(nèi)平衡，修復(fù)，細(xì)胞保護(hù)作用，免疫應(yīng)答和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)等功能。作為激活素家族最豐富的成員，activin?a表達(dá)的增加與多種炎癥、自身免疫性疾病的進(jìn)展有關(guān)，包括炎癥性腸病、腦膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。然而，activin?a在nec中的作用仍不清楚。本技術(shù)發(fā)明人近期研究發(fā)現(xiàn)activin?a在nec期間，在病變腸組織中表達(dá)水平增高，是潛在的診斷標(biāo)志物；并進(jìn)一步通過動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)揭示了activin?a通過誘導(dǎo)小腸上皮細(xì)胞凋亡而促進(jìn)腸組織損傷，而阻斷activin?a可有效治療nec介導(dǎo)的腸損傷，提示其是nec的治療新靶點(diǎn)?；诖?，我們提出activin?a作為nec的新型標(biāo)志物在nec診斷和治療中具有重要臨床意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供activin?a在制備nec診斷試劑和治療藥物中的用途，通過探討activin?a在nec中的作用，研究activin?a中和抗體對nec的干預(yù)作用，為臨床上nec的診斷、預(yù)后、療效評估以及治療提供一個(gè)具有潛在和良好應(yīng)用價(jià)值的新靶點(diǎn)和新策略。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供activin?a作為生物標(biāo)志物在制備nec診斷試劑、預(yù)后試劑或療效評估試劑中的用途。

3、在一些實(shí)施例中，所述試劑用于測定血液體液樣品和/或組織樣本中activin?a的濃度。

4、在一些實(shí)施例中，所述試劑檢測activin?a濃度的方法包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme?linked?immunosorbent?assay,elisa)法、化學(xué)發(fā)光法、免疫比濁法、免疫熒光法、膠體金法、質(zhì)譜法、微流控芯片法等。

5、在一些實(shí)施例中，所述體液樣品和/或組織樣本中activin?a的濃度與nec的嚴(yán)重程度正相關(guān)。

6、在一些實(shí)施例中，所述血液樣本包括但不局限于血清、血漿、全血等。

7、在一些實(shí)施例中，所述體液樣本包括但不局限于尿液、腦脊液、胸水、腹水等。

8、在一些實(shí)施例中，所述組織樣本包括但不局限于腸組織等。

9、在一些實(shí)施例中，所述試劑用于診斷或監(jiān)測nec的存在和/或過程和/或嚴(yán)重程度和/或預(yù)后。

10、本發(fā)明第二方面提供activin?a中和抗體和/或activin?a的其他潛在抑制劑和/或阻斷劑在制備用于改善和/或治療nec的藥物中的用途。

11、在一些實(shí)施例中，所述藥物的有效成分包括以下組分中的至少一種：activin?a中和抗體，除activin?a中和抗體之外的用于抑制和/或阻斷activin?a表達(dá)或活性的物質(zhì)，activin?a中和抗體經(jīng)化學(xué)修飾后所得的衍生物，除activin?a中和抗體之外的用于抑制和/或阻斷activin?a表達(dá)或活性的物質(zhì)經(jīng)化學(xué)修飾后所得的衍生物。所述化學(xué)修飾會改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，從而影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、生物活性和功能，但不會影響蛋白質(zhì)主要功能，同時(shí)，所述化學(xué)修飾的目的是為了進(jìn)一步有效控制和提高藥物質(zhì)量和安全性，例如，氧化修飾、糖基化、磷酸化、乙酰化等。

12、在一些實(shí)施例中，所述藥物具有以下功效(ⅰ)至(ⅲ)中的至少一種：

13、(ⅰ)抑制nec介導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)和釋放；

14、(ⅱ)減少nec誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞凋亡；

15、(ⅲ)減輕腸道損傷。

16、在一些實(shí)施例中，所述nec介導(dǎo)的炎癥因子包括但不局限于白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，il-6)、白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β，il-1β)等。

17、在一些實(shí)施例中，所述藥物通過下調(diào)促凋亡因子的表達(dá)和/或活化水平和/或上調(diào)抗凋亡因子的表達(dá)和/或活化水平以減少腸上皮細(xì)胞凋亡，所述促凋亡因子包括但不局限于bax、cleaved-caspase?9等，所述抗凋亡因子包括但不局限于bcl-2等。

18、在一些實(shí)施例中，所述藥物使用時(shí)，所述有效成分的有效給藥劑量不低于50μg/kg體重。

19、在一些實(shí)施例中，所述藥物可以為單成分物質(zhì)，亦可為復(fù)方制劑。

20、在一些實(shí)施例中，所述藥物還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。

21、在一些實(shí)施例中，所述藥物的形式無特殊限制，可以為固體、液體、凝膠、半流質(zhì)、氣霧等各種物質(zhì)形式。

22、在一些實(shí)施例中，所述藥物主要針對的對象為哺乳動物，所述哺乳動物優(yōu)選為嚙齒目動物、偶蹄目動物、奇蹄目動物、兔形目動物、靈長目動物等，所述靈長目動物優(yōu)選為猴、猿或人。

23、在一些實(shí)施例中，所述藥物的給藥形式可以比較豐富，可以是胃腸道給藥亦可以是非胃腸道給藥。一般推薦針對各化學(xué)藥物的已知給藥途徑給藥，如靜脈注射、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等。在動物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，通常采用腹腔注射或尾靜脈注射，腹腔注射操作簡單；而對于人類nec的治療，通常采用靜脈注射或其他的方式。

24、如上所述，本發(fā)明的activin?a在制備nec診斷試劑和治療藥物中的用途，具有以下有益效果：

25、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)activin?a在nec期間表達(dá)水平升高并促進(jìn)了nec的發(fā)生發(fā)展?；诖?，本發(fā)明進(jìn)一步研究并探討了activin?a中和抗體對nec的治療作用，發(fā)現(xiàn)activin?a中和抗體能顯著抑制nec介導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)和釋放，有效減輕腸上皮細(xì)胞的凋亡，顯著改善nec腸道損傷。因此，本發(fā)明提出了activin?a作為生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)在nec中的用途，為nec的診斷試劑和治療nec原創(chuàng)新藥的研發(fā)和制備提供了依據(jù)，為nec的臨床內(nèi)科治療提供了新策略，對nec治療具有重要意義。