一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一套斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，通過(guò)該方法測(cè)定根據(jù)培養(yǎng)不同天數(shù)栽培料中的外觀指標(biāo)、理化指標(biāo)和生物參數(shù)測(cè)定，測(cè)定菌包含水量、總糖含量、還原糖含量、可溶性蛋白含量及菌包中的酶活力，測(cè)定斑玉蕈菌包成熟度。本發(fā)明可為斑玉蕈生產(chǎn)過(guò)程菌包成熟度的測(cè)定提供依據(jù)，同時(shí)，各項(xiàng)內(nèi)在生物參數(shù)及生化指標(biāo)的建立，將為食用菌產(chǎn)業(yè)的后熟研究理論研究提供新的視角。
【專利說(shuō)明】一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物學(xué)真菌領(lǐng)域，具體的說(shuō)涉及一套斑玉蕈菌包成熟度的判定方法。

【背景技術(shù)】
[0002]斑玉蕈！即8腦(^60^)只.￡.81邑61(3界又名玉蕈，屬傘菌目八職1*1(^168，口蘑科1?1。11010111211:狀6216，玉蕈屬?。?127即8，它是一種低熱量、低脂肪的保健食品，正引起越來(lái)越多注重飲食健康的人們的關(guān)注。而其味比平菇鮮，肉比滑菇厚，質(zhì)比香菇韌，口感極佳，還具有獨(dú)特的蟹香味，在日本有”香在松茸、味在玉蕈”之說(shuō)，故又有真姬菇一稱。正在被越來(lái)越多高級(jí)餐館列入菜譜中。
[0003]斑玉蕈是近幾年福建省工廠化生產(chǎn)的重要品種之一。目前福建是全國(guó)重要斑玉蕈生產(chǎn)基地，產(chǎn)量占全國(guó)60-70%左右。斑玉蕈是一個(gè)低溫結(jié)實(shí)性品種，常規(guī)栽培易受環(huán)境因子的影響，造成產(chǎn)量不穩(wěn)定，質(zhì)量低劣，商品價(jià)值低，由于其在栽培生產(chǎn)中發(fā)菌較為緩慢，后熟培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，生產(chǎn)周期長(zhǎng)達(dá)120-150天以上，且易受外界環(huán)境因素影響，因此，在生產(chǎn)過(guò)程中存在許多問(wèn)題，目前斑玉蕈工廠化斑玉蕈普通存在以下問(wèn)題:
(1)不同廠家菌包裝料量不一，產(chǎn)量高低不同，生物學(xué)效率無(wú)法統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，原材料利用率低，生產(chǎn)成本無(wú)法控制；
(2)菌包培養(yǎng)成熟度普遍憑經(jīng)驗(yàn)，以菌包培養(yǎng)時(shí)間及外觀形態(tài)作為菌包成熟度判斷依據(jù)，導(dǎo)致每批次出菇不整齊，原料利用不充分，甚至出現(xiàn)厚菌皮，導(dǎo)致不出菇現(xiàn)象，造成巨大損失；
(3)由于冬季氣溫低，菌絲生長(zhǎng)慢，雖然培養(yǎng)時(shí)間夠，但往往菌包原料降解及營(yíng)養(yǎng)積累不夠，造成產(chǎn)量低，原料利用率低，究其原因主要是對(duì)菌包成熟度無(wú)法準(zhǔn)確判斷。
[0004]因此，建立科學(xué)的判斷菌包成熟度內(nèi)在生物參數(shù)及生化指標(biāo)為斑玉蕈標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題，這對(duì)高效穩(wěn)定斑玉蕈工廠化生產(chǎn)具有重要現(xiàn)實(shí)意義。
[0005]斑玉蕈是近幾年福建省工廠化生產(chǎn)的重要品種之一。目前福建是全國(guó)重要斑玉蕈生產(chǎn)基地，產(chǎn)量占全國(guó)60-70%左右。然而，斑玉蕈是栽培期較長(zhǎng)的食用菌，大約需要120-150天，這主要由于斑玉蕈菌絲培養(yǎng)必須經(jīng)一個(gè)生理成熟期(后熟期),才能長(zhǎng)出較好的菇蕾。因此，斑玉蕈菌絲培養(yǎng)過(guò)程成熟度的測(cè)定直接影響斑玉蕈的生物學(xué)效率和產(chǎn)量。
[0006]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明主要是提供一套斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，該方法通過(guò)測(cè)定斑玉蕈菌包外觀指標(biāo)、理化指標(biāo)和生物參數(shù)能方便地區(qū)分哪些菌包已經(jīng)成熟可以進(jìn)行出菇，哪些菌包還沒(méi)達(dá)到生理成熟不能出菇。
[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
1.斑玉蕈菌包成熟度外觀判斷指標(biāo)的建立
(1)不同培養(yǎng)時(shí)間菌絲顏色與形態(tài)變化程度觀察； (2)菌包不同培養(yǎng)時(shí)間與菌包彈性的變化分析；
2.斑玉蕈菌包成熟度理化指標(biāo)的建立
(1)斑玉蕈栽培料中含量的分析測(cè)定；
(2)菌包培養(yǎng)過(guò)程邱、含水量變化與菌包成熟度關(guān)系分析；
(3)菌包培養(yǎng)過(guò)程重量變化與菌包成熟度關(guān)系分析；
(4)菌包培養(yǎng)過(guò)程營(yíng)養(yǎng)積累與菌包成熟度相關(guān)性分析。
[0009]3.斑玉蕈菌包成熟度生物參數(shù)的建立
(1)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-纖維素酶活性的變化規(guī)律分析；
(2)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-蛋白酶活性的變化規(guī)律分析；
(3)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-木聚糖酶活性的變化規(guī)律分析；
(4)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-淀粉酶活性的變化規(guī)律分析；
(5)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-木質(zhì)素氧化酶活性的變化規(guī)律分析；
(6)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-錳過(guò)氧化物酶活性的變化規(guī)律分析；
(5)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-漆酶活性的變化規(guī)律分析；
4.菌包成熟度與生物學(xué)效率關(guān)系的研究
(1)不同成熟度的菌包與斑玉蕈產(chǎn)量關(guān)系分析；
(2)不同成熟度的菌包與出菇品質(zhì)關(guān)系研究。
[0010]通過(guò)四大系統(tǒng)的建立，從多個(gè)維度對(duì)斑玉蕈的成熟度進(jìn)行精確測(cè)定。
[0011]具體方法如下:
一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，通過(guò)斑玉蕈菌包樣品處理，測(cè)定菌包含水量、總糖含量、還原糖含量、可溶性蛋白含量及菌包中的酶活力，測(cè)定斑玉蕈菌包成熟度。
[0012]所述的樣品處理步驟為:斑玉蕈菌包培養(yǎng)60天開(kāi)始至140天內(nèi)，每隔10天取重量相差在以內(nèi)且10天內(nèi)重量減少在的菌袋的菌包做為實(shí)驗(yàn)樣品；將菌包每隔6(^1等分成上中下三部分，各將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢杈鶆?，精確稱取10 8培養(yǎng)料于50此燒杯中，力口40 III[蒸懼水于25搖床搖勻2卜,取液體于50 111[離心管，9000 ^/舊!!離心15 111111，上清液即為粗酶液；另稱取20 8于平皿中，80 I烘干至恒重，測(cè)定含水量。
[0013]所述的總糖含量測(cè)定方法:精確稱取0.25 8烘干至恒重的栽培料于10此離心管，加入5 III[雙蒸水和1.5此濃鹽酸，沸水浴中水解3 11，靜置冷卻后將上清液倒入50此錐形瓶，重新加入5 III[雙蒸水和1.5 III[濃鹽酸，沸水浴中水解2 11，靜置冷卻后將上清并入50 III[錐形瓶中，用雙蒸水洗漆定容至50此?；靹蚝笕? III[重新定容至50此。然后9000 170111離心15 1111110取1此上清液，加入1此5 %苯酹，快速加入5 III[濃硫酸，靜置10 111111，混勻，30水浴20 111111。490 11111測(cè)定吸光度。樣品吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程即可得樣品的總糖濃度。樣品總糖濃度9 8/1111 =樣品稀釋的總糖濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
[0014]所述的含水量測(cè)定方法:使用校準(zhǔn)后邱計(jì)測(cè)定上清液測(cè)定邱，記錄平皿原始重量，每天稱量平皿和樣品總重量至重量不再減小則說(shuō)明完全烘干，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算含水量。
[0015]所述的還原糖含量測(cè)定方法:精確稱取烘干至恒重的栽培料0.5 8于10此離心管中，加入5 III[雙蒸水于沸水浴中煮沸2 11，然后9000 1/111111離心15 111111，取1 111[上清液，加入1.5 1111 0吧試劑，再沸水浴7 111111，然后用冷流水冷卻終止反應(yīng)，用蒸餾水定容至10此，充分混勻，在540 11111下測(cè)吸光度值，并代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程查出相應(yīng)的葡萄糖含量。
[0016]所述的可溶性蛋白含量測(cè)定方法:取1此上清液，加入5 的考馬斯亮藍(lán)「250工作液，顯色10 111111后，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定595 11111處吸光值，蒸餾水做為空白對(duì)照，樣品吸光度代入牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程求得樣品的蛋白濃度，樣品蛋白質(zhì)濃度^ 8/ 1111 =樣品稀釋的蛋白質(zhì)濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
[0017]所述的菌包中的酶活力測(cè)定方法:在520 11111下測(cè)吸光度值，并從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的葡萄糖含量，計(jì)算成酶活力；酶活力單位的定義為:在上述條件下每分鐘水解底物生成1 9 8葡萄糖所需的酶量定義為1個(gè)酶活力單位“I”。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:目前斑玉蕈生產(chǎn)企業(yè)主要依靠菌包培養(yǎng)時(shí)間和經(jīng)驗(yàn)來(lái)測(cè)定菌包的成熟度，由于斑玉蕈生產(chǎn)企業(yè)在栽培料組成、裝料量、培養(yǎng)條件和管理方式存在較大差異，造成菌包成熟度與菌包培養(yǎng)時(shí)間往往不一致，企業(yè)因無(wú)法準(zhǔn)確判斷菌包是否成熟導(dǎo)致生物學(xué)效率低下和產(chǎn)量不高，有時(shí)甚至出現(xiàn)厚菌皮不出菇現(xiàn)象，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，可為斑玉蕈工廠化栽培過(guò)程菌包成熟度提供一科學(xué)判斷依據(jù)。

【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1
取樣及樣品處理斑玉蕈菌包培養(yǎng)60天開(kāi)始至140天內(nèi)，每隔10天取重量相差在2呂以內(nèi)，且10天內(nèi)重量減少在的菌袋的菌包做為實(shí)驗(yàn)樣品。將菌包每隔6挪等分成上中下三部分。各將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢杈鶆?，精確稱取10 8培養(yǎng)料于50此燒杯中，加40 0[蒸餾水于25 I搖床搖勻2卜，取液體于50 III[離心管，9000離心15 -11,上清液即為粗酶液。另稱取20 8于平皿中，80 I烘干至恒重，測(cè)定含水量。
[0020]1.斑玉蕈菌包成熟度外觀判斷指標(biāo)的建立
接種后的斑玉蕈菌包25 I恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天定時(shí)拍照并測(cè)量菌絲長(zhǎng)度，并且記錄菌絲顏色變黃長(zhǎng)度和菌包變軟部分距離袋口的距離。從而確定不同同培養(yǎng)時(shí)間菌絲顏色與形態(tài)變化程度觀察以及菌包彈性的變化分析。
[0021]2.斑玉蕈菌包成熟度理化指標(biāo)的建立 (1)斑玉蕈栽培料中含量的分析測(cè)定
總糖含量測(cè)定精確稱取0.25 8烘干至恒重的栽培料于10此離心管，加入5 0[雙蒸水和1.5 III[濃鹽酸，沸水浴中水解3 11，靜置冷卻后將上清液倒入50此錐形瓶，重新加入5 III[雙蒸水和1.5此濃鹽酸，沸水浴中水解2 11，靜置冷卻后將上清并入50 0[錐形瓶中，用雙蒸水洗漆定容至50此?；靹蚝笕?此重新定容至50此。然后9000 1-/111111離心151111110取1此上清液，加入1此5 %苯酚，快速加入5此濃硫酸，靜置10 ―!!，混勻，30水浴20…!!。490 11111測(cè)定吸光度。樣品吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程即可得樣品的總糖濃度。樣品總糖濃度(9 8/1110 =樣品稀釋的總糖濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
[0022](2)菌包培養(yǎng)過(guò)程1)?、含水量變化與菌包成熟度關(guān)系分析
使用校準(zhǔn)后1)?計(jì)測(cè)定上清液測(cè)定記錄平皿原始重量，每天稱量平皿和樣品總重量至重量不再減小則說(shuō)明完全烘干，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算含水量。
[0023](3)菌包培養(yǎng)過(guò)程重量變化與菌包成熟度關(guān)系分析
取接種后的斑玉蕈菌包20包于25 I恒溫培養(yǎng)室培養(yǎng)，每隔5天稱量并記錄一次重量。
[0024](4)菌包培養(yǎng)過(guò)程營(yíng)養(yǎng)積累與菌包成熟度相關(guān)性分析。
[0025]還原糖含量測(cè)定精確稱取烘干至恒重的栽培料0.5 8于10此離心管中，加入5III[雙蒸水于沸水浴中煮沸2 11。然后9000 17111111離心15 1111110取1此上清液，加入1.51111 0吧試劑，再沸水浴7 111111，然后用冷流水冷卻終止反應(yīng)，用蒸餾水定容至10 111匕充分混勻。在540 11111下測(cè)吸光度值，并代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程查出相應(yīng)的葡萄糖含量。
[0026]可溶性蛋白測(cè)定取1此上清液，加入5 1111的考馬斯亮藍(lán)「250工作液，顯色10111111后，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定595鹽處吸光值。蒸餾水做為空白對(duì)照。樣品吸光度代入牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程求得樣品的蛋白濃度。樣品蛋白質(zhì)濃度(08/ 1111)品稀釋的蛋白質(zhì)濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
[0027]3.斑玉蕈菌包成熟度生物參數(shù)的建立
(1)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-纖維素酶活性的變化規(guī)律分析；
在試管中加入1此1%羧甲基纖維素鈉，50預(yù)熱5舊口后’加入^).。111[粗酶液，50。〇保溫60 111111，在試管中加入1.5 1111 0吧試劑，再沸水浴7 111111，然后用冷流水冷卻終止反應(yīng)，用蒸懼水定容至10 III匕充分混勻。用滅活酶液做空白對(duì)照。在520 11111下測(cè)吸光度值，并從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的葡萄糖含量，計(jì)算成酶活力。酶活力單位的定義為:在上述條件下每分鐘水解底物生成1 9 8葡萄糖所需的酶量定義為1個(gè)酶活力單位“I”。
[0028]( 2 )菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-蛋白酶活性的變化規(guī)律分析
取2此離心管，加入粗酶液液0.5 III匕置于401水浴中預(yù)熱2 111111，再各加入經(jīng)同樣預(yù)熱的酪蛋白0.5 III匕精確保溫30 111111后，立即加入0.4 11101/1三氯乙酸1此，以終止反應(yīng)，9000 17111111離心2 111111，然后另取10此離心管，加入上清液1 III匕再加0.4 11101/1碳酸鈉5 III匕加入福林試劑100 搖勻，40 I保溫發(fā)色20 -11后進(jìn)行光密度測(cè)定。對(duì)照試驗(yàn)測(cè)定方法同上，唯在加酪蛋白之前先加0.4 11101三氯乙酸1 III匕使酶失活后再加入酪蛋白。吸光度代入酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程即可求得生成酪氨酸量，計(jì)算成酶活力。酶活力單位的定義為:在40下每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生1 0 8 酪氨酸，定義為1個(gè)蛋白酶活力單位1”。
[0029](3)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-木聚糖酶活性的變化規(guī)律分析
吸取1%木聚糖0.75 III[到試管中，50預(yù)熱5爪化后，加入0.25 且酶液，50保溫30 111111，在試管中加入1.5 1111 0吧試劑，再沸水浴7 111111，然后用冷流水冷卻終止反應(yīng)，用蒸懼水定容至10 III匕充分混勻。用滅活酶液做空白對(duì)照。在550 11111下測(cè)吸光度值。酶活力單位的定義為:在502的條件下每分鐘水解底物生成1 4 8 0-木糖所需的酶量定義為1個(gè)酶活力單位“I”。
[0030](4)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-淀粉酶活性的變化規(guī)律分析
吸取4此可溶性淀粉溶液于試管中，加入磷酸緩沖液1此，搖勻后于50 I恒溫水浴中預(yù)熱5111111。加入粗酶液500 111，搖勻計(jì)時(shí)，于50反應(yīng)30 1111110立即吸取反應(yīng)液1此，加入盛有0.5 1111稀鹽酸和5 1111稀碘液的試管中，搖勻。并以0.5 1111稀鹽酸和5此碘稀釋液為空白，在660 11111波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光值。根據(jù)回歸方程，計(jì)算反應(yīng)后溶液中淀粉的濃度。淀粉酶活力單位定義:在601，邱=6.0條件下，每分鐘液化1 0 8可溶性淀粉，定義為1個(gè)淀粉酶活力單位1”。
[0031](5)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-木質(zhì)素氧化酶活性的變化規(guī)律分析準(zhǔn)確移取擬緩沖液(邱=4.5)2.7 1111,1 11111101/1八813溶液0.2 111匕混合搖勻，在30。(^恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱5 111111。將上述混合試劑倒入容積為3 1111的比色皿中，420 11111處調(diào)零。準(zhǔn)確加入待測(cè)酶液100 9 [，立即記錄吸光值，每隔30 8記錄1次，共記錄3 1111110酶活力單位的定義為:每分鐘氧化1 9 11101底物所需要的酶量為一個(gè)酶活單位“I”。
[0032](6)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-錳過(guò)氧化物酶活性的變化規(guī)律分析
準(zhǔn)確移取4 11111101/1的愈創(chuàng)木酚0.7此，100 11111101/1邱4.5琥珀酸鈉緩沖液2 1111, 2.5臟￠)1/[的??！202 5 11111101/[的111304 0.2此，混合，搖勻，在40恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱51111110將上述混合試劑倒入容積為3 1111的比色皿中，465 11111處調(diào)零。加入0.2此酶液，立即記錄吸光值，每隔30 8記錄1次，共記錄3 1111110酶活力單位的定義為:每分鐘氧化10 11101 111804的酶量為一個(gè)酶活單位“V ”。
[0033](5)菌包培養(yǎng)過(guò)程關(guān)鍵酶-漆酶活性的變化規(guī)律分析
準(zhǔn)確移取0.2 11101/1酒石酸鈉緩沖液(邱3.0)1.5此，15臟乂/!藜蘆醇1.0 1111,0.04III[酶液，混合，搖勻，在30。(^恒溫水浴鍋中水浴預(yù)熱5 1111110將上述混合試劑倒入容積為3III[的比色皿中，310 11111處調(diào)零。以15 11111101/1 ??！202 0.01 III[啟動(dòng)反應(yīng)，立即記錄吸光值，每隔6 8記錄1次，共記錄1 111111。酶活力單位的定義為:每分鐘使1 9 11101藜蘆醇氧化成藜蘆醛所需要的酶量為一個(gè)酶活單位“I”。
[0034]4.菌包成熟度與生物學(xué)效率關(guān)系的研究
(1)不同成熟度的菌包與斑玉蕈產(chǎn)量關(guān)系分析
取25 I培養(yǎng)60、70至140天的斑玉蕈菌包各24包，稱量并記錄出菇前原始重量，于14I進(jìn)行出菇管理，采摘后精確稱量切去菇腳斑玉蕈重量、進(jìn)行產(chǎn)量顯著性分析，稱量剩余菌包重量，計(jì)算生物學(xué)效率。
[0035](2)不同成熟度的菌包與出菇品質(zhì)關(guān)系研究
拍照并用直尺測(cè)量斑玉蕈菇柄長(zhǎng)度，子實(shí)體大小厚度、記錄子實(shí)體質(zhì)地軟硬程度，取100 8斑玉蕈子實(shí)體于80 I烘干箱烘干至恒重，測(cè)定含水量。
[0036]根據(jù)培養(yǎng)不同天數(shù)栽培料中的外觀指標(biāo)、理化指標(biāo)和生物參數(shù)測(cè)定，得到在培養(yǎng)到第120天時(shí)，菌包上中下均變成淺黃色，并且柔軟，總糖含量下降至777.9 ^ 并且變化平緩，上中下部邱值達(dá)到一致，菌包含水量達(dá)到68.7%，還原糖含量下降至516.5 4邑/III[，可溶性蛋白下降至132.6 ^ 8/此，纖維素酶活力維持在1.58口?匕蛋白酶活力下降至4.020匕木聚糖酶活性上升至14.1 0匕淀粉酶活力下降并維持在1.79^/^1左右，木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活力上升至2.411/！?。∝板i過(guò)氧化物酶上部到下部逐漸遞增至40.361/?。。∝捌崦富盍ι现邢虏烤_(dá)到173.8 1/1，這時(shí)出菇產(chǎn)量和生物學(xué)效率最高。每千克干栽培料可生產(chǎn)879.98鮮菇，生物學(xué)效率高達(dá)88%。
[0037]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:通過(guò)斑玉蕈菌包樣品處理，測(cè)定菌包含水量、總糖含量、還原糖含量、可溶性蛋白含量及菌包中的酶活力，測(cè)定斑玉蕈菌包成熟度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的樣品處理步驟為:斑玉蕈菌包培養(yǎng)60天開(kāi)始至140天內(nèi)，每隔10天取重量相差在2g以內(nèi)且10天內(nèi)重量減少在7g-9g的菌袋的菌包做為實(shí)驗(yàn)樣品；將菌包每隔6cm等分成上中下三部分，各將培養(yǎng)料充分?jǐn)嚢杈鶆?，精確稱取10 g培養(yǎng)料于50 mL燒杯中，加40 mL蒸餾水于25°〇搖床搖勻2 h，取液體于50 mL離心管，9000 r/min離心15 min，上清液即為粗酶液；另稱取20 g于平皿中，80 °C烘干至恒重，測(cè)定含水量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的總糖含量測(cè)定方法:精確稱取0.25 g烘干至恒重的栽培料于10 mL離心管，加入5 mL雙蒸水和1.5 mL濃鹽酸,沸水浴中水解3 h,靜置冷卻后將上清液倒入50 mL錐形瓶,重新加入5mL雙蒸水和1.5 mL濃鹽酸，沸水浴中水解2 h，靜置冷卻后將上清并入50 mL錐形瓶中，用雙蒸水洗漆定容至50 mL ； 混勻后取I mL重新定容至50 mL;然后9000 r/min離心15 min ;取I mL上清液,加入I mL 5 %苯酚，快速加入5 mL濃硫酸，靜置10 min，混勻，30水浴20 mi ；490 nm測(cè)定吸光度；樣品吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程即可得樣品的總糖濃度；樣品總糖濃度μ g/mL =樣品稀釋的總糖濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的含水量測(cè)定方法:使用校準(zhǔn)后PH計(jì)測(cè)定上清液測(cè)定pH，記錄平皿原始重量，每天稱量平皿和樣品總重量至重量不再減小則說(shuō)明完全烘干，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算含水量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的還原糖含量測(cè)定方法:精確稱取烘干至恒重的栽培料0.5 g于10 mL離心管中，加入5 mL雙蒸水于沸水浴中煮沸2 h,然后9000 r/min離心15 min,取I mL上清液,加入1.5 mL DNS試劑，再沸水浴7 min，然后用冷流水冷卻終止反應(yīng)，用蒸餾水定容至10 mL，充分混勻，在540 nm下測(cè)吸光度值，并代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程查出相應(yīng)的葡萄糖含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的可溶性蛋白含量測(cè)定方法:取I mL上清液，加入5 mL的考馬斯亮藍(lán)G-250工作液，顯色10min后，在紫外分光光度計(jì)上測(cè)定595 nm處吸光值，蒸餾水做為空白對(duì)照，樣品吸光度代入牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程求得樣品的蛋白濃度，樣品蛋白質(zhì)濃度Ug/ mL=樣品稀釋的蛋白質(zhì)濃度X樣品稀釋倍數(shù)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種斑玉蕈菌包成熟度的測(cè)定方法，其特征在于:所述的菌包中的酶活力測(cè)定方法:在520 nm下測(cè)吸光度值，并從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的葡萄糖含量，計(jì)算成酶活力；酶活力單位的定義為:在上述條件下每分鐘水解底物生成I μ g葡萄糖所需的酶量定義為I個(gè)酶活力單位“U”。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK104316478SQ201410583701
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】胡開(kāi)輝, 張職視, 孫淑靜 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)