本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種采用HPLC（高效液相色譜）測定頭孢美唑酸化合物中間體S-氰甲基異硫脲及其有關(guān)物質(zhì)的化學(xué)分析方法。
背景技術(shù)：
：S-氰甲基異硫脲為合成的化學(xué)中間體，可用于合成頭孢美唑酸等化合物。其合成路線為由硫脲（i）和氯乙腈（ii）反應(yīng)制得S-氰甲基異硫脲（iii），經(jīng)結(jié)晶提純后制得S-氰甲基異硫脲成品，并進一步用于其他用途，例如可作為合成頭孢美唑酸的中間體等。S-氰甲基異硫脲的合成路線如下所示。其中，2,4-二氨基噻唑（iv）為反應(yīng)副產(chǎn)物，同時也是S-氰甲基異硫脲的主要降解產(chǎn)物。在頭孢美唑酸合成過程中，需要測定S-氰甲基異硫脲的準(zhǔn)確含量，以提高投料的準(zhǔn)確性。S-氰甲基異硫脲、起始物料硫脲及2,4-二氨基噻唑極性較強，難以進行分離，S-氰甲基異硫脲與2,4-二氨基噻唑色譜行為相似，一般的反相色譜難以對其進行分離測定。此外，S-氰甲基異硫脲、硫脲及2,4-二氨基噻唑在有機溶劑中的溶解性較差，在水溶液中的溶解性較好，但在水溶液中S-氰甲基異硫脲會快速轉(zhuǎn)變?yōu)?,4-二氨基噻唑，穩(wěn)定性很差。目前，尚無文獻報道S-氰甲基異硫脲的質(zhì)量控制情況，對其測定分析亦無文獻資料可循。為解決上述問題，發(fā)明人提供了一種測定方法，可以同時準(zhǔn)確測定上述三種化合物。此法既解決了三者的色譜分離問題，也解決了S-氰甲基異硫脲在水溶液中的不穩(wěn)定的問題，可用于測定合成S-氰甲基異硫脲時反應(yīng)液中S-氰甲基異硫脲、硫脲和2,4-二氨基噻唑的含量，以判斷合成S-氰甲基異硫脲時的反應(yīng)進程，也可以用來測定S-氰甲基異硫脲成品中的硫脲及2,4-二氨基噻唑的含量，以及除硫脲及2,4-二氨基噻唑以外的其他雜質(zhì)，進而評估所制備的S-氰甲基異硫脲的質(zhì)量。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種檢測S-氰甲基異硫脲的方法，該方法可同時測定反應(yīng)液中的S-氰甲基異硫脲、硫脲和2,4-二氨基噻唑的含量，以及測定S-氰甲基異硫脲成品的含量和有關(guān)物質(zhì)。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)，具體如下：（1）檢測條件色譜柱以辛烷基鍵合硅膠為填充劑；以pH為2.0~3.0的磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鉀濃度為0.1mol/L，離子對試劑濃度為0.005mol/L~0.015mol/L，用磷酸調(diào)節(jié)pH）為流動相A，以乙腈、甲醇或二者的混合物為流動相B；流動相A與流動相B的體積比為85~95∶5~15；流速為0.7ml~1.3ml/min；柱溫為20-40℃；檢測波長為200nm~240nm。其中，所述離子對試劑選自戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉。（2）溶液的配制1）供試品溶液1：取制備S-氰甲基異硫脲的反應(yīng)液適量，用稀釋劑溶解并稀釋制成每1ml含S-氰甲基異硫脲約0.01mg~1mg的溶液，即得。2）供試品溶液2：取S-氰甲基異硫脲供試品適量，用稀釋劑溶解并稀釋制成每1ml含S-氰甲基異硫脲約0.01mg~1mg的溶液，即得。3）對照品溶液：取S-氰甲基異硫脲、硫脲及2,4-二氨基噻唑?qū)φ掌愤m量，用稀釋劑溶解并稀釋制成每1ml含各組分約0.01mg~1mg的溶液，即得。其中，所述稀釋劑選自pH不大于3的緩沖液或酸溶液，優(yōu)選為流動相或0.01mol/L~1mol/L的鹽酸溶液。優(yōu)選地，所述的高效液相色譜法的色譜條件為：以辛烷基鍵合硅膠為填充劑；以pH2.5的磷酸鹽緩沖液（取庚烷磺酸鈉2.2g，磷酸二氫鉀13.6g，加水稀釋至1000ml，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，抽濾，即得）-乙腈（90:10）為流動相；流速為1.0ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為210nm；進樣量為10μl；稀釋劑為流動相，進行有關(guān)物質(zhì)檢查時供試品溶液的濃度以S-氰甲基異硫脲計為1mg/ml，進行含量測定時供試品溶液的濃度為0.1mg/ml。本發(fā)明人經(jīng)過大量的實驗研究，開發(fā)出了本發(fā)明提供的檢測方法，其優(yōu)點在于：（1）專屬性好，靈敏度高。選用等度洗脫，色譜峰信號的基線良好；在選定的流動相條件下，各色譜峰得到良好的分離，專屬性良好；在選定的波長下，各組分紫外吸收強，響應(yīng)高，檢測靈敏度高。（2）分析時間短，分離度好。由于多氨基的存在，硫脲、S-氰甲基異硫脲及2,4-二氨基噻唑極性很強，其色譜分離亦存在較大困難。在發(fā)明人選定的色譜條件下，僅采用等度洗脫，運行時間約10min，即可使難分離的化合物得到分離。（3）解決了待測組分在有機溶劑中溶解性不佳，在水溶液中穩(wěn)定性較差的問題，使各組分可以得到準(zhǔn)確測定。（4）可用于合成S-氰甲基異硫脲時的反應(yīng)液中各組分的測定。在該法下，可定量檢測反應(yīng)液中起始物料硫脲含量，以判斷反應(yīng)進程。（5）可用于S-氰甲基異硫脲的質(zhì)量控制。在本法下，可以檢測S-氰甲基異硫脲的含量及有關(guān)物質(zhì)，進而評估其質(zhì)量。（6）此外，本方法還可用于檢測頭孢美唑酸、頭孢美唑鈉或注射用頭孢美唑鈉中的雜質(zhì)硫脲、S-氰甲基異硫脲及2,4-二氨基噻唑的含量，可以更好的控制藥品質(zhì)量，保證用藥安全。附圖說明附圖1發(fā)明實施例5硫脲、S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑?qū)φ掌啡芤荷V圖附圖2發(fā)明實施例6制備S-氰甲基異硫脲的反應(yīng)液的色譜圖附圖3發(fā)明實施例7S-氰甲基異硫脲有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液色譜圖具體實施方式以下通過對本發(fā)明具體實施方式的描述說明，但不限制本發(fā)明。實施例1色譜條件的選擇檢測波長：210nm流動相流速：1ml/min柱溫：30℃pH2.5的磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀13.6g，加水稀釋至1000ml，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，抽濾，即得。pH2.5的磷酸鹽緩沖液-0.01mol/L庚烷磺酸鈉：取庚烷磺酸鈉2.2g，磷酸二氫鉀13.6g，加水稀釋至1000ml，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，抽濾，即得。供試品溶液：取硫脲、S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑適量，用0.5mol/L鹽酸溶液配制成含各組分約為0.1mg/ml的混合溶液，即得。精密量取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，對色譜條件進行初步篩選，以S-氰甲基異硫脲與2,4-二氨基噻唑的分離情況為判斷指標(biāo)。結(jié)果見表1。表1色譜分離體系的初篩結(jié)果上述結(jié)果表明，使用不含離子對試劑的流動相體系，即使水相比例達到99%，各目標(biāo)物仍難以分離。而當(dāng)在流動相中添加陰離子離子對試劑庚烷磺酸鈉后，待測組分可得到分離?；诒?所取得的結(jié)果，確定基本的色譜分離條件如下：色譜柱為C8柱，流動相為pH2.5的磷酸鹽緩沖液（含0.01mol/L庚烷磺酸鈉）-乙腈（90:10）；柱溫為30℃；流速為1ml/min；進樣量為10μl；檢測波長為210nm。在基本的色譜條件下，對色譜條件的參數(shù)調(diào)整范圍進行試驗，結(jié)果如下。（1）其他色譜條件不變，調(diào)整緩沖鹽與乙腈的比例為85:15、90:10和95:5，觀察分離度，結(jié)果表明S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑、硫脲分離良好，與其他未知雜質(zhì)峰的分離度也符合要求，分離度均大于1.5。（2）其他色譜條件不變，調(diào)整水相pH分別為2.0、2.5、和3.0，流動相比例為緩沖鹽-有機相（90:10），觀察分離度，結(jié)果表明S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑、硫脲分離良好，與其他未知雜質(zhì)峰的分離度也符合要求，分離度均大于1.5。（3）其他色譜條件不變，調(diào)整庚烷磺酸鈉的濃度為0.005mol/L、0.008mol/L、0.01mol/L、0.012和0.015mol/L，觀察分離度，結(jié)果表明S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑、硫脲分離良好，與其他未知雜質(zhì)峰的分離度也符合要求，分離度均大于1.5。（4）其他色譜條件不變，調(diào)整離子對試劑的類型，分別為戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉和辛烷磺酸鈉作為離子對試劑，觀察分離度，結(jié)果表明S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑、硫脲分離良好，與其他未知雜質(zhì)峰的分離度也符合要求，分離度均大于1.5。根據(jù)上述考察結(jié)果，緩沖鹽-有機相比例在85~95∶5~15之間、水相pH范圍在2.0~3.0之間、離子對試劑濃度在0.005mol/L~0.015mol/L范圍內(nèi)、采用特定的陰離子離子對試劑，均可得到滿意的分離效果，S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑、硫脲分離良好，與其他未知雜質(zhì)峰的分離度也符合要求，分離度均大于1.5。實施例2樣品配制方式的確定（稀釋劑，樣品濃度）流動相：庚烷磺酸鈉-磷酸鹽緩沖液（取庚烷磺酸鈉2.2g，磷酸二氫鉀13.6g，加水稀釋至1000ml，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5，抽濾，即得）-乙腈（90:10）色譜柱：AgilentXDBC8，4.6×250mm，5μm流速：1.0ml/min；進樣量：10μl；檢測波長：210nm；柱溫：30℃稀釋劑：水、0.001mol/L鹽酸溶液、1mol/L鹽酸溶液，流動相（緩沖鹽：乙腈=90:10）分別取硫脲、S-氰甲基異硫脲、2,4-二氨基噻唑適量，分別以上述稀釋劑配制成硫脲對照品溶液（約0.1mg/ml）、S-氰甲基異硫脲對照品溶液（約0.1mg/ml）和2,4-二氨基噻唑?qū)φ掌啡芤海s0.1mg/ml），分別于0h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h進樣分析，以各時間點的峰面積與0h峰面積的比值（%）作為穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果見表2。表2穩(wěn)定性結(jié)果*：轉(zhuǎn)化為2,4-二氨基噻唑上述結(jié)果表明，S-氰甲基異硫脲在水溶液中不穩(wěn)定，快速轉(zhuǎn)化為2,4-二氨基噻唑，而在pH不大于3.0的范圍內(nèi)可以保持穩(wěn)定，優(yōu)選采用流動相為稀釋劑。實施例3檢測波長的選擇色譜條件同實施例2。稀釋劑：流動相分別取硫脲、2,4-二氨基噻唑、S-氰甲基異硫脲對照品適量，以流動相溶解并制成含各組分0.1mg/ml的混合溶液，作為供試品溶液，進樣分析，采用二極管陳列檢測器（PDA）進行檢測，并在190nm~400nm內(nèi)做紫外光譜掃描，得到各組分的紫外吸收光譜，結(jié)果如表3所示。根據(jù)各組分紫外吸收光譜，選擇檢測波長范圍為200nm~240nm，兼顧各個組分的吸收情況及溶劑的截止波長，波長優(yōu)選為210nm。表3各組分吸收峰硫脲2,4-二氨基噻唑S-氰甲基異硫脲吸收峰197nm，237nm231nm，261nm208nm實施例4靈敏度試驗色譜條件同實施例2。溶液的配制：取硫脲、2,4-二氨基噻唑、S-氰甲基異硫脲對照品適量，用流動相配制成含各組分約0.1μg/ml和0.3μg/ml的溶液，分別作為檢測限溶液和定量限溶液，進樣分析，記錄色譜圖，記錄峰面積，計算各組份的信噪比。結(jié)果見表4。表4靈敏度試驗結(jié)果結(jié)果表明，本法靈敏度良好。實施例5線性試驗色譜條件同實施例2。溶液的配制：取硫脲、2,4-二氨基噻唑、S-氰甲基異硫脲對照品適量，用流動相配制成含各組分約0.3μg/ml~1.0mg/ml的溶液，作為線性溶液，進樣分析，記錄色譜圖，記錄峰面積，以峰面積對濃度作圖，結(jié)果見表5。表5線性試驗結(jié)果表明，各組分在0.3μg/ml~1mg/ml范圍內(nèi)線性良好。實施例6反應(yīng)液中的含量測定制備S-氰甲基異硫脲的反應(yīng)液：取硫脲10g，氯乙腈12g，置1000ml丙酮中，加入鹽酸1ml，室溫攪拌，即得反應(yīng)液。色譜條件同實施例2。溶液的配制：取反應(yīng)液1ml，置10ml量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。另取硫脲及S-氰甲基異硫脲對照品各約10mg，精密稱定，至10ml量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取上述溶液進樣分析，按外標(biāo)法計算供試品溶液中硫脲及S-氰甲基異硫脲的濃度，計算轉(zhuǎn)化率。其中，上述各濃度按供試品溶液中的濃度計算。結(jié)果見表6。表6反應(yīng)液中硫脲測得濃度由表6數(shù)據(jù)可以看出，本方法可用于合成S-氰甲基異硫脲時的反應(yīng)監(jiān)控，以控制反應(yīng)進程。實施例7S-氰甲基異硫脲有關(guān)物質(zhì)測定S-氰甲基異硫脲的制備：取硫脲10g，氯乙腈12g，置1000ml丙酮中，加入鹽酸1ml，室溫攪拌，將得到的固體過濾，并用丙酮洗滌，真空干燥，抽去有機試劑，即得。色譜條件同實施例2。溶液的配制：取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，用流動相溶解并定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液，精密移取1ml置100ml量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即得對照溶液。另取硫脲對照品及2,4-二氨基噻唑?qū)φ掌愤m量，以流動相溶解并定量配制成含各組分濃度約為0.01mg/ml的溶液，即得雜質(zhì)對照溶液。取上述溶液進樣分析，參照中國藥典2010年版二部附錄VD，按外標(biāo)法計算硫脲及2,4-二氨基噻唑的含量，按自身對照法計算其他未知雜質(zhì)的量及其他雜質(zhì)的總量。結(jié)果見表7。表7S-氰甲基異硫脲有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果由表7可以看出，本方法可以用來檢測S-氰甲基異硫脲中間體中已知雜質(zhì)與未知雜質(zhì)的含量，以控制中間體的質(zhì)量。當(dāng)前第1頁1 2 3