本發(fā)明屬于食品添加劑檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及gc-ms/ms測定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。

背景技術(shù)：

合成香料3-乙?；?2,5-二甲基噻吩具有燒烤、堅(jiān)果的氣味，于2002年通過世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織下設(shè)的食品添加劑聯(lián)合專家委員會(huì)的安全評(píng)估，開始作為食品用香料使用。目前，我國允許其作為食品用合成香料使用，收錄于國標(biāo)gb2760-2014中。2013年6月4日，歐洲食品安全管理局公布了對(duì)該物質(zhì)重新評(píng)估的意見，認(rèn)為其在體內(nèi)和體外試驗(yàn)均表現(xiàn)出致突變性，作為食品用香料使用存在安全問題。2013年6月14日，歐盟委員會(huì)通過法規(guī)（regulation(ec)no545/2013），禁止該物質(zhì)作為食品用香料使用，將其從食品用香料法規(guī)附錄ⅰ食品用香料清單中刪除。中國香精香料化妝品工業(yè)協(xié)會(huì)針對(duì)這一情況迅速做出反應(yīng)，于2013年8月14日發(fā)布自律文件（香化協(xié)字[2013]62號(hào)），要求香料生產(chǎn)企業(yè)不得生產(chǎn)用作食品用香料的3-乙?；?2,5-二甲基噻吩，食品用香精生產(chǎn)企業(yè)調(diào)整配方，不得使用該物質(zhì)。

目前對(duì)3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的檢測在國標(biāo)中尚屬空白，國內(nèi)針對(duì)此物質(zhì)的定量檢測研究開展的也不多，僅有一篇專利報(bào)道以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，公開號(hào)為：cn1046557775a，其公開了選擇性離子監(jiān)測（sim）模式檢測，內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量。該法存在的主要缺陷是：由于食用香精成分復(fù)雜，通常含結(jié)構(gòu)相近化合物，各組分在檢測中并不一定能完全分離，容易相互干擾，采用單極質(zhì)譜檢測，準(zhǔn)確度和靈敏度都有待考證。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種gc-ms/ms測定食用香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法。本發(fā)明與單級(jí)質(zhì)譜sim模式相比，本發(fā)明中采用多級(jí)質(zhì)譜mrm模式能更準(zhǔn)確的定性，同時(shí)，因?yàn)閺母蓴_嚴(yán)重的一級(jí)碎片中抽取了母離子，進(jìn)一步碎裂得到子離子來定量，靈敏度也高于單級(jí)質(zhì)譜，更適合于微量、痕量物質(zhì)的檢測。

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）將食用香精香料樣品用提取溶劑進(jìn)行超聲提取，冷卻后用提取溶劑定容，混勻后靜置，取上部溶液過微孔濾膜，所述的提取溶劑為正己烷或正庚烷；

2）取步驟1）得到的濾液，采用gc-ms/ms進(jìn)行測定，外標(biāo)法定量。

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步驟1）中超聲提取時(shí)間至少為15min。

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步驟1）中微孔濾膜為有機(jī)濾膜，孔徑為0.22μm或0.45μm。

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步驟2）中g(shù)c-ms/ms的色譜條件為：

色譜柱：hp-innowax或相當(dāng)者；

進(jìn)樣口溫度：240℃；

程序升溫條件：50℃保持1min，20℃/min升至200℃，保持3min，再25℃/min升至240℃，保持7min；

分流比為10:1；

柱流速為1.0ml/min；

進(jìn)樣量為1.0μl；

gc-ms/ms質(zhì)譜條件為：

離子源：電子轟擊源；

電子電離能量：70ev；

離子源溫度：230℃；

四級(jí)桿溫度：150℃；

碰撞氣體（n2）流速：1.5ml/min；

淬滅氣體（he）流速：2.25ml/min；

溶劑延遲：8min；

掃描方式：mrm；

母離子、子離子及碰撞能量如表1：

表1母離子、子離子及碰撞能量表（*為定量離子）

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的步驟2）中外標(biāo)法定量為用提取溶劑溶解3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，并用提取溶劑稀釋至所需濃度，上機(jī)測定，以峰面積或峰高繪制標(biāo)曲。

所述的gc-ms/ms測定食用香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于所述的色譜柱規(guī)格為30m×0.25mm×0.25μm或相當(dāng)者。

本發(fā)明首次采用gc-ms/ms檢測食用香精中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩；采用mrm模式能有效消除基質(zhì)效應(yīng)，提高靈敏度和準(zhǔn)確度；外標(biāo)法線性良好，定量準(zhǔn)確，檢出限為0.1mg/kg，如圖3所示。本方法前處理簡單，結(jié)果可靠，靈敏度高，對(duì)監(jiān)測食用香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的使用情況，保護(hù)消費(fèi)者健康具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

附圖說明

圖1是標(biāo)準(zhǔn)品典型圖譜；

圖2是加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的典型圖譜；

圖3是檢出限（加標(biāo)量0.1mg/kg）圖譜。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的說明，但并不局限于此，凡是對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍中。

實(shí)施例：本發(fā)明實(shí)施例中的樣品為粉末狀肉味香精

一、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

精確稱取3-乙?；?2,5-二甲基噻吩標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷或正庚烷溶解并定容，配制成濃度為1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

二、線性標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

取1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100.0μl，用正己烷或正庚烷稀釋并定容至10ml，得10μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

取10μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)使用液10.0μl、20.0μl、40.0μl、80.0μl、100.0μl，150.0μl、200.0μl、0.25ml，用正己烷分別稀釋并定容至10ml，得濃度為10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml、250ng/ml的線性標(biāo)準(zhǔn)溶液，供gc-ms/ms測定。

三、氣相色譜/質(zhì)譜條件

色譜條件:采用agilenthp-innowax色譜柱進(jìn)行分離；進(jìn)樣口溫度為240℃；程序升溫條件為50℃保持1min，20℃/min升至200℃，保持3min，再25℃/min升至240℃，保持7min；分流比為10:1；柱流速為1.0ml/min；進(jìn)樣量為1.0μl。

質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊源；電子電離能量為70ev；離子源溫度為230℃；四級(jí)桿溫度為150℃；碰撞氣體（n2）流速為1.5ml/min；淬滅氣體（he）流速為2.25ml/min；溶劑延遲時(shí)間為8min；掃描方式為mrm；母離子、子離子及碰撞能量如下表所示。

四、樣品測定

準(zhǔn)確稱取樣品0.1g于10ml容量瓶中，加入約7ml正己烷，超聲提取15min，靜置冷卻后用正己烷定容，混勻后靜置數(shù)分鐘，上部提取液過0.22μm有機(jī)相濾膜，取續(xù)濾液待上機(jī)測定。同時(shí)做試劑空白。

經(jīng)測試發(fā)現(xiàn)，試劑空白無干擾，樣品未檢出。

五、加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品測定

準(zhǔn)確稱取樣品0.1g于10ml容量瓶中，按表2中所列的加標(biāo)量進(jìn)行加標(biāo)，然后同樣品處理，續(xù)濾液待上機(jī)測定。考察回收率。各加標(biāo)水平平行測定3份。

表2三水加標(biāo)試驗(yàn)加標(biāo)量及平均回收率表

從表2可知，樣品的加標(biāo)回收率在94.9~100.3之間，說明本方法回收率較好。

圖1是標(biāo)準(zhǔn)品典型圖譜；圖2是加標(biāo)回收試驗(yàn)樣品中3-乙?；?2,5-二甲基噻吩的典型圖譜。從圖中可以得到，目標(biāo)物峰型對(duì)稱，響應(yīng)良好。

六、方法精密度試驗(yàn)

上述加標(biāo)（中水平）樣品平行制備6份，測定結(jié)果見表3。

表3方法精密度試驗(yàn)結(jié)果表

從表3可知，本方法重復(fù)性好。