本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，更具體地涉及一種用hplc測(cè)定蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法。

背景技術(shù)：

蘇沃雷生(suvorexant)，化學(xué)名為5-氯-2-{(5r)-5-甲基-4-[5-甲基-2-(2h-1,2,3-三唑-2-基)苯甲?；鵠-1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基}-1,3-苯并惡唑，其結(jié)構(gòu)式如下：

默克公司研發(fā)的藥物蘇沃雷生(suvorexant)是一種食欲素受體拮抗劑，可影響食欲素通路的信號(hào)傳導(dǎo)。食欲素是一種小分子神經(jīng)多肽，與睡眠-覺(jué)醒周期的調(diào)控有關(guān)，蘇沃雷生可用于治療慢性失眠。

在現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)了suvorexant多種合成方法，其中wo2012148553公開(kāi)了一種制備suvorexant的合成路線，該合成路線如下：

由以上所述的合成路線可知蘇沃雷生是手性化合物。蘇沃雷生的手性異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)式如下：

其化學(xué)名為5-氯-2-{(5s)-5-甲基-4-[5-甲基-2-(2h-1,2,3-三唑-2-基)苯甲?；鵠-1,4-二氮雜環(huán)庚烷-1-基}-1,3-苯并惡唑。

為了控制藥品的質(zhì)量，保證用藥的安全需要開(kāi)發(fā)出一種有效檢測(cè)蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明概述

在現(xiàn)有技術(shù)中并沒(méi)有相關(guān)文獻(xiàn)公開(kāi)檢測(cè)蘇沃雷生手性異構(gòu)體的hplc檢測(cè)方法。因此，為了有效的控制合成蘇沃雷生中手性異構(gòu)體的純度，本發(fā)明提供一種能夠檢測(cè)蘇沃雷生其手性異構(gòu)體的hplc檢測(cè)方法。該方法具有高效、便捷、專(zhuān)屬性好和靈敏度高，能夠有效分離蘇沃雷生以及其手性異構(gòu)體。

本發(fā)明人通過(guò)多次實(shí)驗(yàn)嘗試，采用chiralpakia手性色譜柱(以5μm硅膠表面共價(jià)鍵合有直鏈淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)為填料)，以正己烷與低級(jí)醇的混合溶液作為流動(dòng)相在hplc系統(tǒng)中進(jìn)行等度洗脫并檢測(cè)手性異構(gòu)體，為了防止峰型拖尾，提高柱效，還可以在流動(dòng)相中加入適當(dāng)?shù)陌奉?lèi)溶劑，本發(fā)明可實(shí)現(xiàn)蘇沃雷生與手性異構(gòu)體的有效分離檢測(cè)。

術(shù)語(yǔ)定義

術(shù)語(yǔ)“峰純度”是指hplc檢測(cè)中，用于判斷某一色譜峰是否只是由一個(gè)物質(zhì)引起的一個(gè)考察參數(shù)，一般認(rèn)為峰純度在0.990～1.000之間即認(rèn)為所考察的某一色譜峰純凈，該色譜峰是某單一物質(zhì)的色譜峰。

術(shù)語(yǔ)“不對(duì)稱(chēng)因子”是指在hplc檢測(cè)中，用于考察峰形對(duì)稱(chēng)性的參數(shù)，體現(xiàn)色譜柱效能；在液相色譜法中，當(dāng)不對(duì)稱(chēng)因子在0.8～1.2之間認(rèn)為峰形較好。

術(shù)語(yǔ)“約”在本發(fā)明中是指在所述數(shù)值的±10％以?xún)?nèi)。

發(fā)明詳述

本發(fā)明提供一種用hplc測(cè)定蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法，所述方法的特征是采用chiralpakia手性色譜柱，以正己烷與低級(jí)醇的混合溶液作為流動(dòng)相在hplc系統(tǒng)中進(jìn)行等度洗脫。

更具體的是，本發(fā)明所提供一種用hplc測(cè)定蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法，所述方法的特征是：

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)，以5μm硅膠表面共價(jià)鍵合有直鏈淀粉－三(3,5 －二甲苯基氨基甲酸酯為填料；

流動(dòng)相：正己烷和低級(jí)醇的混合溶液，正己烷和低級(jí)醇的體積比為約80:20～90:10，并且含有胺類(lèi)溶劑，胺類(lèi)溶劑在流動(dòng)相溶液中的體積百分比為約0.1％～0.5％；

色譜柱柱溫：約30℃-40℃；

流速：約0.8ml/min-1.2ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

采用dad檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。

本發(fā)明所述的低級(jí)醇溶液可以是選自甲醇、乙醇或異丙醇中的一種或幾種。在一些實(shí)施例中，所述低級(jí)醇溶液是異丙醇。

本發(fā)明所述的胺類(lèi)溶劑可以是選自二乙胺、異丙胺、叔丁胺、二乙醇胺或三乙胺中的一種或幾種。在一些實(shí)施例中，所述胺類(lèi)溶劑是二乙胺。

在一些實(shí)施例中，本發(fā)明所述的一種用hplc測(cè)定蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法，其特征是：

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動(dòng)相是體積比為約85:15的正己烷和低級(jí)醇的混合溶液，并且含有胺類(lèi)溶劑，胺類(lèi)溶劑在流動(dòng)相溶液中的體積百分比為約0.2％；

色譜柱柱溫：約35℃；

流速：約1.0ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

采用dad檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。

本發(fā)明所述的一種用hplc測(cè)定蘇沃雷生手性異構(gòu)體的方法中，供試品溶液的配制方法是：稱(chēng)取待檢測(cè)樣品約20mg，精密稱(chēng)定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻得到樣品溶液。

附圖說(shuō)明

圖1示實(shí)施例1中供試品溶液的色譜圖。

圖2示實(shí)施例2中供試品溶液的色譜圖。

圖3示實(shí)施例3中供試品溶液的色譜圖。

具體實(shí)施方式

為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面進(jìn)一步披露一些非限制實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。

本發(fā)明所使用的試劑均可以從市場(chǎng)上購(gòu)得或者可以通過(guò)本發(fā)明所描述的方法制備而得。

本發(fā)明所使用的分析試劑及溶液符合中國(guó)藥典2010版附錄的要求，另有說(shuō)明的除外。

實(shí)施例1

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測(cè)器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動(dòng)相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.1％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱(chēng)取待檢測(cè)的樣品約20mg，精密稱(chēng)定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻得到供試品溶液。

按照中國(guó)藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖1，圖中suvorexant與其異構(gòu)體(enantiomer)之間的分離度為2.13。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對(duì)稱(chēng)性、保留時(shí)間和峰純度，結(jié)果如表1。

表1

實(shí)施例2

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測(cè)器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動(dòng)相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.2％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱(chēng)取待檢測(cè)樣品約20mg，精密稱(chēng)定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲 溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

按照中國(guó)藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖2，圖中suvorexant與其異構(gòu)體(enantiomer)之間的分離度為2.24。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對(duì)稱(chēng)性、保留時(shí)間和峰純度，結(jié)果如表2。

表2

實(shí)施例3

色譜條件：

儀器：agilent高效液相色譜儀；agilentdad檢測(cè)器；

手性色譜柱：chiralpakia(4.6×250mm，5μm)；

流動(dòng)相：正己烷:異丙醇:二乙胺＝85:15:0.3％(體積比)；

流速：1.0ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣體積：10μl；

溶液配制：

供試品溶液：稱(chēng)取待檢測(cè)樣品約20mg，精密稱(chēng)定，置10ml容量瓶中，加適量稀釋劑(乙醇)超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

按照中國(guó)藥典2010版第二部附錄ⅴd高效液相色譜法，取供試品溶液，在所述色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，并記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖如圖3，圖中suvorexant與其異構(gòu)體(enantiomer)之間的分離度為2.05。記錄各色譜圖下色譜峰的峰面積、對(duì)稱(chēng)性、保留時(shí)間和峰純度，結(jié)果如表3。

表3

綜上實(shí)施例，

實(shí)施例1、2和3表明，本發(fā)明所述的方法，在本發(fā)明所述的范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整，不影響其對(duì)蘇沃雷生手性異構(gòu)體的分離測(cè)定，具有高效、便捷、專(zhuān)屬性好、靈敏度高和分離度好的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文 所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明內(nèi)。