本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物有效成分的提取及檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種庫爾勒香梨果實(shí)石細(xì)胞中磨木木質(zhì)素提取的方法。

背景技術(shù)：

木質(zhì)素（lignin）的基本結(jié)構(gòu)單元為苯基丙烷，以醚鍵和碳碳鍵相聯(lián)結(jié)，在木質(zhì)素骨架中的側(cè)鏈上有各種不同的化學(xué)官能團(tuán)。這些單元結(jié)構(gòu)間鍵型組成的變化和化學(xué)官能團(tuán)差異都可能對木質(zhì)素的力學(xué)性質(zhì)和化學(xué)結(jié)構(gòu)變化產(chǎn)生影響。木質(zhì)素單體主要有三種：香豆醇，松柏醇和芥子醇，分別聚合成三種木質(zhì)素；對羥基苯基木質(zhì)素（p-Hydroxyphenyl lignin,H-木質(zhì)素）、愈創(chuàng)木基木質(zhì)素（Guaiacyl lignin,G-木質(zhì)素）、紫丁香基木質(zhì)素（Syringyl lignin,S-木質(zhì)素）。石細(xì)胞是梨果實(shí)組織的主要構(gòu)成，梨果實(shí)中石細(xì)胞含量與木質(zhì)素含量呈正相關(guān)，精確測定木質(zhì)素含量反應(yīng)梨果實(shí)品質(zhì)有重要意義。磨木木質(zhì)素（Milled Wood Lignin , MWL）被認(rèn)為是的木質(zhì)素最穩(wěn)定試樣，因此是結(jié)構(gòu)分析中用得最多的木質(zhì)素樣品。木質(zhì)素的提取純化方法，依據(jù)其溶解性可以分為兩類：一種是將木質(zhì)素以外的成分進(jìn)行降解，木質(zhì)素作為不溶物質(zhì)而沉淀下來；另一種分離方法是利用有機(jī)溶劑將木質(zhì)素進(jìn)行溶解，從而木質(zhì)素與纖維素等物質(zhì)的分離，得到木質(zhì)素。（蘇同福，木質(zhì)素的測定方法研究進(jìn)展，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007,41（3）：356-362）。在試驗(yàn)操作中通常會(huì)綜合兩類方法運(yùn)用。主要方法有：堿法、超濾法、堿析法、酸沉淀法、絮凝沉淀法、高沸醇溶劑法、二氧六環(huán)溶劑法等。從植物體中分離提取木質(zhì)素是利用二氧六環(huán)法，利用二氧六環(huán)溶劑可溶解木質(zhì)素的特性，經(jīng)過苯醇或者丙酮和水抽提的材料粉末溶于二氧六環(huán)-水的混合溶劑，MWL溶解于二氧六環(huán)中，從而得到粗制MWL。粗制MWL再經(jīng)過吡啶/冰醋酸/水混合液溶解后，利用三氯甲烷對其進(jìn)行萃取，然后用乙醚使其沉淀，從而得到精制純化的木質(zhì)素。

木質(zhì)素的分子結(jié)構(gòu)中存在著多種活性基團(tuán)，所以木質(zhì)素的制備要求極其溫和的環(huán)境。降解木質(zhì)素常用方法有三種：高錳酸鉀降解、硝基苯和氧化銅氧化，Sun以麥草為試材，研究了硝基苯和氧化銅氧化降解方法的差別，發(fā)現(xiàn)這兩者的主要區(qū)別只在于硝基苯氧化產(chǎn)物的量是氧化銅氧化產(chǎn)物的兩倍，同時(shí)這種方法比高錳酸鉀氧化更簡單，使用這種方法主要是為了按照三種苯丙烷結(jié)構(gòu)(愈創(chuàng)木基丙烷，紫丁香基丙烷和對羥基苯丙烷)單元的比例對木質(zhì)素進(jìn)行分類，用這種方法可鑒定不同植物來源和植物中不同形態(tài)部位的木質(zhì)素。

研究木質(zhì)素結(jié)構(gòu)以用紅外光譜，紫外光譜、核磁共振譜和高效液相色譜等分析手段進(jìn)行檢測。本發(fā)明采用高效液相色譜檢測MWL硝基苯氧化產(chǎn)物，進(jìn)行定性定量。本發(fā)明使用有機(jī)試劑用量較少，用量明確，用時(shí)較短，操作簡單提取率高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種庫爾勒香梨果實(shí)石細(xì)胞中磨木木質(zhì)素提取的方法，其可以高效的提取香梨果實(shí)石細(xì)胞中磨木木質(zhì)素。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種庫爾勒香梨果實(shí)石細(xì)胞中磨木木質(zhì)素提取的方法，其包括如下操作步驟：

步驟一、預(yù)處理：將香梨果實(shí)去皮去心室后，手工使用刀片取香梨果實(shí)胴部果肉；將果肉切成約1.0 cm³塊，裝于保鮮袋中在-20℃冰柜中冷凍12 h；

步驟二、除汁：樣品解凍后，使用攪拌機(jī)（HR1724，PHILIPS濾網(wǎng)200目）去除大量果汁后，加入400ml蒸餾水于果渣（主要是石細(xì)胞）中，繼續(xù)傾倒洗液，重復(fù)4次，最后將果渣倒出；濾除果汁，濾網(wǎng)(孔徑74 μm，200目)保留攪拌破碎的果渣組織；

步驟三、分離：使用均質(zhì)機(jī)（T10，IKA，轉(zhuǎn)速20000~30000 rap/min、破碎率80%、懸浮顆粒直徑5~10 μm）勻漿3~5 min，使石細(xì)胞充分與果肉分離。將勻漿液3000 rap/min離心8~12 min，沉淀物主要是石細(xì)胞；

步驟四、干燥：將石細(xì)胞從離心杯中取出，置烘箱中60～65℃烘至恒重，取出放置到干燥器中冷卻至室溫。收集石細(xì)胞，稱量，精確到1 mg；

步驟五、粗木質(zhì)素提?。喝∫欢渴?xì)胞機(jī)器研磨過200目篩；取10 g石細(xì)胞粉末使用苯-乙醇(2:1，V/V)浸提12 h，料液比為1:10；將浸提液用抽濾裝置過濾分離，取濾渣在靜置狀態(tài)下用二氧六環(huán)-水浸提，25~45℃，料液比1:8~14，提取36~72 h，濾出抽提液。將上述抽提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40~45℃條件下濃縮，真空壓為0.075 MPa~0.085 MPa得粗制木質(zhì)素；

步驟六、磨木木質(zhì)素提純：將粗制木質(zhì)素溶解于吡啶-冰醋酸-水(9:1:4，V/V)混合溶液中；溶解后加入15倍體積三氯甲烷靜置萃取，分離出三氯甲烷層（下層為三氯甲烷層）；并在40~45℃條件下真空干燥濃縮到原來體積的1/10，儀器工作參數(shù)為：30~35 min，轉(zhuǎn)速40 rap/min,溫度35~40℃，真空壓為0.080~0.085 MPa；濃縮后的溶液中加入5倍體積乙醚，3000 rap/min，10~15 min離心分離出白色沉淀，移至常溫培養(yǎng)皿中逐漸變?yōu)樽攸S色膠狀物；使用烘箱烘干沉淀物。稱重精確到1.0 mg。最終獲得棕黃色粉狀物為MWL，保存?zhèn)溆谩?/p>

進(jìn)一步地，所述步驟一中選取材料為香梨果肉中石細(xì)胞。

進(jìn)一步地，所述步驟五中1,4-二氧六環(huán)與水的體積比例為7:3；

進(jìn)一步地，所述步驟五中1,4-二氧六環(huán)與水浸提時(shí)間為48 h；

進(jìn)一步地，所述步驟五中1,4-二氧六環(huán)與水浸提溫度為35℃；

進(jìn)一步地，所述步驟五中1,4-二氧六環(huán)與水浸提中料液比為1:12。

檢測磨木木質(zhì)素堿性硝基苯氧化產(chǎn)物的方法，其包括如下操作步驟：

步驟一、MWL堿性硝基苯氧化降解反應(yīng)：稱取MWL 30 mg，加入硝基苯60~800 μL，2 mol/L NaOH溶液7 mL，充分溶解后，185℃油浴5 h，升溫時(shí)間為15~20 min；待反應(yīng)物冷卻至60℃左右，滴加1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)至pH=4~5；用15倍體積三氯甲烷萃取三次，收集三氯甲烷層（下層）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮15 min，轉(zhuǎn)速30~40 rap/min，溫度35~40℃，真空壓為0.070~0.075 MPa，用甲醇溶解備用，甲醇為色譜級；

步驟二、MWL堿性硝基苯氧化產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別精確稱取6.0 mg對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、對羥基苯甲醛、香草醛和丁香醛，用色譜級甲醇溶解然后分別配制成濃度為0.6 mg/mL、0.45 mg/mL、0.30 mg/mL、0.18 mg/mL、0.09 mg/mL、0.06 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，高效液相色譜儀分析檢測，將色譜圖積分，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)濃度為縱坐標(biāo)，濃度的單位為mg/mL，峰面積為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

步驟三、樣品中堿性硝基苯氧化產(chǎn)物的測定：將步驟（1）的提取液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，高效液相色譜儀檢測，將色譜圖積分，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得樣品中堿性硝基苯氧化產(chǎn)物的含量。

進(jìn)一步地，所述步驟二中硝基苯用量為240 μL。

進(jìn)一步地，所述步驟三中按照如下色譜條件進(jìn)行測定：Agilent Poroshell 120 EC-C18柱(粒徑為2.7 μm，由1.7 μm直徑的實(shí)心核和0.5 μm厚的多孔外層構(gòu)成)，250 mm× 4.6 mm，孔徑4.0 μm，保護(hù)柱：AgilentEC-C18（4.6×5 mm,4.0 μm）；流動(dòng)相：乙腈：水=12：88(V/V)，含1%醋酸；進(jìn)樣量：10 μl;流速：0.5 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長:280 nm，254 nm，紫外檢測器。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較，其有益的技術(shù)效果在于：本發(fā)明對現(xiàn)有的MWL提取及其堿性硝基苯氧化產(chǎn)物的檢測方法進(jìn)行了改進(jìn)，明確了MWL的提取率，香梨果肉中MWL提取率為6‰；使用安捷倫1260型高效液相色譜儀檢測，提高了主要六種物質(zhì)的檢測精度；資源綜合利用率高，明確了MWL提取工藝參數(shù)。在1,4-二氧六環(huán)與水的體積比例為7:3，料液比為1：12，提取時(shí)間為48 h，提取溫度為35℃時(shí)提取率最高；在本發(fā)明色譜條件下分析MWL硝基苯氧化產(chǎn)物，與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間對比，得出一致色譜圖。通過計(jì)算分離度R>>1.5雜質(zhì)無干擾，且方法可行性高；在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)，各類線性關(guān)系好，決定系數(shù)均達(dá)0.999以上，相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）分別為1.239%，1.428%，1.937%，1.657%，1.677%，1.461%，回收率分別為0.957%，1.046%，1.011%，1.015%，1.279%，0.854%。精密度較高，結(jié)果準(zhǔn)確，且方法可行性高。

附圖說明

本發(fā)明的具體結(jié)構(gòu)由以下的附圖和實(shí)施例給出：

圖1是對羥基苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖2 是香草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖3是丁香酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖4是對羥基苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖5是香草醛標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖6是丁香醛標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖7是溶液比對MWL提取率的影響；

圖8是料液比對MWL提取率的影響；

圖9是提取溫度對MWL提取率的影響；

圖10是提取時(shí)間對MWL提取率的影響；

圖11是硝基苯用量對MWL硝基苯氧化產(chǎn)物的影響；

圖12是對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸標(biāo)準(zhǔn)品254nm HPLC色譜圖；

圖13是香梨果肉石細(xì)胞中MWL硝基苯氧化產(chǎn)物254nm HPLC色譜圖；

圖14是對羥基苯甲醛、香草醛和丁香醛標(biāo)準(zhǔn)品280nm HPLC色譜圖；

圖15是香梨果肉石細(xì)胞中MWL堿性硝基苯氧化產(chǎn)物280nm HPLC色譜圖；

圖16是本申請的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。

1、原料與藥品：

庫爾勒香梨，購于烏市北園春市場；超純水（18.25MΩ·cm），AKHL-Ⅲ-24A 艾柯實(shí)驗(yàn)室超純水儀制備；對羥基苯甲酸(4-Hydrxybenzoic acid，CAS 99-96-7)、香草酸（Vanillic acid ,CAS 121-34-6）、丁香酸（Syringic acid，CAS 530-57-4）、對羥基苯甲醛（4-Hydrxybenzaldehyde，CAS 123-08-0）、香草醛（Vanillin ,CAS 121-33-5）、丁香醛（Syringaldehyde，CAS 134-96-3），sigma公司；1,4-二氧六環(huán)（CAS，123-91-1），硝基苯（CAS，98-95-3），無水乙醇（CAS，64-17-5），吡啶（CAS，110-86-1），苯（CAS，71-43-2），乙醚（CAS，60-29-7），冰乙酸（CAS，64-19-7），三氯甲烷（CAS，67-66-3），氫氧化鈉（CAS，1310-73-2），鹽酸（CAS，7647-01-0），二甲基硅油（CAS，9006-65-9），以上皆為分析純；甲醇（CAS，67-56-1），乙腈（CAS，75-05-8），色譜純，sigma公司。

2.儀器與設(shè)備：

高效液相色譜儀：Agilent 1260，包括在線脫氣機(jī)，四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，紫外檢測器，色譜工作站：色譜柱Agilent Poroshell 120 EC-C18柱（250 mm×4.6 mm，4.0 μm），保護(hù)柱AgilentEC-C18（4.6×5 mm,4.0 μm）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE1100-Pro，Scilogex)、恒溫電熱油浴鍋(DF-101S,金壇市醫(yī)療儀器廠)、磁力攪拌機(jī)（RCT basic,IKA）、超聲波清洗機(jī)(SK7200H,上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)、研磨粉碎機(jī)(A11 basic，IKA)、均質(zhì)機(jī)（T10，IKA）、萬分之一電子分析天平(ML204,Mettler Tdedo)、離心機(jī)(LXT-ⅡB,上海安亭科學(xué)儀器廠)、干燥箱（DZF-6050，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、攪拌機(jī)（HR1724，PHILIPS）、循環(huán)水式多用真空泵（SHB-Ⅲ，鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、純水儀（AKHL-Ⅲ-24A，艾柯實(shí)驗(yàn)室超純水儀）

實(shí)施例1：(1)MWL的提?。?/p>

a)預(yù)處理：將香梨果實(shí)去皮去心室后，手工使用刀片取香梨果實(shí)胴部果肉；將果肉切成約1.0cm³塊，裝于保鮮袋中在-20℃冰柜中冷凍12h；樣品解凍后，使用攪拌機(jī)（HR1724，PHILIPS濾網(wǎng)200目）去除大量果汁后，加入400ml蒸餾水于果渣（主要是石細(xì)胞）中，繼續(xù)傾倒洗液，重復(fù)4次，最后將果渣倒出；濾除果汁，濾網(wǎng)(孔徑74 μm，200目)保留攪拌破碎的果渣組織。使用均質(zhì)機(jī)（T10，IKA，轉(zhuǎn)速8000~30000 rap/min、破碎率80%、懸浮顆粒直徑5~10μm）勻漿3~5 min，使石細(xì)胞充分與果肉分離。將勻漿液3000 rap/min離心8~12 min，沉淀物主要是石細(xì)胞。將石細(xì)胞從離心杯中取出，置烘箱中60～65℃烘至恒重，取出放置到干燥器中冷卻至室溫。收集石細(xì)胞，稱量，精確到1 mg。

（b）粗木質(zhì)素提?。喝∫欢渴?xì)胞機(jī)器研磨過200目篩；取10 g石細(xì)胞粉末用苯-乙醇(2:1，V/V)提取12 h；料液比為1:10；將浸提液用抽濾裝置分離，濾渣在靜置狀態(tài)下用二氧六環(huán)-水提取；按照表1，2優(yōu)化提取工藝參數(shù)。

表1單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表2 L₉3⁴正交實(shí)驗(yàn)因子設(shè)計(jì)

濾出抽提液。將上述抽提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40~45℃條件下濃縮，真空壓為0.075 MPa~0.085 MPa得粗制木質(zhì)素。

磨木木質(zhì)素提純：將粗制木質(zhì)素溶解于吡啶-冰醋酸-水(9:1:4，V/V)混合溶液中；溶解后加入15倍體積三氯甲烷靜置萃取，分離出三氯甲烷層（下層為三氯甲烷層）；并在40~45℃條件下真空干燥濃縮到原來體積的1/10，儀器工作參數(shù)為：30~35 min，轉(zhuǎn)速40 rap/min,溫度35~40℃，真空壓為0.080~0.085 MPa；濃縮后的溶液中加入5倍體積乙醚，3000 rap/min，10~15 min離心分離出白色沉淀，移至常溫培養(yǎng)皿中逐漸變?yōu)樽攸S色膠狀物；使用烘箱烘干沉淀物。稱重精確到1.0 mg。最終獲得棕黃色粉狀物為MWL，保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例2：（1）堿性硝基苯氧化實(shí)驗(yàn)

MWL堿性硝基苯氧化降解反應(yīng)：稱取MWL30 mg，加入硝基苯，按照表3優(yōu)化MWL堿性硝基苯氧化工藝參數(shù)。

表3 MWL堿性硝基苯氧化試驗(yàn)硝基苯用量篩選試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2 mol/L NaOH溶液7 mL，充分溶解后，185℃油浴5 h，升溫時(shí)間為15~20 min；待反應(yīng)物冷卻至60℃左右，滴加1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)至pH=4~5；用15倍體積三氯甲烷萃取三次，收集三氯甲烷層（下層）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮15 min，轉(zhuǎn)速30~40 rap/min，溫度35~40℃，真空壓為0.070~0.075 MPa，用甲醇溶解備用，甲醇為色譜級。

（2）高效液相色譜測定

（a）MWL堿性硝基苯氧化產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精確稱取6.0 mg對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、對羥基苯甲醛、香草醛和丁香醛，用色譜級甲醇溶解然后分別配制成濃度為0.60 mg/mL、0.45 mg/mL、0.3 mg/mL、0.18 mg/mL、0.09 mg/mL、0.06 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液，進(jìn)樣量為10μL,高效液相色譜儀分析檢測，將色譜圖積分，記錄峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)濃度為縱坐標(biāo)，濃度的單位為mg/mL，峰面積為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

如圖1，2，3，4，5，6；

由上圖1得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=5E-10x+0.0052 相關(guān)系數(shù)0.9996；

圖2得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=9E-10x+0.0133 相關(guān)系數(shù)0.9993；

圖3得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=2E-09x+0.0097 相關(guān)系數(shù)0.9992；

圖4得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=4E-10x+0.0111 相關(guān)系數(shù)0.9992；

圖5得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=7E-10x+0.0088 相關(guān)系數(shù)0.9991；

圖6得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=1E-09x-0.0008 相關(guān)系數(shù)0.9993；

表明對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、對羥基苯甲醛、香草醛和丁香醛在0.06 mg/mL~0.6 mg/mL濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積與樣品量成線性關(guān)系。

本試驗(yàn)采用樣品加標(biāo)回收，稱取相同質(zhì)量的兩份樣品，分別稱取30.0mg MWL堿性硝基苯氧化，在其中一份分別加入0.3 mg六種標(biāo)準(zhǔn)品，按照本發(fā)明處理方法處理兩份相同的樣品，測定其含量。

結(jié)果為加標(biāo)樣品濃度分別為：0.289 mg/ml, 0.307 mg/ml, 0.334 mg/ml, 0.305 mg/ml, 0.409 mg/ml, 0.251 mg/ml；未加標(biāo)樣品分別為：0.013 mg/ml, 0.013 mg/ml, 0.026 mg/ml, 0.005 mg/ml, 0.089 mg/ml, 0.043 mg/ml。使用以下公式對加標(biāo)回收率進(jìn)行計(jì)算：加標(biāo)回收率=（加標(biāo)試樣測定值-試樣測定值）÷加標(biāo)量×100%；加標(biāo)回收率為：0.957%，1.046%，1.011%，1.015%，1.279%，0.854%。

（b）MWL堿性硝基苯氧化產(chǎn)物測定液相條件

將步驟（1）的提取液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾進(jìn)行量為10 μL，高效液相色譜儀檢測，將色譜圖積分，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算，即得樣品中堿性硝基苯氧化產(chǎn)物的含量。色譜條件進(jìn)行測定：安捷倫1260高效液相色譜儀（1260 Infinity，Agilent），Agilent Poroshell 120 EC-C18柱（粒徑2.7 μm），250 mm× 4.6 mm，孔徑4 μm；流動(dòng)相為乙腈：水=12:88(V/V)，含1%醋酸，流動(dòng)相經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，超聲脫氣30 min；進(jìn)樣量：10 μL；流速：0.5 ml/min；柱溫：30℃；檢測波長:280 nm，254 nm，紫外檢測器。

由上述實(shí)施例1得出如圖7-10的結(jié)果：采用有機(jī)溶劑提取法提取香梨果肉石細(xì)胞中MWL，通過單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)和驗(yàn)證試驗(yàn)最終確定提取條件：提取時(shí)間48 h，提取溫度35℃，料液比為7:3，溶液比為1:12。在此提取條件下，測得香梨果肉中石細(xì)胞MWL提取率為6‰左右。

由上述實(shí)施例2如圖11-15所示：硝基苯用量為240 μL時(shí)，MWL堿性硝基苯氧化產(chǎn)物（主要六種）對羥基苯甲酸、香草酸、丁香酸、對羥基苯甲醛、香草醛和丁香醛含量較高，依次為0.007 mg/mL、0.192 mg/mL、0.248 mg/mL、0.015 mg/mL、0.244 mg/mL、0.198 mg/mL。

上述說明僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實(shí)施方式的限定。凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引申出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。