本發(fā)明涉及化學(xué)分析，具體為一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法。
背景技術(shù)：
1、n-亞硝胺化合物是強致癌性物質(zhì)，是重要的化學(xué)致癌物之一，是四大食品污染物之一，食物、化妝品、啤酒和香煙中都含有亞硝胺，特別是在熏臘食品中，含有大量的亞硝胺類物質(zhì)，而在我國熏臘食品是從古就有，消費量巨大，這就容易導(dǎo)致平常時期人們在飲食熏臘食品的同時，攝入亞硝胺含量也比較多，從而引發(fā)某些消化系統(tǒng)腫瘤如食道癌的發(fā)病率與膳食攝入亞硝胺的問題。
2、目前，由于熏臘食品在運輸、加工、儲存等過程中，很容易因為缺氧、積熱、微生物、霉變等因素產(chǎn)生各種各樣的n-亞硝胺化合物，隨著現(xiàn)在在食品安全越來越嚴(yán)格，也越來越被關(guān)注，傳統(tǒng)的n-亞硝胺化合物檢測方法根據(jù)我國gb5009.26-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中n-亞硝胺類化合物的測定》公開了使用水蒸氣蒸餾法來分離提取n-亞硝胺類化合物，再采用大體積二氯甲烷進行分次液液萃取以萃取和凈化n-亞硝胺類化合物；然而，上述前處理方法仍存在不少缺點，往往需要稱取大量樣品，但是隨著稱樣量過大時，熏臘食品中本身具有的干擾因素就很多，比如脂肪、蛋白質(zhì)、色素和微量元素等，在初步處理后仍然含有一定量的干擾物質(zhì)，影響儀器分析檢測結(jié)果，容易導(dǎo)致最終的檢測結(jié)果和檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)備性較低的問題，因此，需要提供一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法來解決上述問題。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、(一)解決的技術(shù)問題
2、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，具備取樣少，降低待測干擾物質(zhì)，提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確等優(yōu)點，解決了目前熏臘食品中n-亞硝胺類化合物含量檢測容易受干擾，檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性不高的問題。
3、(二)技術(shù)方案
4、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，包括以下步驟：
5、s1、待測樣品獲取工序，從待測樣品中取下20g樣品，進行粉碎處理，將粉碎后的待測樣品混合氯化鈉、氫氧化鋇和水進行混合，得到樣品原料液；
6、s2、樣品提純凈化工序，將s1中獲取的樣品原料液采用水蒸氣蒸餾法進行提純，獲得蒸餾液，將蒸餾液利用gpc凈化處理，其中，gpc色譜條件為：凝膠滲透色譜柱：32cm×2.5cm；流動相：二氯甲烷；流速：5.0ml/min；進樣量：5.0ml；紫外檢測波長：254nm；棄去前16min色譜流出液，收集30min流分，淋洗3min；
7、s3、制備提取溶液工序，將s2中收集的溶液內(nèi)部加入40ml二氯甲烷或三氯甲烷，進行充分混合得到混合液，用超聲提取10-30min進行分離，分離過濾后的非水溶性溶液為提取液，用二氯甲烷或三氯甲烷重新定容至40ml；
8、s4、提取溶液分離工序，將s2剩余的水性溶液重復(fù)步驟s3中非水溶劑添加非水性溶液分離，合并所有提取液得到n-亞硝胺提取液；
9、s5、提取溶液濃縮工序，將s4中獲取的n-亞硝胺提取液進行旋蒸和氮吹，除去大部分溶劑后進行濃縮，得到上機n-亞硝胺濃縮液樣品，所述n亞硝胺濃縮液中包括n亞硝基二甲胺、n亞硝基二乙胺、n亞硝基甲基乙基胺、n-亞硝基二丙胺、n-亞硝基二丁胺、n-亞硝基吡咯、n-亞硝基哌啶、n-亞硝基嗎啉、n亞硝基二苯胺、n亞硝基二芐胺、n亞硝基二異丙胺和n亞硝基乙基異丙胺；
10、s6、色譜檢測定量分析工序，對n-亞硝胺濃縮液樣品，進行氣相色譜檢測和質(zhì)譜檢測，所述氣相色譜檢測的參數(shù)包括：
11、色譜柱為強極性石英毛細管柱；
12、進樣口溫度為230℃；
13、載氣為氦氣，流速為1mlmin；
14、進樣方式為不分流進樣；
15、進樣量為1ul；
16、升溫程序為初始溫度40℃，保持3min以8℃/min至170℃后，以20～30℃/min溫至230℃，保持3min；
17、所述質(zhì)譜檢測的參數(shù)包括：
18、色譜與質(zhì)譜接口溫度為230℃；
19、電離方式為電子轟擊源；
20、電離能量為70ev；
21、溶劑延遲9.5min；
22、離子源溫度為230℃；
23、四級桿溫度為150℃。
24、優(yōu)選的，所述待測樣品粉碎處理，將其粉碎精確至0.01g大小粉末，將粉末與氯化鈉、氫氧化鋇和水進行混合，其中成分含量40ml氯化鈉、10ml氫氧化鋇和20ml水。
25、優(yōu)選的，所述開始水蒸氣蒸餾法前需要進行密封性檢測，采用n-亞硝胺提取液進行設(shè)備密封性試驗，量取100ml餾水代替100g品至1l磨口樣品儲存燒瓶中，加入檢出限水平n-亞硝胺提取液，前處理過程參照2.1，進行蒸餾設(shè)備密封性試驗，回收率在70％以上，其密封性才能夠滿足試驗要求。
26、優(yōu)選的，所述水蒸氣蒸餾法的過程中，冷卻水的溫度≤15℃，能夠使蒸餾液盡快冷凝，避免損失，有利于提高蒸餾的回收率。
27、優(yōu)選的，所述s5中旋蒸和氮吹，是將n-亞硝胺提取液進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，于40℃水浴上濃縮至5-10ml，之后改氮吹，并準(zhǔn)確定容至1.0ml，搖勻后得到待上機n-亞硝胺濃縮液樣品，所述待上機n-亞硝胺濃縮液樣品可分為不同濃度的樣品。
28、優(yōu)選的，所述s6中定量分析是通過比較s5中上機檢測的n亞硝胺濃縮液所得結(jié)果的保留時間及相應(yīng)化合物子離子豐度比進行定性分析，通過對比分析不同濃度n-亞硝胺溶液，獲取相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得待測樣品進樣液中相應(yīng)的n-亞硝胺濃度以及空白對照中n-亞硝胺濃度，從而得出則待測樣品中n-亞硝胺類的含量。
29、(三)有益效果
30、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，具備以下有益效果：
31、該n-亞硝胺的提取分離檢測方法，通過針對待測樣品在進行檢測工作前，進行逐級的樣品處理工序，可以有效的降低了待測樣品本身具有的干擾因素，降低對檢測儀器的影響，從而得出的檢測結(jié)果和檢測數(shù)據(jù)都更加準(zhǔn)確，并且，該發(fā)明在進行檢測時，不再需要像傳統(tǒng)檢測方式那樣稱取大量樣品，整體操作也更加的便捷，滿足了熏臘食品中n-亞硝胺的檢測需求。
1.一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，所述待測樣品粉碎處理，將其粉碎精確至0.01g大小粉末，將粉末與氯化鈉、氫氧化鋇和水進行混合，其中成分含量40ml氯化鈉、10ml氫氧化鋇和20ml水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，所述開始水蒸氣蒸餾法前需要進行密封性檢測，采用n-亞硝胺提取液進行設(shè)備密封性試驗，量取100ml餾水代替100g品至1l磨口樣品儲存燒瓶中，加入檢出限水平n-亞硝胺提取液，前處理過程參照2.1，進行蒸餾設(shè)備密封性試驗，回收率在70％以上，其密封性才能夠滿足試驗要求。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，所述水蒸氣蒸餾法的過程中，冷卻水的溫度≤15℃，能夠使蒸餾液盡快冷凝，避免損失，有利于提高蒸餾的回收率。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，所述s5中旋蒸和氮吹，是將n-亞硝胺提取液進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，于40℃水浴上濃縮至5-10ml，之后改氮吹，并準(zhǔn)確定容至1.0ml，搖勻后得到待上機n-亞硝胺濃縮液樣品，所述待上機n-亞硝胺濃縮液樣品可分為不同濃度的樣品。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種n-亞硝胺的提取分離檢測方法，其特征在于，所述s6中定量分析是通過比較s5中上機檢測的n亞硝胺濃縮液所得結(jié)果的保留時間及相應(yīng)化合物子離子豐度比進行定性分析，通過對比分析不同濃度n-亞硝胺溶液，獲取相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得待測樣品進樣液中相應(yīng)的n-亞硝胺濃度以及空白對照中n-亞硝胺濃度，從而得出則待測樣品中n-亞硝胺類的含量。