本發(fā)明涉及化學(xué)分析，尤其涉及一種基于uplc-qtof-ms測(cè)定黃芩中多種活性成分的方法。

背景技術(shù)：

1、中國藥典記載黃芩為唇形科植物(scutellaria?baicalensis?georgi)的干燥根，其性寒味苦，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎的功效。山東是中藥資源大省，其中黃岑為代表性魯產(chǎn)道地藥材“魯十味”之一，具有悠久的栽培歷史和很高的市場(chǎng)認(rèn)可度。黃岑的主要化學(xué)成分為黃酮類、酚酸類、氨基酸、苯乙醇、留醇類等，其中黃酮類是主要成分，包括黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素、黃芩新素等。

2、傳統(tǒng)的黃岑藥用部位為根部，其莖葉常舍棄，對(duì)其莖葉的研究較少，黃芩莖葉部位中的化合物種類以及含量情況如何不明，而且也造成了資源浪費(fèi)。隨著綜合利用成為中藥資源綠色發(fā)展的趨勢(shì)，黃芩莖葉部位是否具有較好的利用價(jià)值和發(fā)展?jié)摿υ絹碓街档靡鹑藗兊年P(guān)注，對(duì)莖葉部位中的化合物種類以及含量的識(shí)別與檢測(cè)是亟待解決的關(guān)鍵問題之一。因此，獲得一種便捷高效、準(zhǔn)確率高、分辨率高、掃描范圍廣等特點(diǎn)的，可以進(jìn)行定性定量分析的檢測(cè)技術(shù)方案是非常必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種測(cè)定黃芩中化學(xué)成分的方法，采用本發(fā)明所述uplc-qtof-ms方法以及科學(xué)的參數(shù)條件具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可以定性、定量地分析出黃芩中活性成分種類和含量，還可以比較分析出黃芩根部、莖葉部以及不同采收時(shí)間獲得的黃芩中活性成分種類和含量，這對(duì)后續(xù)黃岑藥材質(zhì)量控制的研究具有重要意義。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種基于uplc-qtof-ms測(cè)定黃芩中化學(xué)成分的方法，其特征在于，包括如下步驟：

4、(1)取待測(cè)黃芩樣品粉碎后，與溶劑混合，并超聲提取、離心，取上清液作為供試品溶液；

5、(2)分別稱取標(biāo)準(zhǔn)品黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、芹菜素、芹菜素7-o-β-d-葡萄糖醛酸苷以及白楊素7-o-β-d-葡萄糖醛酸苷，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加甲醇定容，制得相應(yīng)化合物的對(duì)照品溶液；

6、(3)將供試品溶液和對(duì)照品溶液分別采用超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，得成分物質(zhì)峰后進(jìn)行定性分析和定量分析。

7、作為優(yōu)選，步驟(1)所述粉碎后的待測(cè)黃芩樣品與溶劑混合的質(zhì)量體積比為(0.7-1.5)g:(12-20)ml。

8、作為優(yōu)選，所述溶劑為體積分?jǐn)?shù)55-75％的乙醇。

9、作為優(yōu)選，步驟(1)所述超聲提取的功率為150-250w，所述超聲提取的頻率為25-35khz，所述超聲提取的時(shí)間為15-25min/次，所述超聲提取的次數(shù)為1-2次。

10、作為優(yōu)選，步驟(1)所述離心的轉(zhuǎn)速為14000-18000r/min，所述離心的時(shí)間為6-13min。

11、作為優(yōu)選，步驟(2)所述甲醇的體積分?jǐn)?shù)為65-75％。

12、作為優(yōu)選，步驟(3)檢測(cè)過程中的色譜條件為：色譜柱為acquityuplc?beh?c18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，流動(dòng)相a為0.1％甲酸乙腈，流動(dòng)相b為0.1％甲酸水溶液，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為2μl，流速為0.4ml/min。

13、作為優(yōu)選，步驟(3)檢測(cè)過程中的梯度洗脫程序?yàn)?～5min，31％→24％a，69％→76％b；5～9min，24％→30％a，76％→70％b；9～15min，30％→32％a，70％→68％b；15～25min，32％→45％a，68％→55％b；25～40min，45％→47％a，55％→53％b。

14、作為優(yōu)選，步驟(3)檢測(cè)過程中的質(zhì)譜條件為電噴霧電離源(esi)，正、負(fù)離子檢測(cè)模式(esi+、esi-)，掃描模式為全掃描；ms參數(shù)：質(zhì)量范圍m/z50-1500da，掃描時(shí)間0.2s。

15、作為優(yōu)選，所述待測(cè)黃芩樣品包括黃岑根部以及黃岑莖葉部。

16、通過采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下有益效果：

17、1.本發(fā)明通過所述測(cè)定方法結(jié)合優(yōu)化的操作條件能夠準(zhǔn)確的測(cè)定出黃芩中不同的化合物種類和含量的變化情況，而且操作簡(jiǎn)單，分析靈敏度更高、分辨率更高、準(zhǔn)確性好，具有良好的重復(fù)性和再現(xiàn)性。

18、2.采用本發(fā)明技術(shù)方案對(duì)不同部位的黃芩、不同采收時(shí)間的黃芩中的化學(xué)成分和含量進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在黃芩根部中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等含量比較高，在黃芩莖葉中野黃芩素、芹菜素、芹菜素7-o-β-d-葡萄糖醛酸苷、白楊素7-o-β-d-葡萄糖醛酸苷等化合物含量比較高；在3月份和11月份采收的黃芩根部與莖葉部中化合物含量相對(duì)較多，而在其他月份采收的不同部位黃芩中化合物含量均相對(duì)較少。而中藥質(zhì)量的優(yōu)劣取決于有效化學(xué)成分的含量，這也為黃岑藥材的質(zhì)量研究提供了科學(xué)依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種基于uplc-qtof-ms測(cè)定黃芩中化學(xué)成分的方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述粉碎后的待測(cè)黃芩樣品與溶劑混合的質(zhì)量體積比為(0.7-1.5)g:(12-20)ml；

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述超聲提取的功率為150-250w，所述超聲提取的頻率為25-35khz，所述超聲提取的時(shí)間為15-25min/次，所述超聲提取的次數(shù)為1-2次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述離心的轉(zhuǎn)速為14000-18000r/min，所述離心的時(shí)間為6-13min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述甲醇的體積分?jǐn)?shù)為65-75％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)檢測(cè)過程中的色譜條件為：色譜柱為acquityuplc?beh?c18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，流動(dòng)相a為0.1％甲酸乙腈，流動(dòng)相b為0.1％甲酸水溶液，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為2μl，流速為0.4ml/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)檢測(cè)過程中的梯度洗脫程序?yàn)?～5min，31％→24％a，69％→76％b；5～9min，24％→30％a，76％→70％b；9～15min，30％→32％a，70％→68％b；15～25min，32％→45％a，68％→55％b；25～40min，45％→47％a，55％→53％b。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)檢測(cè)過程中的質(zhì)譜條件為電噴霧電離源(esi)，正、負(fù)離子檢測(cè)模式(esi+、esi-)，掃描模式為全掃描；ms參數(shù)：質(zhì)量范圍m/z50-1500da，掃描時(shí)間0.2s。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測(cè)黃芩樣品包括黃岑根部以及黃岑莖葉部。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種基于UPLC?QTOF?MS測(cè)定黃芩中多種活性成分的方法，本發(fā)明所述技術(shù)方法具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可以定性、定量地分析出黃芩中活性成分種類和含量，還可以比較分析出黃芩根部、莖葉部以及不同采收時(shí)間獲得的黃芩中活性成分種類和含量，這對(duì)后續(xù)黃岑藥材質(zhì)量控制的研究具有重要意義。

技術(shù)研發(fā)人員：任曉菲,楊路平,焦燕妮,王國玲,邵立君,陳芳芳,李蔚,張麗瑩
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東省疾病預(yù)防控制中心
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30