本發(fā)明涉及一種檢測(cè)抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的方法，尤其是plc-qtof-ms法檢測(cè)抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的方法，屬于化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

近年來(lái)，由于蓮子價(jià)格的不斷攀升，不少?gòu)S家為了節(jié)約成本會(huì)用蕓豆餡料冒充蓮蓉餡料。蕓豆內(nèi)除含有維生素、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有一種對(duì)人體有害的成分——血球凝集素，該成分經(jīng)高溫烹調(diào)后可被破壞。但是如果在蕓豆加工過(guò)程中，烹調(diào)時(shí)間短或翻炒不均勻，致使蕓豆不熟，可引起食物中毒。蕓豆在消化吸收過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的氣體，造成脹肚。故消化功能不良、有慢性消化道疾病的人應(yīng)盡量少食。還有一些對(duì)豆類蛋白敏感人群，如誤食豆制品，可能會(huì)引起過(guò)敏性皮炎或嚴(yán)重的會(huì)產(chǎn)生休克。這些不適宜食用蕓豆類食品的人群若誤食沒(méi)有標(biāo)示有蕓豆成分的蓮蓉月餅，可能會(huì)造成不可預(yù)計(jì)的嚴(yán)重后果。

蕓豆的檢測(cè)依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)gb/t23814-2009蓮蓉制品中蕓豆成分定性pcr檢測(cè)方法，該方法為普通pcr法，主要過(guò)程為通過(guò)特異性基因序列擴(kuò)增后用凝膠成像的方式鑒別，此法步驟繁瑣，干擾因素較多，不利于批量檢測(cè)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果可靠的抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的檢測(cè)方法。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣的：

一種uplc-qtof-ms法檢測(cè)抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的方法，依次包括下述步驟：

1)制備對(duì)照品溶液

取對(duì)照品氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、對(duì)乙酰氨基酚、甲氧芐啶、吡羅昔康、萘普生、保泰松，分別加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中含5μg對(duì)照品的溶液，即得；

2)制備供試品溶液

a)固體制劑：取1g固體制劑加甲醇25ml超聲10分鐘，定容到50ml4000r/min離心5min，過(guò)濾，待用；

b)液體制劑：取10ml定容至50ml搖勻，4000r/min離心5min，過(guò)濾，待用；

3)分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1μl注入uhplc-qtof-ms，進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，記錄液相色譜圖及一級(jí)質(zhì)譜與二級(jí)質(zhì)譜；

4)結(jié)果判斷

供試品色譜中，不得檢出與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰；若檢出保留時(shí)間一致的色譜峰，色譜峰的一級(jí)質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜均不得與對(duì)照品一致色譜峰。

進(jìn)一步的，上述的一種uplc-qtof-ms法檢測(cè)抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的方法，所述的液質(zhì)聯(lián)用分析方法為：

1)正離子模式

乙腈為流動(dòng)相a，0.1％甲酸-5mmol/l甲酸銨水溶液為流動(dòng)相b，按照的a∶b的不同比例進(jìn)行梯度洗脫,所述流動(dòng)相梯度如下：0-0.5min，70％a、30％b；0.5-7min，70％-5％a、30％-95％b；7-8min，5％a、95％b，后運(yùn)行時(shí)間為2min；

電噴霧離子，毛細(xì)管電壓4.0kv，噴嘴電壓0v，脫溶劑氣溫度200℃，脫溶劑氣流速16l/min，鞘氣溫度325℃，鞘氣流速12l/min，掃描方式采用一級(jí)質(zhì)譜全掃描，采集頻率3spectra/s、二級(jí)質(zhì)譜全掃描2spectra/s，碰撞能量：0v、10v、20v；質(zhì)量采集范圍50-1000m/z；

2)負(fù)離子模式：乙腈為流動(dòng)相a：5mmol/l乙酸銨水溶液為流動(dòng)相b，所述流動(dòng)相梯度如下：0-0.5min，95％a、5％b；0.5-10min，95％-5％a、5％-95％b；10-11min，5％a、95％b，后運(yùn)行時(shí)間為2min；

電噴霧離子源，毛細(xì)管電壓3.5kv，噴嘴電壓0.5kv，脫溶劑氣溫度130℃，脫溶劑氣流速16l/min，鞘氣溫度200℃，鞘氣流速12l/min，掃描方式采用一級(jí)質(zhì)譜全掃描3spectra/s、二級(jí)質(zhì)譜全掃描2spectra/s，碰撞能量：0v，10v，20v；質(zhì)量采集范圍50-1050m/z。

進(jìn)一步的，上述的一種uplc-qtof-ms法檢測(cè)抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的方法，所述的uplc色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1.7μm粒徑，5.0×3.0mm，流速：0.3ml/min；柱溫：45℃。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的方法檢測(cè)速度快，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可重復(fù)性強(qiáng)。

附圖說(shuō)明

圖1是氫化可的松在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖2是氫化可的松在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖3是地塞米松在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖4是地塞米松在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖5是醋酸潑尼松在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖6是醋酸潑尼松在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖7是阿司匹林在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖8是阿司匹林在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖9是氨基比林在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖10是氨基比林在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖11是布洛芬在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖12是布洛芬在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖13是雙氯芬酸鈉在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖14是雙氯芬酸鈉在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖15是吲哚美辛在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖16是吲哚美辛在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖17是對(duì)乙酰氨基酚在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖18是對(duì)乙酰氨基酚在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖19是甲氧芐啶在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖20是甲氧芐啶在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖21是吡羅昔康在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖22是吡羅昔康在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖23是萘普生在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖24是萘普生在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖25是保泰松在碰撞能量10v時(shí)二級(jí)圖譜；

圖26是保泰松在碰撞能量20v時(shí)二級(jí)圖譜。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)做進(jìn)一步說(shuō)明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制，任何對(duì)本發(fā)明做有限次修改可得的技術(shù)方案仍然屬于本發(fā)明所要保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

1范圍

本方法適用于抗風(fēng)濕類保健食品中非法添加物質(zhì)的檢驗(yàn)。

本方法片劑、膠囊劑樣品中各藥物的檢出限為2.5mg/kg；口服液樣品中各藥物的檢出限為0.25mg/kg。

2結(jié)構(gòu)式、分子式、精確分子質(zhì)量等

2.1氫化可的松(hydrocortisone)

2.1.1分子式：c21h30o5

2.1.2精確分子質(zhì)量：362.2093

2.1.3cas號(hào)：50-23-7

2.1.4結(jié)構(gòu)式：

2.1.5理化特性

在乙醇或丙酮中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中幾乎不溶，在水中不溶。

2.2地塞米松醋酸酯(dexamethasone21-acetate)

2.2.1分子式：c24h31fo6

2.2.2精確分子質(zhì)量：434.2105

2.2.3cas號(hào)：1177-87-3

2.2.4結(jié)構(gòu)式：

2.2.5理化特性

在甲醇、乙醇、丙酮或二氧六環(huán)中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中極微溶解，在水中幾乎不溶。

2.3醋酸潑尼松(prednisone21-acetate)

2.3.1分子式：c23h28o6

2.3.2精確分子質(zhì)量：400.1886

2.3.3cas號(hào)：125-10-0

2.3.4結(jié)構(gòu)式：

2.3.5理化特性

在三氯甲烷中易溶，在丙酮中略溶，在乙醇或乙酸乙酯中微溶，在水中不溶。

2.4阿司匹林(acetylsalicylicacid)

2.4.1分子式：c9h8o4

2.4.2精確分子質(zhì)量：180.0423

2.4.3cas號(hào)：50-78-2

2.4.4結(jié)構(gòu)式：

2.4.5理化特性

在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或無(wú)水乙醚中微溶；在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解。

2.5氨基比林(aminophenazone)

2.5.1分子式：c13h17n3o

2.5.2精確分子質(zhì)量：231.1372

2.5.3cas號(hào)：58-15-1

2.5.4結(jié)構(gòu)式：

2.5.5理化特性

本品在乙醇或氯仿中易溶，在水或乙醚中溶解。

2.6布洛芬(ibuprofen)

2.6.1分子式：c13h18o2

2.6.2精確分子質(zhì)量：206.1307

2.6.3cas號(hào)：15687-27-1

2.6.4結(jié)構(gòu)式：

2.6.5理化特性

在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中易溶，在水中幾乎不溶；在氫氧化鈉或碳酸鈉試液中易溶。

2.7雙氯芬酸鈉(diclofenac)

2.7.1分子式：c14h10cl2nnao2

2.7.2精確分子質(zhì)量：316.9986

2.7.3cas號(hào)：15307-79-6

2.7.4結(jié)構(gòu)式：

2.7.5理化特性

在乙醇中易溶,在水中略溶,在三氯甲烷中不溶。

2.8吲哚美辛(indometacin)

2.8.1分子式：c19h16clno4

2.8.2精確分子質(zhì)量：357.0768

2.8.3cas號(hào)：53-86-1

2.8.4結(jié)構(gòu)式：

2.8.5理化特性

在丙酮中溶解，在甲醇、乙醇、三氯甲烷或乙醚中略溶，在甲苯中極微溶解，在水中幾乎不溶。

2.9對(duì)乙酰氨基酚(paracetanol)

2.9.1分子式：c8h9no2

2.9.2精確分子質(zhì)量：151.0633

2.9.3cas號(hào)：103-90-2

2.9.4結(jié)構(gòu)式：

2.9.5理化特性

在熱水或乙酵中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶。

2.10甲氧芐啶(trimethoprim)

2.10.1分子式：c14h18n4o3

2.10.2精確分子質(zhì)量：290.1379

2.10.3cas號(hào)：738-70-5

2.10.4結(jié)構(gòu)式：

2.10.5理化特性

在三氯甲烷中略溶，在乙醇或丙酮中微溶，在水中幾乎不溶；在冰醋酸中易溶。

2.11吡羅昔康(piroxicam)

2.11.1分子式：c15h13n3o4s

2.11.2精確分子質(zhì)量：331.0627

2.11.3cas號(hào)：36322-90-4

2.11.4結(jié)構(gòu)式：

2.11.5理化特性

在三氯甲烷中易溶，在丙酮中略溶，在乙醇或乙醚中微溶，在水中幾乎不

溶；在酸中溶解，在堿中略溶。

2.12萘普生(naproxen)

2.12.1分子式：c14h14o3

2.12.2精確分子質(zhì)量：230.0943

2.12.3cas號(hào)：22204-53-1

2.12.4結(jié)構(gòu)式：

2.12.5理化特性

在甲醇、乙醇或三氯甲烷中溶解，在乙醚中略溶，在水中幾乎不溶。

2.13保泰松(phenylbutazone)

2.13.1分子式：c19h20n2o2

2.13.2精確分子質(zhì)量：308.1525

2.13.3cas號(hào)：50-33-9

2.13.4結(jié)構(gòu)式：

2.13.5理化特性

在丙酮或氯仿中易溶，在乙醇或乙醚中溶解，在水中幾乎不溶；在氫氧化

堿溶液中溶解。

3uplc-qtof-ms法(檢驗(yàn)方法)

3.1試劑和材料

3.1.1甲醇，色譜純；

3.1.2甲酸，質(zhì)譜級(jí)；

3.1.3對(duì)照品:氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松、阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛、對(duì)乙酰氨基酚、甲氧芐啶、吡羅昔康、萘普生、保泰松；

3.1.4對(duì)照品溶液:取上表中對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1ml中含5μg的溶液，即得，使用時(shí)可根據(jù)實(shí)際情況稀釋至適當(dāng)濃度。

3.2儀器與設(shè)備

3.2.1uhplc-qtof-ms

3.3.2色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑:1.7μm粒徑，5.0×3.0mm，流速：0.3ml/min。柱溫：45℃。

3.3.2.1正離子模式：乙腈:0.1％甲酸-5mmol/l甲酸銨水溶液為流動(dòng)相。電噴霧離子源(esi+)，毛細(xì)管電壓4.0kv,噴嘴電壓0v，脫溶劑氣溫度200℃，脫溶劑氣流速16l/min,鞘氣溫度325℃,鞘氣流速12l/min，掃描方式采用一級(jí)質(zhì)譜全掃描，采集頻率3spectra/s、二級(jí)質(zhì)譜全掃描2spectra/s，碰撞能量：0v、10v、20v；質(zhì)量采集范圍50-1000m/z。

流動(dòng)相梯度

3.3.2.2負(fù)離子模式：乙腈：5mmol/l乙酸銨水溶液為流動(dòng)相。電噴霧離子源(esi-)，毛細(xì)管電壓3.5kv,噴嘴電壓0.5kv，脫溶劑氣溫度130℃，脫溶劑氣流速16l/min,鞘氣溫度200℃,鞘氣流速12l/min，掃描方式采用一級(jí)質(zhì)譜全掃描3spectra/s、二級(jí)質(zhì)譜全掃描2spectra/s，碰撞能量：0v，10v，20v；質(zhì)量采集范圍50-1050m/z。

3.3.2.3流動(dòng)相梯度

3.3分析步驟

3.3.1固體制劑：取一次服用量(一般取1g)加甲醇25ml超聲10分鐘，定容到50ml4000r/min離心5min，過(guò)濾，待用。

3.3.2液體制劑：取10ml定容至50ml搖勻，4000r/min離心5min，過(guò)濾，待用。

3.3.3取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1μl注入液相色譜儀，進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，記錄液相色譜圖及一級(jí)質(zhì)譜與二級(jí)質(zhì)譜。

3.4結(jié)果判斷

結(jié)果判斷供試品色譜中，應(yīng)不得檢出與對(duì)照品保留時(shí)間一致的色譜峰；若檢出保留時(shí)間一致的色譜峰，色譜峰的一級(jí)質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜均不得與對(duì)照品一致，各個(gè)組分的二級(jí)質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1至圖26。

以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。