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一種同時(shí)檢測Cu2+、Mg2+和Pb2+三種離子的熒光生物探針及其檢測方法與流程

文檔序號(hào):12590828閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種熒光生物探針,由三種核酸片段S1、S2和S3組成,其中S1、S2和S3的5’端分別標(biāo)記不同的熒光基團(tuán),S1的堿基序列為5’-TTCTCTCTrAGGACAAAACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’,S2的堿基序列為5’-ACTCACTATrAGGAAGAGATGGGTAAGCCTGGGCCTCTTTCTTTTTAAGAAAGAAC-3’,S3的堿基序列為5’-AGCTTCTTTCTAATACGGCTTACCTTTTGTCAGCGATCCGGAACGGCACCCATGTGAGAGAA-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物探針,三種核酸片段S1、S2和S3組成”Y”字形剛性雙鏈結(jié)構(gòu)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物探針,所述的熒光基團(tuán)選自FAM、Cy5和ROX。

4.一種熒光生物檢測系統(tǒng),其包括權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的熒光生物探針和氧化石墨烯。

5.根據(jù)權(quán)利要求4的熒光生物檢測系統(tǒng),其中所述的熒光生物探針為濃度50nmol/L的S1、S2和S3Tris-HCl緩沖溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求4的熒光生物檢測系統(tǒng),其中所述的氧化石墨烯為濃度60-100μg/mL的Tris-HCl緩沖溶液;優(yōu)選地,所述的氧化石墨烯為濃度80-100μg/mL的Tris-HCl緩沖溶液;進(jìn)一步優(yōu)選地,所述的氧化石墨烯為濃度100μg/mL的Tris-HCl緩沖溶液。

7.一種同時(shí)檢測Cu2+、Mg2+或Pb2+三種金屬離子濃度的生物檢測方法,所述方法包括如下步驟:

(1)室溫下,將待測品、熒光生物探針S1、S2和S3的Tris-HCl緩沖溶液混合均勻后,孵化時(shí)間T1,加入氧化石墨烯混合均勻后,孵化時(shí)間T2;

(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度,根據(jù)熒光強(qiáng)度-Cu2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Cu2+濃度值,根據(jù)熒光強(qiáng)度-Mg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Mg2+濃度值,根據(jù)熒光強(qiáng)度-Pb2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Pb2+濃度值。

8.根據(jù)權(quán)利要求7的生物檢測方法,所述方法包括如下步驟:

(1)室溫下,將一系列濃度的Cu2+、Mg2+和Pb2+溶液標(biāo)準(zhǔn)品、熒光生物探針S1、S2和S3的Tris-HCl緩沖溶液混合均勻,孵化時(shí)間T1,加入氧化石墨烯混合均勻后,孵化時(shí)間T2;

(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度,制備熒光強(qiáng)度-Cu2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線、熒光強(qiáng)度-Mg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光強(qiáng)度-Pb2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線;

(3)室溫下,取待測樣品,重復(fù)步驟(1);

(4)測定步驟(3)所得物的熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度,根據(jù)熒光強(qiáng)度-Cu2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線、熒光強(qiáng)度-Mg2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光強(qiáng)度-Pb2+濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Cu2+濃度、Mg2+濃度和Pb2+濃度。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的生物檢測方法,其中:

步驟(1)中的孵化時(shí)間T1為5-60min;優(yōu)選地,步驟(1)中的孵化時(shí)間T1為5-20min;進(jìn)一步優(yōu)選地,步驟(1)中的孵化時(shí)間T1為5-10min;

步驟(1)中所述的熒光生物探針為濃度50nmol/L的S1、S2和S3Tris-HCl緩沖溶液;

步驟(1)中所述的Tris-HCl緩沖溶液為50mmol/L,pH 7.5,含50mmol/L MgCl2

步驟(1)中所述的氧化石墨烯采用修飾的Hummer方法制備;

步驟(1)中所述的氧化石墨烯濃度為60-100ug/mL;優(yōu)選地,步驟(1)中所述的氧化石墨烯濃度為80-100ug/mL;優(yōu)選地,步驟(1)中所述的氧化石墨烯濃度為100ug/mL;

步驟(1)中的孵化時(shí)間T2為15-50min;優(yōu)選地,步驟(1)中的孵化時(shí)間T2為20-30min;進(jìn)一步優(yōu)選地,步驟(1)中的孵化時(shí)間T2為25min。

10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)所述的生物檢測方法,其中步驟(2)中的條件為FAM的激發(fā)波長設(shè)定為492nm,掃描范圍505-600nm,掃描步長為1nm;Cy5的激發(fā)波長設(shè)定為640nm,掃描范圍650-750nm,掃描步長為1nm;ROX的激發(fā)波長設(shè)定為580nm,掃描范圍590-700nm,掃描步長為1nm。

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