本發(fā)明屬于涉及飲用水水質(zhì)檢測及水處理領(lǐng)域，具體涉及一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液及洗脫方法。
背景技術(shù)：
賈第鞭毛蟲(g.lamblia)和隱孢子蟲(cryptosporidium)是一類寄生于人和動物體內(nèi)的腸道原蟲(以下簡稱“兩蟲”)，也是引起人類非病毒性腹瀉的最主要病原生物。水環(huán)境中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲污染非常普遍，尤其是當(dāng)?shù)乇硭苌钗鬯蜣r(nóng)業(yè)污水污染的情況下更為嚴(yán)重。由于“兩蟲”主要以飲水為傳播媒介，預(yù)防“兩蟲”病爆發(fā)的關(guān)鍵是確保飲用水的安全。因此世界各國包括我國在內(nèi)均對其飲水中的濃度做了相應(yīng)規(guī)定，如目前我國“生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)”(gb5749-2006，非常規(guī)指標(biāo))和美國epa給定的限值均為＜1個/10l水。目前對其檢測方法很多，主要有以金胺-酚染色、改良抗酸染色、金胺-酚改良抗酸復(fù)染等為代表的染色鏡檢方法，以及常規(guī)pcr、ms-pcr、rt-pcr、nested-pcr、熒光定量pcr和生物探針技術(shù)等為代表的分子生物學(xué)檢測方法。不管采用何種檢測方法，對“兩蟲”卵囊的分離與富集是保證檢測結(jié)果的可靠性和可行性的關(guān)鍵問題。
目前“兩蟲”卵囊分離純化的浮選方法主要包括甘油飽和鹽水漂浮法、不連續(xù)蔗糖密度梯度離心法、cscl密度梯度離心法、飽和糖水漂浮法等(宋丹等.隱孢子蟲檢測方法研究進(jìn)展)；或通過表面抗原抗體結(jié)合方法將目的抗原吸附分離出來，主要包括免疫磁珠分離法(崔艷梅.水環(huán)境中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測方法的研究進(jìn)展)；或采用濾芯、膜濾方式對水樣進(jìn)行分離富集。甘油飽和鹽水漂浮法主要用于隱孢子蟲的初步檢測，但由于卵囊為無色透明的小球體，增加了檢測難度；同時由于水樣的采樣量通常都很大(10-100l以上)，因此密度梯度離心法、飽和糖水漂浮法實際操作難度都很大，同時也容易產(chǎn)生二次污染。epa1623推薦的膜濾操作克服了以上富集方法的缺點，已被各國供水行業(yè)廣泛采用，但卵囊回收率應(yīng)僅為20％-50％，主要損失在過濾濃縮環(huán)節(jié)。筆者在實驗中也證實，傳統(tǒng)機械式振蕩洗脫難以將兩蟲從濾膜表面洗脫。有研究者從提高洗脫液角度提出了改進(jìn)措施，但回收率仍不夠理想；本技術(shù)對洗脫方式和洗脫液組分進(jìn)行了改進(jìn)，提高了回收率。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點和不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫方法，適用于飲用水中隱孢子蟲卵囊和賈第蟲孢囊的快速風(fēng)險評估與預(yù)警。該方法應(yīng)用成本低廉，操作簡便易行，使用安全可靠，具有廣闊的應(yīng)用前景。
本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫液，所述洗脫液包括如下重量百分比的組分：1-2％異戊醇，1-2％nacl，0.2-0.5％的己炔二醇、甲基己炔二醇或二甲基己炔二醇中的一種，0.1-0.2％亞氨基二琥珀酸四鈉，0.2-0.5％聚磷酸鈉，2％-4％edta，余量為水。
一種提高隱孢子蟲和賈第蟲檢測回收率的洗脫方法，包括以下步驟：
(1)在標(biāo)準(zhǔn)濾囊檢測方法中，先將20-40ml洗脫液加入濾囊，然后將濾囊于40-50℃水浴下以40-60khz的超聲頻率超聲處理15min；所述洗脫液包括如下重量百分比的組分：1-2％異戊醇，1-2％nacl，0.2-0.5％的己炔二醇、甲基己炔二醇或二甲基己炔二醇中的一種，0.1-0.2％亞氨基二琥珀酸四鈉，0.2-0.5％聚磷酸鈉，2％-4％edta，余量為水；
(2)將濾囊中洗脫液傾出，重復(fù)步驟(1)的操作4-5次。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：
對比實驗表明，采用本發(fā)明洗脫方案可將隱孢子蟲卵囊的回收率提高至30-50％；賈第蟲卵囊回收率提高至35-50％，超過epa1623規(guī)定的20％限值；操作成本沒有明顯變化。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
實施例1
取1份50l去離子水，加入賈第蟲和隱孢子蟲標(biāo)樣(由加拿大toronto市某實驗室提供)，加入15mg/l的las表面活性劑、1mg/l有機硅氧烷消泡劑混合均勻，采用荷負(fù)電膜材料的clearscan小型濾囊，進(jìn)行負(fù)壓抽吸操作，操作壓強為200kpa；過濾結(jié)束后，在濾囊進(jìn)水口處倒入40ml洗脫液(洗脫液組分如下：1-2％異戊醇、1-2％nacl、0.2-0.5％己炔二醇、0.1-0.2％亞氨基二琥珀酸四鈉、0.2-0.5％聚磷酸鈉，2％-4％edta，余量為純水，以上均為重量百分比)，并將進(jìn)水口密封；將濾囊置于超聲清洗槽中，45℃水浴下、超聲頻率40-60khz、超聲處理15min；將濾囊中洗脫液傾出，重復(fù)上述洗脫過程5次；將全部洗脫液合并至高速離心管，加入nacl至飽和，離心處理；離心結(jié)束后采用免疫磁珠分離法進(jìn)行染色制片，用熒光顯微鏡計數(shù)，可得到該方法的回收率為41.7％。同時采用epa推薦的標(biāo)準(zhǔn)洗脫液和一次洗脫方法進(jìn)行對照，標(biāo)準(zhǔn)方法回收率為25.5％。
可見本發(fā)明提出的洗脫液配比及洗脫方法效果明顯優(yōu)于epa的標(biāo)準(zhǔn)方法。
上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。