一種使用離子色譜對奶粉中三聚氰胺檢測分析的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種使用離子色譜檢測乳制品中三聚氰胺含量的方法。本發(fā)明的方法相比較于其他液相色譜的方法具有以下優(yōu)點:由于離子色譜的固定相多為帶正負電荷的樹脂材料，容易與樣品中蛋白質(zhì)或者脂肪酸、多肽等物質(zhì)發(fā)生非特異性結(jié)合導致壽命降低，使用本發(fā)明所采用的樣本制備方法可以降低這一效應。其次，本發(fā)明的方法使用富集待測化合物的方式，快速高效，利用電場和分子量的區(qū)別對樣品進行快速的預處理達到了較高的效率。
【專利說明】—種使用離子色譜對奶粉中三聚氰胺檢測分析的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分離檢測方法，屬于分析化學，儀器分析的領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]三聚氰胺自2007年美國寵物被發(fā)現(xiàn)對動物有不良反應，2008年在中國奶粉中被大量檢出，給嬰幼兒健康造成嚴重影響。在乳制品中對三聚氰胺的檢測已是目前食品藥品安全的重要項目。
[0003]高效液相色譜是目前最常見的實驗室用分離、分析的工具，一般的工作模式下使用反相高效液相色譜，即固定相為非極性相，其檢測手段多樣，包括質(zhì)譜，可見光吸光度，熒光檢測等方法。目前已有使用高效液相色譜對三聚氰胺進行檢測的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明通過使用特定的酸性溶液處理奶粉樣品、利用電場和分子量選擇性膜對摻有三聚氰胺的奶粉進行了快速且回收率高的樣品處理，并且為后續(xù)的離子色譜分析奠定了很好的基礎(chǔ)。
[0005]目前，使用離子色譜分離檢測三聚氰胺的報道較少。尤其是對樣本品初步純化去雜，并利用分子量區(qū)別以及電場結(jié)合對三聚氰胺樣品分離處理并使用離子色譜分離的研究比較有限。使用離子色譜檢測三聚氰胺可以擴展對三聚氰胺的檢測的手段使技術(shù)人員不必局限于單一的檢測手法。并且本申請所用電場、分子量篩選的方式對樣本預處理具有很好的回收率，可以較好地與離子色譜結(jié)合使用。
[0006]離子色譜中最常見的方式就是離子交換的方法，即利用離子在于固定相相反極性的離子相互作用的強弱達到分離的效果。由于離子色譜柱的固定相多是由帶有正負電荷的樹脂構(gòu)成，導致其受樣本中蛋白質(zhì)的影響更大，容易發(fā)生非特異性結(jié)合導致壽命變短，分離效果發(fā)生改變，因此需要樣本進行預處理盡量避免這一現(xiàn)象。事實上，高效液相色譜也必須進行樣本預處理才可能避免類似的效應。
[0007]本申請使用離子色譜檢測三聚氰胺的方法包括以下步驟:
[0008](I)將樣本(奶粉)溶解于三氯乙酸、鹽酸、乙腈、甲醇的混合水溶液中，該混合溶液為A ；
[0009](2)充分混合攪拌、超聲波處理；
[0010](3)對溶液進行離心，收集清液；
[0011](4)對(3)中離心所得固體物質(zhì)再次加入溶液A，進行步驟(2)，重復步驟(3);之后再對離心所得沉淀物質(zhì)加入溶液A，再次重復步驟(2)，(3)；
[0012](5)將三次離心所得清液收集到一起，放入到含有對分子量具有篩選作用的膜
(2)的容器中，所屬容器在膜兩邊都設(shè)有電極(1，3)，極性相反，所述膜組織大分子物質(zhì)穿過，但小分子物質(zhì)可以穿過；使用電場分離清液中的三聚氰胺；
[0013](6)經(jīng)過電場分離后的溶液，加入到離子色譜柱中進行分離，使用UV-ViS檢測器檢測
[0014](7)制備一系列三聚氰胺標準溶液，并使用離子色譜測定工作曲線，根據(jù)工作曲線計算三聚氰胺的濃度和含量。
[0015]本發(fā)明的有益效果如下:
[0016]可以很好的對三聚氰胺進行粗處理，避免普通過濾帶來的樣品損失，并且比使用壓力通過普通色譜柱用的粗處理過濾柱更省力，省時間。經(jīng)過多次試驗求得三聚氰胺的粗處理回收率都在96%以上。

【專利附圖】

【附圖說明】
:
[0017]圖1-3:1、3為電極，2為過濾膜；圖3是圖2的截面圖，圖2是圓柱形的過濾膜，中間的電極為線狀，3為圓柱狀的電極；
[0018]圖4:摻雜在奶粉中的三聚氰胺色譜圖，淋洗液濃度18mmol/L。

【具體實施方式】
[0019]本發(fā)明所用儀器為D1nex ICS-1 10Basics Integrated IC System,固定相為Thermo Scientific D1nex 1nPac CS-19_4um Cat1n-Exchange Column,具有高分辨率的羧酸修飾的陽離子交換樹脂，適用于小分子胺的分離。過濾膜2可以是多種現(xiàn)有技術(shù)中用來超濾、滲析的膜，最低通過分子量可以設(shè)為500，甚至300，例如聚碳酸酯或尼龍等材質(zhì)制成，本申請實施例所用膜為Waters生產(chǎn)的分子量通過量在500的產(chǎn)品。電極材料可以根據(jù)實際情況允許選擇，優(yōu)選石墨、鉬電極。
[0020]所用奶粉為市售，被三聚氰胺污染的奶粉為加入三聚氰胺的市售奶粉，加入量占總質(zhì)量的241ppm。
[0021]對于溶液A的選擇，這四種物質(zhì)的摩爾濃度比例可以為1-10:1-10:1-30:1-20 ;優(yōu)選2-10:3-6:20-30:12-18 ;最優(yōu)選10:6:30:18。經(jīng)過試驗證實，使用上述比例之外的組合，蛋白質(zhì)絮凝沉淀速度明顯快過范圍之外的比例，同時回收率下降，這可能是因為蛋白質(zhì)沉淀過快包裹了部分三聚氰胺導致。
[0022]該溶液加入量越少越好,但應當保證pH值至少為1-2,優(yōu)選pH約為I。
[0023]攪拌時間優(yōu)選5-30分鐘，超聲時間5-15分鐘，優(yōu)選攪拌時間10分鐘，超聲時間15分鐘。
[0024]電場的設(shè)置如下:所用電源為0-300V電泳用普通電源，電壓控制在270V，無論采取何種方式的設(shè)置，兩電極間距離應當保持在5-10mm，并且將電極設(shè)置在能夠包容盡可能多的溶液的位置。通過最優(yōu)分離時間研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過2分鐘后三聚氰胺濃度已經(jīng)穩(wěn)定，因此沒有必要對其進一步通電。
[0025]分離后，將吸引帶正電離子一端的溶液取出，加入到離子色譜柱中，使用甲基磺酸濃度為5-40mmol/L的溶液進行淋洗，優(yōu)選7或18或27或32mmol/L的溶液進行淋洗，流速
1.3ml/min。
[0026]檢測波長在240nm，配制標準溶液的濃度為0.1, 0.2，0.5，1.0, 5.0ppm,所得工作曲線方程為:Y = 2.1367Χ-0.0077，(r = 0.9999)。
[0027]對于回收率，經(jīng)過計算得出該進入色譜柱的三聚氰胺濃度為78.41ppm，該溶液時經(jīng)過三次離心后再加入溶液超聲得到的，故其原始濃度為3倍，235.223ppm,原始溶液體積為1ml，約為lg，因此可以計算得出235.223/240 = 97.9%，即通過本發(fā)明的方法結(jié)合離子色譜得到的三聚氰胺準確度(也是預處理的回收率)為97.9%。
【權(quán)利要求】
1.一種使用離子色譜對奶粉中三聚氰胺檢測分析的方法，其特征在于， (1)將奶粉溶解于三氯乙酸、鹽酸、乙腈、甲醇的混合水溶液中，該混合水溶液為A； (2)充分混合攪拌、超聲波處理； (3)對溶液進行離心,收集清液； (4)對(3)中離心所得固體物質(zhì)再次加入溶液A，進行步驟(2)，重復步驟(3);之后再對離心所得沉淀物質(zhì)加入溶液A，重復步驟(2)，(3)； (5)將三次離心所得清液收集到一起，放入到含有對分子量具有篩選作用的膜(2)的容器中，所屬容器在膜兩邊都設(shè)有電極(1，3)，極性相反，所述膜阻止大分子蛋白質(zhì)穿過，但小分子可以穿過；使用電場分離清液中的三聚氰胺； (6)經(jīng)過電場分離后的溶液，加入到離子色譜柱中進行分離，使用UV-ViS檢測器檢測； (7)制備一系列三聚氰胺標準溶液，并使用離子色譜測定工作曲線，根據(jù)工作曲線計算三聚氰胺的濃度和含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于溶液A中四種物質(zhì)的摩爾濃度比例可以為1-10:1-10:1-30:1-20 ;優(yōu)選 2-10:3-6:20-30:12-18 ;最優(yōu)選 10:6:30:18 ;且溶液 A加入量保證pH值至少在1-2的范圍內(nèi)，優(yōu)選pH約為I。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟(5)中電壓控制在270V，兩電極間距離應當保持在5-10mm，時間為2分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，步驟(5)中分離所用膜(2)最低分子量通過量為500，其材質(zhì)可以為尼龍或者碳酸二甲酯，電極材質(zhì)可以為石墨或者金屬鉬。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，步驟(2)攪拌時間優(yōu)選5-30分鐘，超聲時間5-15分鐘，優(yōu)選攪拌時間10分鐘，超聲時間15分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述膜、電極使用如下設(shè)置:以一個線狀或柱狀電極為圓心，以其為圓心的圓設(shè)置為膜(2)，在該膜外存在同心圓狀電極作為另一個電極。
【文檔編號】G01N30/06GK104458996SQ201410798022
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月19日
【發(fā)明者】許愛華, 隋峰, 林振強, 許思思, 李鋒麗, 何云馨, 孫倩蕓 申請人:山東省計量科學研究院