本發(fā)明涉及一種檢測(cè)試紙，屬于檢測(cè)樣本中是否含有乳糖的技術(shù)領(lǐng)域，比如糞便樣本，尤其適合快速檢測(cè)糞便樣本中是否含有乳糖的試紙及該試紙的制備方法。

背景技術(shù)：
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乳糖主要來(lái)源于哺乳動(dòng)物的乳汁中，而且每種哺乳動(dòng)物的乳汁乳糖含量是不同的，比如，人乳含乳糖7％,牛奶中含乳糖4.2％,山羊奶含乳糖4.6％。牛奶是一種極富營(yíng)養(yǎng)的飲品,對(duì)于嬰幼兒來(lái)說(shuō)是母乳最佳替代品。牛奶中含有蛋白質(zhì)、碳水化合物、磷脂及鈣、鋅等多種微量元素。飲奶可以補(bǔ)充蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)及鈣、鋅等微量元素；降低佝僂病、骨質(zhì)疏松癥、貧血、心血管疾病等疾病發(fā)生的幾率。

正常人飲入含有乳糖的奶制品后，乳糖在小腸中會(huì)被位于小腸黏膜面絨毛遠(yuǎn)端刷狀緣上的乳糖酶分解為一分子葡萄糖和一分子半乳糖，葡萄糖和半乳糖均為單糖，可以直接被細(xì)胞吸收，葡萄糖進(jìn)入糖酵解途徑繼續(xù)分解；半乳糖則由半乳糖激酶轉(zhuǎn)化為半乳糖-1-磷酸，之后在半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶作用下，形成UDP-半乳糖，UDP-半乳糖在NAD+為輔酶的情況下，被UDP-半乳糖4-差向異構(gòu)酶轉(zhuǎn)換為UDP-葡萄糖，UPD-葡萄糖在UDP-葡萄糖焦磷酸化酶催化下轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?1-磷酸，進(jìn)而進(jìn)入糖酵解途徑繼續(xù)分解。

乳糖不耐受癥是指小腸尤其是空腸黏膜表面絨毛頂端的乳糖酶分泌量減少或活性不高不能完全消化和分解乳汁中乳糖，部分乳糖被結(jié)腸菌群酵解成乳酸、氫氣、甲烷和二氧化碳。乳酸刺激腸壁，增加腸蠕動(dòng)而出現(xiàn)腹瀉。二氧化碳在腸道內(nèi)產(chǎn)生脹氣和增加腸蠕動(dòng)，使兒童表現(xiàn)不安，偶爾還可能誘發(fā)腸痙攣出現(xiàn)腸絞痛。乳酸的增加還使糞便的pH值降低。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界都存在乳糖不耐受的問(wèn)題，發(fā)生率與種族有關(guān)，亞洲人95-100％、黑人60-80％、中歐人2-23％、美洲白人6-22％。據(jù)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心調(diào)查，我國(guó)北京、上海、廣州等地3-13歲兒童乳糖不耐受癥和乳糖吸收不良發(fā)生率約為80％。醫(yī)學(xué)上目前認(rèn)為，確定診斷乳糖不耐受癥狀可靠的方法是空腸活檢直接測(cè)定乳糖酶的活性，但其侵入性使其難作為常規(guī)手段。氫呼氣實(shí)驗(yàn)(HBT)是一種準(zhǔn)確的非創(chuàng)傷性診斷方法，但需要特殊的儀器、設(shè)備、時(shí)間，基層單位不宜推廣，也不利于樣本量大的人群調(diào)查。斐林試劑法測(cè)還原糖也是一種準(zhǔn)確的體外無(wú)創(chuàng)傷性診斷，但其反應(yīng)過(guò)程需要加熱，因此診斷過(guò)程需要較多的時(shí)間和相應(yīng)的設(shè)備。醋酸鉛法為目前臨床常用，但醋酸鉛存在一定的危險(xiǎn)性，并且操作過(guò)程需要加熱，反應(yīng)過(guò)程相對(duì)復(fù)雜。本項(xiàng)目采用干化學(xué)法測(cè)定糞便中的乳糖，整個(gè)反應(yīng)在常溫下進(jìn)行，可以不需要任何設(shè)備，就能快速的定性診斷。

目前干化學(xué)法檢測(cè)乳糖不耐受癥已公開(kāi)的技術(shù)專利200610056826.5，其通過(guò)檢測(cè)尿液中的半乳糖來(lái)判斷乳糖不耐受癥的依據(jù)，上述專利的局限性在于：1)其檢測(cè)人尿液中的半乳糖，需要增加尿液純化裝置，增加了檢測(cè)的步驟及成本；2)將半乳糖氧化酶墊、過(guò)氧化物酶墊、顯色劑墊分別制作后疊加在一起，加樣后通過(guò)各試紙的正向?qū)游鲎饔梅磻?yīng)，顯示的方式不夠直觀。3)上述技術(shù)無(wú)法對(duì)糞便等其它樣品中是否含有乳糖進(jìn)行檢測(cè)，有著檢測(cè)樣品的局限性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明提供一種制備簡(jiǎn)單，使用方便，直接檢測(cè)乳糖的試紙及該試紙的制備方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明技術(shù)方案為：

一種檢測(cè)樣本中乳糖含量的試紙，包括：底板，乳糖酶吸附試紙，顯色試紙，吸水紙；其中，乳糖酶吸附試紙，顯色試紙，吸水紙以尾端疊加的方式貼附在底板上固定。

進(jìn)一步，乳糖酶吸附試紙與顯色試紙疊加位置處通過(guò)膠帶固定。

進(jìn)一步，所述的乳糖酶吸附試紙，顯色試紙，吸水紙尾端疊加的長(zhǎng)度為2-3毫米。

進(jìn)一步，所述的底板為PVC底板。

一種制備檢測(cè)樣本中乳糖含量試紙的方法，包括如下步驟：

第1步：將乳糖酶溶液滴加到濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干，形成乳糖酶吸附試紙；

第2步，將烘干好的乳糖酶吸附試紙裁剪成適當(dāng)寬度的紙條，粘在底板上的乳糖酶吸附試紙位置；

第3步，另外取一片濾紙，將TMB溶液滴加到該濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干；

第4步，將辣根過(guò)氧化物酶和半乳糖氧化酶的溶液滴加到第3步烘干后的濾紙上至飽和狀態(tài)，在烘箱中烘干，形成顯色試紙；

第5步，將第4步烘干的顯色試紙裁剪成適合寬度的紙條，粘在底板上的顯色試紙位置，顯色試紙的頭部與乳糖酶吸附試紙的尾部有適當(dāng)寬度的疊加段；

第6步，將吸水紙裁剪成適合寬度的紙條，粘在底板上的吸水紙位置，吸水紙的頭部與顯色試紙的尾部有適當(dāng)寬度的疊加段；

第7步，將粘有乳糖酶吸附試紙、顯色試紙、吸水紙的底板，用裁刀裁成適合寬度的試紙，即制成檢測(cè)乳糖含量的試紙條。

進(jìn)一步，乳糖酶吸附試紙與顯色試紙之間、顯色試紙與吸水紙之間各有2-3毫米重疊，乳糖酶吸附試紙與顯色試紙表面用膠帶覆蓋保證兩者之間連接牢固。

進(jìn)一步，所述的底板為PVC底板。

進(jìn)一步，所述第1步，乳糖酶吸附試紙的制備方法為，將乳糖酶配制成乳糖酶溶液，將配置好的乳糖酶溶液滴加到濾紙上直至飽和；然后將飽和濾紙放入烘箱烘干成為乳糖酶試紙；所述乳糖酶溶液內(nèi)含有磷酸鹽緩沖液、疊氮鈉、乳糖酶、牛血清白蛋白，其成分比例為：0.02N pH7.5的磷酸鹽緩沖液，每升含1克的疊氮鈉、12000國(guó)際單位的乳糖酶、4.5g的牛血清白蛋白。

進(jìn)一步，所述第3步、第4步，顯色試紙的制備方法為，先將TMB溶液滴加到該濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干；再將辣根過(guò)氧化物酶和半乳糖氧化酶的溶液滴加到第3步烘干后的濾紙到飽和狀態(tài)，在烘箱中烘干，最后形成顯色試紙；所述第4步的顯色試紙?zhí)幚砣芤簝?nèi)含有磷酸鹽緩沖液、疊氮鈉、辣根過(guò)氧化物酶、半乳糖氧化酶、牛血清白蛋白，其成分比例為：0.02N pH7.5的磷酸鹽緩沖液溶液，每升含1克的疊氮鈉、20000國(guó)際單位的辣根過(guò)氧化物酶、12000國(guó)際單位的半乳糖氧化酶、4.5g的牛血清白蛋白。

進(jìn)一步，所述第3、5、6步，分別將乳糖酶試紙、顯色試紙、吸水紙裁剪成適合寬度粘貼在PVC板上，乳糖酶試紙和顯色試紙有2-3毫米重疊，重疊部位再用膠帶粘接，制成乳糖檢測(cè)試紙。

采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明的試紙可檢測(cè)樣本中是否存在乳糖。由于使用了酶促反應(yīng)，反應(yīng)迅速，靈敏度高，采用試紙方法，可一次加樣完成檢測(cè)，通過(guò)顏色變化來(lái)判斷結(jié)果，簡(jiǎn)單易用。制備工藝簡(jiǎn)單，成本較底，易于推廣，可用于快速檢測(cè)樣本中是否含有乳糖。

附圖說(shuō)明：

圖1為本發(fā)明實(shí)施例的分解示意圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例的組合示意圖。

具體實(shí)施方式：

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明/發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。

如圖1-2所示為本發(fā)明實(shí)施例，一種檢測(cè)樣本中乳糖含量的試紙，包括：底板1，乳糖酶吸附試紙2，顯色試紙3，吸水紙4；其中，乳糖酶吸附試紙1，顯色試2紙，吸水紙3以尾端疊加的方式貼附在底板1上固定。疊加的長(zhǎng)度一般為2-3毫米，也可為其它的疊加長(zhǎng)度，只要保證能將標(biāo)本樣品順利側(cè)向?qū)游黾纯?。底?可為PVC底板或其它適合的底板均可。乳糖酶吸附試紙2與顯色試紙3疊加位置處通過(guò)膠帶5固定，以保證標(biāo)本樣品能順利的從乳糖酶吸附試紙側(cè)向?qū)游龅斤@色試紙上。

上述制備檢測(cè)樣本中乳糖含量試紙的方法，包括如下步驟：

第1步，將乳糖酶溶液滴加到濾紙1上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干，形成乳糖酶吸附試紙。

第2步，將烘干好的乳糖酶吸附試紙裁剪成適當(dāng)寬度的紙條，粘在PVC底板上的乳糖酶吸附試紙位置。如圖1所示。

第3步，另外拿一片濾紙，將TMB(四甲基聯(lián)苯胺)溶液滴加到該濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干。

第4步，將辣根過(guò)氧化物酶和半乳糖氧化酶的溶液滴加到步驟3烘干后的濾紙到飽和狀態(tài)，在烘箱中烘干，最后形成顯色試紙。

第5步，將步驟4烘干的顯色試紙3裁剪成適合寬度的紙條，粘在PVC底板6上的顯色試紙位置。如圖1所示。

第6步、將吸水紙裁剪成適合寬度的紙條，粘在PVC底板上的吸水紙位置。如圖1所示。

第7步、將粘有乳糖酶吸附試紙、顯色試紙、吸水紙的PVC底板，用裁刀裁成適合寬度的試紙，即制成檢測(cè)乳糖含量的試紙條。其中，乳糖酶吸附試紙、顯色試紙之間；顯色試紙、吸水紙之間各有2～3毫米重疊，乳糖酶吸附試紙、顯色試紙之間表面用膠帶覆蓋，保證兩者之間連接牢固。

如上所述第1步，乳糖酶吸附試紙的制備方法為，將乳糖酶配制成乳糖酶溶液，將配置好的乳糖酶溶液滴加到濾紙上直至飽和；然后將飽和濾紙放入烘箱烘干成為乳糖酶試紙。

所述第1步的乳糖酶吸附試紙?zhí)幚砣芤簝?nèi)含有磷酸鹽緩沖液、疊氮鈉、乳糖酶、牛血清白蛋白，其成分比例為：0.02N pH7.5的PB(磷酸鹽緩沖液)溶液，每升含1克的疊氮鈉、12000國(guó)際單位的乳糖酶、4.5g的牛血清白蛋白。

如上所述第3步、第4步，顯色試紙的制備方法為，先將TMB溶液滴加到該濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中烘干。再將辣根過(guò)氧化物酶和半乳糖氧化酶的溶液滴加到步驟3烘干后的濾紙到飽和狀態(tài)，在烘箱中烘干，最后形成顯色試紙。

所述第4步的顯色試紙?zhí)幚砣芤簝?nèi)含有磷酸鹽緩沖液、疊氮鈉、辣根過(guò)氧化物酶、半乳糖氧化酶、牛血清白蛋白，其成分比例為：0.02N pH7.5的PB溶液，每升含1克的疊氮鈉、20000國(guó)際單位的辣根過(guò)氧化物酶、12000國(guó)際單位的半乳糖氧化酶、4.5g的牛血清白蛋白。

如上所述第3、5、6步，分別將乳糖酶試紙、顯色試紙、吸水紙裁剪成適合寬度粘貼在PVC板上，乳糖酶試紙和顯色試紙有2～3毫米重疊，重疊部位再用膠帶粘接，制成乳糖檢測(cè)試紙。

如上所述，制成后的乳糖檢測(cè)試紙，一次加樣即可完成將乳糖分解成半乳糖和葡萄糖、再將半乳糖分解成過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫改變顯色試紙的PH值，顯色試紙顏色由淡黃變成藍(lán)色的整個(gè)過(guò)程。

進(jìn)一步，本發(fā)明提供一種具體的實(shí)施例以進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，制程試紙：

1、將乳糖酶溶液滴加到濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中45℃烘干1h，形成乳糖酶吸附試紙。烘箱溫度及烘干時(shí)間可依據(jù)產(chǎn)品數(shù)量進(jìn)行調(diào)整，直至產(chǎn)品干燥。

2、將烘干好的乳糖酶吸附試紙裁剪成寬1.6cm的紙條，粘在PVC底板上的乳糖酶吸附試紙位置。

3、另外拿一片濾紙，將1mg/ml的TMB溶液滴加到該濾紙上直到飽和狀態(tài)，然后在烘箱中45℃烘干1h。烘箱溫度及烘干時(shí)間可依據(jù)產(chǎn)品數(shù)量進(jìn)行調(diào)整，直至產(chǎn)品干燥。

4、將辣根過(guò)氧化物酶和半乳糖氧化酶的溶液滴加到步驟3烘干后的濾紙到飽和狀態(tài)，在烘箱中45℃烘干1h。烘箱溫度及烘干時(shí)間可依據(jù)產(chǎn)品數(shù)量進(jìn)行調(diào)整，直至產(chǎn)品干燥。

5、將步驟4烘干的顯色試紙裁剪成寬2.5cm的紙條，粘在PVC底板上的顯色試紙位置。

6、將吸水紙裁剪成寬2cm的紙條，粘在PVC底板上的吸水紙位置。

7、將粘有乳糖酶吸附試紙、顯色試紙、吸水紙的PVC底板，用裁刀裁成寬4.3mm的試紙條，完畢。

上述試紙?jiān)谑褂脮r(shí)：

1、標(biāo)本處理及加樣：糞便用不含乳糖、半乳糖的純水按適當(dāng)比例稀釋，配置成樣本溶液，滴加100微升配制好的樣本溶液到乳糖檢測(cè)試紙條的乳糖酶吸附試紙上。

2、分解乳糖：如樣本中存在乳糖，在乳糖酶的作用下分解成半乳糖和葡萄糖。該過(guò)程在乳糖吸附試紙1上完成。

3、顯色：分解后的半乳糖和樣本液體，被干燥的濾紙吸引到顯色試紙3上。在顯色試紙的半乳糖酶作用下，半乳糖分解成過(guò)氧化氫，顯色試紙顏色由淡黃變成藍(lán)色。該過(guò)程在顯色試紙上完成。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其區(qū)別在于：1、本發(fā)明試紙通過(guò)檢測(cè)糞便中是否含有乳糖來(lái)判斷，有別于現(xiàn)有技術(shù)通過(guò)檢測(cè)尿液中的半乳糖來(lái)判斷。2、檢測(cè)的物質(zhì)不同，本發(fā)明試紙檢測(cè)人糞便標(biāo)本中的乳糖；而已公開(kāi)的技術(shù)檢測(cè)人尿液中的半乳糖；3、檢測(cè)的樣本不同，本發(fā)明試紙檢測(cè)樣本為糞便，已公開(kāi)的技術(shù)檢測(cè)樣本是尿液。4、樣本前處理不同，本發(fā)明試紙只需將糞便標(biāo)本稀釋(因糞便為固體)；而已公開(kāi)的技術(shù)需要增加尿液純化裝置；5、試紙結(jié)構(gòu)不同，本發(fā)明試紙條為三部分試紙組成，分別為乳糖酶吸附試紙、顯色試紙、吸水紙，液體通過(guò)側(cè)向?qū)游鲎饔茫扇樘敲肝皆嚰垖⑷樘欠纸夂笠葡蝻@色試紙，顯色反應(yīng)后，多余的液體被吸水紙吸收；而已公開(kāi)的技術(shù)是將半乳糖氧化酶墊、過(guò)氧化物酶墊、顯色劑墊分別制作后疊加在一起，加樣后通過(guò)各試紙的正向?qū)游鲎饔梅磻?yīng)。6、試紙制作工藝不同，本發(fā)明試紙將半乳糖氧化酶、過(guò)氧化物酶、顯色劑干燥吸附在同一張?jiān)嚰埳?，乳糖酶吸附在另一濾紙上；而已公開(kāi)的技術(shù)是分別將半乳糖氧化酶、過(guò)氧化物酶、顯色劑物質(zhì)吸附在3個(gè)試紙上。7、本發(fā)明技術(shù)含有乳糖酶分解乳糖，已公開(kāi)的技術(shù)不含乳糖酶。8、顯色劑不同，本發(fā)明試紙顯色劑是TMB，而已公開(kāi)的顯色劑為4-氨基安替比林和3，5二氯二羥基苯磺酸。9、本發(fā)明的試紙干燥工藝不同。

綜上所述，本方法具有制備簡(jiǎn)單，使用方便，直接檢測(cè)乳糖等特點(diǎn)，具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

上述說(shuō)明示出并描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施實(shí)例，如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過(guò)上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。