本發(fā)明涉及轉基因水稻、玉米、棉花、大豆等作物的谷物散糧及其粗加工產品中的蛋白BT-Cry1Ab/Ac的快速檢測方法，屬于轉基因檢測領域。
背景技術：
隨著各種各樣的轉基因食品大量涌入市場，轉基因食品的安全性日益?zhèn)涫荜P注，世界各國對轉基因食品的安全性存在較大的爭議。歐盟，日本等地區(qū)已制定相關法規(guī)對轉基因食品進行嚴格的管理。因此，快速檢測轉基因作物/植物中轉基因蛋白的方法具有重要的意義。
蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)是一種革蘭氏陽性菌，廣泛存在于土壤、塵埃、水域、沙漠、植物、昆蟲尸體中。二十世紀50年代，人們發(fā)現Bt菌的殺蟲活性與其伴胞晶體有關，并證實這種伴胞晶體由蛋白質組成(包括Cry1Ab，Cry1C等)，通常被稱作殺蟲晶體蛋白(insecticidal crystal protein，ICP)。這種蛋白亦成為如今抗蟲轉基因作物中最為常用的抗蟲蛋白質之一。
目前常用的Bt殺蟲晶體蛋白檢測方法包括基于DNA的PCR檢測方法及基于蛋白質的酶聯免疫吸附法。PCR法能夠從作物種子開始到作物成熟整個過程中對轉基因成分進行精確檢測，不受樣品的處理方法的影響，但易出現假陽性和假陰性等問題，且因經高度處理過的轉基因產品及其衍生物，如植物油、糖或者淀粉等中不含任何DNA成分，因此PCR方法無法實現對此類轉基因食品的檢測。酶聯免疫吸附法可對樣本進行批量處理，但其耗時較長，需要專業(yè)技術人員，且需特殊的儀器，因此該種檢測方法不利于在無相關專業(yè)技術用戶市場的推廣和使用。本發(fā)明采用膠體碳免疫層析技術，可實現快速檢測，肉眼即可進行判斷，無需專業(yè)技術人員的便于推廣的目的。
技術實現要素：
針對上述情況，本發(fā)明提供一種利用膠體碳建立的快速檢測轉基因作物(水稻、玉米、棉花、大豆等)的谷物散糧及其粗加工產品中的Bt-Cry1Ab/Ac 抗蟲蛋白的檢測試紙條，采用標記了單克隆抗體M03的膠體碳墊與包被了單克隆抗體M02的硝酸纖維素膜(檢測線)和包被了羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜(質控線)制成硝酸纖維素膜配合；采用雙抗體夾心免疫層析的原理，樣本中的抗原在側向移動的過程中與膠體碳標記的特異性抗體結合，形成抗原-抗體復合物，繼續(xù)向前方流動和硝酸纖維素膜的檢測線上特異性抗體結合形成雙抗體夾心復合物進而形成肉眼可見的條帶而進行結果的判定，它具備操作簡便，迅速，反應靈敏度高，成本低以及便于大規(guī)模推廣使用的優(yōu)點。
為了實現上述目的，本發(fā)明的技術方案如下：
一種Bt-Cry1Ab/Ac膠體碳快速檢測試紙條，包括PVC底板、樣品墊、硝酸纖維素膜、質控線、檢測線、吸水濾紙，PVC底板一側設有樣品墊，另一側設有吸水濾紙；樣品墊和吸水濾紙之間設有硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜右側卡接在吸水濾紙中；所述硝酸纖維素膜中部設有檢測線和質控線，檢測線靠近樣品墊，其特征在于，還包括膠體碳墊，樣品墊右端與膠體碳墊搭接相連，膠體碳墊右側與硝酸纖維素膜搭接相連。
所述膠體碳墊上設有膠體碳標記的單克隆抗體M03涂層。
所述檢測線為硝酸纖維素膜上包被了單克隆抗體M02的區(qū)域。
所述質控線為硝酸纖維素膜上包被了羊抗鼠IgG的區(qū)域。
所述樣品墊上設有加樣區(qū)。
所述樣品墊、吸水濾紙和膠體碳墊依次貼附于PVC底板上。
一種Bt-Cry1Ab/Ac膠體碳快速檢測試紙條的使用方法，包括以下步驟：
一、樣本處理：
a)稱取待測谷物樣品至帶有蓋子的反應容器中；
b)利用攪拌機或其它類似設備將谷物打碎成細顆粒狀；
c)依據樣品總質量加入相應體積的超純水或去離子水，其中水的體積(毫升)為樣品總質量(克)的1.2～2倍；
d)擰緊反應容器的蓋子，上下振蕩至少30～60秒，確保樣品與超純水或去離子水充分混勻；
e)靜置至反應容器中固體物質沉降；
二、樣本檢測：
a)用吸管吸取反應容器中上清液加入樣品杯，直至樣品杯中上清液加滿至基準線，保證樣品杯中的上清液中沒有顆粒物；
b)靜置30～60秒后，將樣品杯中的上清液滴入快速檢測試紙條的加樣區(qū)，即可開始測試；
三、結果判斷：
當上清液為陰性(-)時：檢測線(T線)不顯色；當上清液為陽性(+)時：檢測線(T線)顯黑色、肉眼可見；當未出現質控線(C線)，可能操作不當或試紙已失效。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試紙重新測試。
優(yōu)選的，步驟一c)中加入的超純水或去離子水為樣品總質量的1.5倍。
優(yōu)選的，步驟一d)中振蕩時間為30秒。
優(yōu)選的，步驟二a)進行之前，將反應器中混合液于離心機(日立離心機，CF16RXII)中1000rpm離心5分鐘。
優(yōu)選的，步驟二b)中靜置時間為30秒。
本發(fā)明的優(yōu)點是：采用標記了單克隆抗體M03的膠體碳墊與包被了單克隆抗體M02的硝酸纖維素膜(檢測線)和包被了羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜(質控線)制成檢測試紙條；采用雙抗體夾心免疫層析的原理，樣本中的抗原在側向移動的過程中與膠體碳標記的特異性抗體結合，形成抗原-抗體復合物，繼續(xù)向前方流動和硝酸纖維素膜的檢測線上特異性抗體結合形成雙抗體夾心復合物進而形成肉眼可見的條帶而進行結果的判定，它具備操作簡便，迅速，反應靈敏度高，成本低以及便于大規(guī)模推廣使用的優(yōu)點。
附圖說明
圖1為本發(fā)明的結構示意圖。
在圖中：1-PVC底板，2-樣品墊，3-硝酸纖維素膜，4-質控線，5-檢測線，6-吸水濾紙，7-膠體碳墊，8-加樣區(qū)。
具體實施方式
為了使本發(fā)明實現的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體圖示，進一步闡述本發(fā)明。
參見圖1，一種Bt-Cry1Ab/Ac膠體碳快速檢測試紙條，包括PVC底板、 樣品墊、硝酸纖維素膜、質控線、檢測線、吸水濾紙，PVC底板一側設有樣品墊，另一側設有吸水濾紙；樣品墊和吸水濾紙之間設有硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜右側卡接在吸水濾紙中；所述硝酸纖維素膜中部設有檢測線和質控線，檢測線靠近樣品墊，其特征在于，還包括膠體碳墊，樣品墊右端與膠體碳墊搭接相連，膠體碳墊右側與硝酸纖維素膜搭接相連。
所述膠體碳墊上設有膠體碳標記的單克隆抗體M03涂層。
所述檢測線為硝酸纖維素膜上包被了單克隆抗體M02的區(qū)域。
所述質控線為硝酸纖維素膜上包被了羊抗鼠IgG的區(qū)域。
所述樣品墊上設有加樣區(qū)。
所述樣品墊、吸水濾紙和膠體碳墊依次貼附于PVC底板上。
一種Bt-Cry1Ab/Ac膠體碳快速檢測試紙條的使用方法，包括以下步驟：
一、樣本處理：
a)稱取待測谷物樣品至帶有蓋子的反應容器中；
b)利用攪拌機或其它類似設備將谷物打碎成細顆粒狀；
c)依據樣品總質量加入相應體積的超純水或去離子水，其中水的體積(毫升)為樣品總質量(克)的1.2～2倍；
d)擰緊反應容器的蓋子，上下振蕩至少30～60秒，確保樣品與超純水或去離子水充分混勻；
e)靜置至反應容器中固體物質沉降；
二、樣本檢測：
a)用吸管吸取反應容器中上清液加入樣品杯，直至樣品杯中上清液加滿至基準線，保證樣品杯中的上清液中沒有顆粒物；
b)靜置30～60秒后，將樣品杯中的上清液滴入快速檢測試紙條的加樣區(qū)，即可開始測試；
三、結果判斷：
當上清液為陰性(-)時：檢測線(T線)不顯色；當上清液為陽性(+)時：檢測線(T線)顯黑色、肉眼可見；當未出現質控線(C線)，可能操作不當或試紙已失效。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試紙重新測試。
優(yōu)選的，步驟一c)中加入的超純水或去離子水為樣品總質量的1.5倍。
優(yōu)選的，步驟一d)中振蕩時間為30秒。
優(yōu)選的，步驟二a)進行之前，將反應器中混合液于離心機(日立離心機，CF16RXII)中1000rpm離心5分鐘。
優(yōu)選的，步驟二b)中靜置時間為30秒。
以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明的范圍內。本發(fā)明要求的保護范圍由所附的權利要求書及其等同物界定。