一種檢測空氣中浮游細菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測空氣中浮游細菌的方法。該方法包括如下步驟：1)將盛有無菌生理鹽水的無菌平皿放入浮游細菌采樣器中，從若干采樣點采集空氣；2)測定采集液的細菌含量；3)吸取所述采集液采用ATP熒光檢測儀測定熒光值；4)根據(jù)步驟2)和3)結(jié)果，獲得所述細菌含量的對數(shù)值與所述熒光值的對數(shù)值之間的標準曲線方程；5)參照步驟1)和3)測定待測空氣的熒光值，代入所述標準曲線方程，從而獲得所述待測空氣中浮游細菌的含量。本發(fā)明首次將常規(guī)的撞擊式空氣采集法與ATP生物發(fā)光法相結(jié)合，可通過ATP熒光值快速確定空氣中的細菌含量，極大節(jié)省了微生物培養(yǎng)的時間，提高了檢測浮游細菌的效率，減少食品加工過程中外源微生物污染的發(fā)生。
【專利說明】一種檢測空氣中淳游細菌的方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物檢測領域，涉及一種檢測空氣中浮游細菌的方法。

【背景技術】
[0002] 在食品生產(chǎn)加工的過程中，空氣中的浮游細菌是食品微生物污染的主要來源之 一。對浮游細菌的數(shù)量進行監(jiān)測和控制，對保證食品安全衛(wèi)生具有重要意義。根據(jù)《GB/ T18204-2000公共場所空氣微生物檢測方法細菌總數(shù)測定》，目前普遍的采集空氣中微生物 的方法主要為撞擊法和自然沉降法，空氣樣品采集完畢后均需要對采集到的浮游細菌恒溫 培養(yǎng)48h，然后再進行平板菌落計數(shù)，該方法具有明顯的滯后性，食品生產(chǎn)企業(yè)無法依據(jù)此 方法對原材料存儲場所、食品生產(chǎn)加工過程車間、成品及半成品儲存場所中空氣潔凈度進 行實時監(jiān)控，這也給食品生產(chǎn)過程帶來衛(wèi)生安全隱患，因此，食品生產(chǎn)加工行業(yè)亟需一種空 氣中浮游細菌的快速檢測技術，提高食品生產(chǎn)全過程相關環(huán)境中空氣浮游細菌污染的監(jiān)控 效率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個目的是提供一種檢測空氣中浮游細菌的方法。
[0004] 本發(fā)明所提供的檢測空氣中浮游細菌的方法，具體可包括如下步驟：
[0005] (1)將盛有無菌生理鹽水的無菌平皿放入浮游細菌采樣器中，從若干采樣點（10 個以上）采集空氣；
[0006] (2)采集完畢后，分別測定每個采樣點的平皿中采集液的細菌含量（CFU/mL);
[0007] (3)吸取所述采集液放入ATP熒光檢測儀樣品杯中，加入復合熒光試劑，用移液槍 反復抽吸4次，混勻后將所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定熒光值（RLU);
[0008] (4)根據(jù)步驟（2)和步驟（3)的測定結(jié)果，獲得所述采集液的細菌含量的對數(shù)值與 所述熒光值的對數(shù)值之間的標準曲線方程；
[0009] (5)將盛有無菌生理鹽水的無菌平皿放入所述浮游細菌采樣器中，采集待測的空 氣；吸取平皿中的待測采集液放入所述ATP熒光檢測儀樣品杯中，加入所述復合熒光試劑， 將所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定熒光值，記為待測熒光值；
[0010] (6)將步驟（5)獲得的所述待測熒光值的對數(shù)代入步驟（4)的所述標準曲線方程， 計算得到所述待測采集液中的細菌含量，進而獲得所述待測的空氣中浮游細菌的含量。 [0011] 在所述方法中，所述復合熒光試劑主要由細菌裂解劑和熒光素酶組成。在本發(fā)明 的一個實施例中，所述復合突光試劑具體為中質(zhì)賽福（北京）科技儀器有限公司生產(chǎn)的產(chǎn) 品編號為ZF0011的復合熒光試劑。
[0012] 在本發(fā)明中，所述采集液或所述待測采集液的用量具體為100μ L，所述復合熒光 試劑的用量具體為25 μ L。
[0013] 在所述方法的步驟（1)和步驟（5)中，所述無菌生理鹽水的用量為20mL。所述無 菌平皿為無菌的微生物培養(yǎng)皿。
[0014] 在所述方法的步驟⑴和步驟（5)中，所述空氣的采集量均參考《GB/T 16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》，空氣采集量根據(jù)具體的潔凈度要求 而定：若所述空氣的潔凈度為100級，則所述空氣的采集量為1000L ;若所述空氣的潔凈度 為10000級，則所述空氣的采集量為500L ;若所述空氣的100000級與100000級以上，則所 述空氣的采集量為100L。
[0015] 在所述方法的步驟（2)中，所述測定每個采樣點的平皿中采集液的細菌含量，是 按照國標GB4789. 2-2010進行測定的。
[0016] 在所述方法的步驟￠)中，當根據(jù)所述標準曲線方程計算得到所述待測采集液中 的細菌含量后，是根據(jù)采集到的所述待測的空氣的體積計算得到所述待測空氣中浮游細菌 的含量的。
[0017] 在本發(fā)明中，所述浮游細菌采樣器的型號是FKC-I型，可從中質(zhì)賽福（北京）科技 儀器有限公司購買。
[0018] 在本發(fā)明中，步驟（4)所獲得的所述標準曲線方程具體為Y = 0. 9189X+1. 4651，其 中，Y為采集液中的細菌含量（CFU/mL)的對數(shù)值，X為熒光值（RLU)的對數(shù)值；線性相關系 數(shù) R2 為 0. 8762。
[0019] 在實際操作中，步驟（1)中的所述若干采樣點與步驟（5)中采集所述待測的空氣 時的米樣點位于同一建筑或同一廠區(qū)內(nèi)。
[0020] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于檢測空氣中浮游細菌的套裝。
[0021] 本發(fā)明所提供的用于檢測空氣中浮游細菌的套裝，含有浮游細菌采樣器、ATP熒光 檢測儀以及記載有如上所述方法的說明書。
[0022] 所述套裝在定量檢測待測空氣中浮游細菌含量中的應用也屬于本發(fā)明的保護范 圍。
[0023] 本發(fā)明首次將常規(guī)的撞擊式空氣采集法與ATP生物發(fā)光法相結(jié)合，在數(shù)學模型建 立后，可通過ATP熒光值快速確定空氣中的細菌總數(shù)，極大節(jié)省了微生物培養(yǎng)的時間，提高 了檢測浮游細菌的效率，能及時對食品生產(chǎn)相關環(huán)境的空氣浮游細菌進行檢測和評估，指 導食品企業(yè)對環(huán)境的清潔及消毒工作，將空氣中微生物的衛(wèi)生狀況及時準確地反饋到食品 企業(yè)及監(jiān)管部門，減少食品加工過程中外源微生物污染的發(fā)生。同時，本發(fā)明不涉及有毒有 害試劑，安全衛(wèi)生，綠色環(huán)保。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0024] 圖1為采集液中細菌含量（CFU/mL)的對數(shù)值與熒光值（RLU)的對數(shù)值之間的標 準曲線。

【具體實施方式】
[0025] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0026] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0027] 儀器及耗材：
[0028] ATP熒光檢測儀（中質(zhì)賽福（北京）科技儀器有限公司，SF0012型）；
[0029] ATP熒光檢測儀專用一次性樣品杯；
[0030] 浮游細菌采樣器（中質(zhì)賽福（北京）科技儀器有限公司產(chǎn)品，F(xiàn)KC-I型）；
[0031] 無菌微生物培養(yǎng)皿；
[0032] 平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（PCA);
[0033] 復合熒光試劑（中質(zhì)賽福（北京）科技儀器有限公司，產(chǎn)品編號為ZF0011)，該復 合熒光試劑的主要成分為細菌裂解劑和熒光素酶。
[0034] 實施例1、實驗室內(nèi)空氣中細菌含量的測定
[0035] 1、標準曲線的制定
[0036] (1)將盛有20ml無菌生理鹽水的無菌平皿放入浮游細菌采樣器中，從選定的55個 采樣點分別采集空氣，參照《GB/T 16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》 每個采樣點采集500L空氣（采樣點的空氣潔凈度為10000級）；
[0037] (2)采集完畢后，，按照國標GB4789. 2-2010分別測定每個采樣點的平皿中采集液 的細菌含量（CFU/mL);
[0038] (3)吸取100 μ L所述采集液放入ATP熒光檢測儀樣品杯中，加入25 μ L復合熒 光試劑，用移液槍反復抽吸4次，混勻后將所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定熒光值 (RLU)；
[0039] (4)對步驟⑵和（3)的數(shù)據(jù)進行線性回歸分析，以步驟⑵獲得的所述采集液 的細菌含量的對數(shù)值為縱坐標，以步驟（3)獲得的所述熒光值的對數(shù)值為橫坐標，制作標 準曲線，得到標準曲線方程Y = aX+b，其中Y代表采集液中細菌含量（CFU/mL)的對數(shù)值，X 代表測得熒光值（RLU)的對數(shù)值。
[0040] 55個選定的采樣點處的空氣中浮游細菌采集液的ATP熒光值與細菌含量測定結(jié) 果具體如表1所示。
[0041] 表155個采樣點的空氣中浮游細菌采集液的ATP熒光值與細菌含量測定結(jié)果
[0042]
[0043]

【權利要求】
1. 一種檢測空氣中浮游細菌的方法，包括如下步驟： (1) 將盛有無菌生理鹽水的無菌平皿放入浮游細菌采樣器中，從若干采樣點采集空 氣； (2) 采集完畢后，利用現(xiàn)有技術分別測定每個采樣點的平皿中采集液的細菌含量； (3) 吸取所述采集液放入ATP熒光檢測儀樣品杯中，加入復合熒光試劑，將所述樣品杯 置于ATP熒光檢測儀中測定熒光值； (4) 根據(jù)步驟（2)和步驟（3)的測定結(jié)果，獲得所述采集液的細菌含量的對數(shù)值與所述 熒光值的對數(shù)值之間的標準曲線方程； (5) 將盛有無菌生理鹽水的無菌平皿放入所述浮游細菌采樣器中，采集待測的空氣； 吸取平皿中的待測采集液放入所述ATP熒光檢測儀樣品杯中，加入所述復合熒光試劑，將 所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定熒光值，記為待測熒光值； (6) 將步驟（5)獲得的所述待測熒光值的對數(shù)代入步驟（4)的所述標準曲線方程，計算 得到所述待測采集液中的細菌含量，進而獲得所述待測的空氣中浮游細菌的含量。
2. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述復合熒光試劑主要由細菌裂解劑和 熒光素酶組成。
3. 根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟（1)和步驟（5)中，所述無菌生 理鹽水的用量為20mL。
4. 根據(jù)權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步驟（1)和步驟（5)中，所 述空氣的采集量均滿足如下條件：若所述空氣的潔凈度為100級，則所述空氣的采集量 為1000L ;若所述空氣的潔凈度為10000級，則所述空氣的采集量為500L ;若所述空氣的 100000級與100000級以上，則所述空氣的采集量為100L。
5. 根據(jù)權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，所述測定每個采樣 點的平皿中采集液的細菌含量，是按照國標GB4789. 2-2010進行測定的。
6. 用于檢測空氣中浮游細菌的套裝，含有浮游細菌采樣器、ATP熒光檢測儀以及記載 有權利要求1-5中任一所述方法的說明書。
7. 權利要求6所述套裝在定量檢測待測空氣中浮游細菌含量中的應用。
【文檔編號】G01N21/64GK104390948SQ201410680798
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權日:2014年11月24日
【發(fā)明者】侯玉柱, 柯潤輝, 宋全厚, 尹建軍, 田雨 申請人:中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院