復合維生素添加劑中維生素b12含量的檢測方法
【專利摘要】一種復合維生素添加劑中維生素B12含量的檢測方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領域。所述檢測方法，包括以下步驟：（1）配制維生素B12濃度為1mg/ml的儲備液；然后配制成濃度各為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的系列標準濃度的溶液，在一定的色譜條件下上機測定并計算回歸方程及相關系數(shù)。（2）稱取測試樣品在相同的色譜條件下上機測定，根據(jù)標準樣峰高、標準樣濃度與測試樣品峰高計算測試樣品濃度。本發(fā)明所述的檢測方法，其測定精密度和準確度能滿足乳制品分析的要求，具有準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低等特點，可作為常規(guī)檢測方法應用。
【專利說明】復合維生素添加劑中維生素BI2含量的檢測方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種復合維生素添加劑中維生素B12含量的檢測方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領域。

【背景技術】
[0002]維生素B12是所有維生素中分子最大和最復雜的一種，但是人體對它的需要量也許是所有維生素中最少的一種，每天只需3徽克左右即可。過量的維生素B12也會產(chǎn)生副作用，大量維生素B12也可導致葉酸缺乏。維生素B12可以提高葉酸的利用率，若缺乏維生素B12，則葉酸的利用受到影響。維生素B12缺乏還可導致周圍神經(jīng)炎。小孩缺乏維生素B12的早期表現(xiàn)是精神情緒異常、表情呆滯、少哭少鬧、反應遲鈍、愛睡覺、手足無意識運動或頭與肢體顫動，最后導致貧血。美國紐約的哥倫比亞大學和丹佛的科羅拉多大學的專家對323名缺乏維生素B12的人進行考察，發(fā)現(xiàn)其中將近半數(shù)的人(共141人)出現(xiàn)了程度不同的神經(jīng)損傷及精神性癥狀。癥狀包括癡呆、抑郁、記憶障礙、平衡功能失調(diào)等，有的還有精神分裂癥的表現(xiàn)。當醫(yī)生給這些人補充維生素B12后，許多患者的精神性癥狀完全消失。
[0003]根據(jù)目前已報道的資料，測定維生素B12主要有四種方法:比色法、原子吸收分光光度法、高效液相色譜法及微生物法。微生物法是測定如食品中維生素B12的通用方法，該法靈敏度特別高，可測定出樣液中0.01ng/ml的含量。但由于該法操作繁瑣，檢驗周期長，技術難度大，影響因素多及重現(xiàn)性差、成本高等問題而不能廣泛應用。特別是用此法測定添加劑等維生素B12含量高的樣品，由于稀釋倍數(shù)較大且難于掌握等使測定誤差較大，不很適宜；而前三種方法大都用于藥品類等含量較高的樣品(一般含量mg/g級)。而奶粉專用復合維生素添加劑中的維生素B12含量一般為10μ g/g或更低(國標規(guī)定嬰幼兒配方奶粉中維生素B12含量為彡0.8 μ g/100g)。因此，現(xiàn)有的檢測方法一般很難用于檢測嬰幼兒配方奶粉中維生素B12含量。
[0004]因此研究一種準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B12含量的檢測方法很有必要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B12含量的檢測方法。
[0006]所述的復合維生素添加劑中維生素B12含量的檢測方法，包括以下步驟:
(I)配制維生素B12濃度為lmg/ml的儲備液；然后配制成濃度各為0.5、1.0,2.0,3.0、
4.0,5.0 μ g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別為20 μ L。在一定的色譜條件下上機測定并計算回歸方程及相關系數(shù)。
[0007](2)稱取測試樣品1g放于125ml三角瓶中。加入30ml30-50°C的蒸餾水溶解后放入超聲波中，10分靜后取出，轉入50ml容量瓶中加入10%硫酸鋅溶液5ml定定容，混勻后用濾紙過濾，濾液通過0.45 μ m的濾膜后在相同的色譜條件下上機測定。根據(jù)標準樣峰高、標準樣濃度與測試樣品峰高計算測試樣品濃度。
[0008]優(yōu)選的，本發(fā)明所述的色譜條件為色譜柱為ODS色譜柱，色譜柱理論塔板數(shù)為2216 ;柱溫為室溫；流動相流速lml/min ;測定波長361nm ;流動相為磷酸二氫鈉(10g/LpH=3.5):甲醇=70:30的混合液。
[0009]本發(fā)明所述的檢測方法，得到的標準曲線為:
Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976。結果表明:在測定范圍內(nèi)B12濃度與峰高間呈正相關，相關性好，可用于外標法進行定量測定。
[0010]本發(fā)明所述的檢測方法，維生素B2含量的計算公式為: 維生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 為測試樣峰高(mm)，
h2為標準樣峰高(mm), V為測試樣液體積(mL),m為測試樣質(zhì)量(g), C為維生素B12標準溶液濃度(yg/ml)。
[0011 ] 本發(fā)明所述的檢測方法中，采用高效液相色譜法測定復合維生素添加劑中維生素B12含量，由于樣品中往往用有機物作載體，所以用蒸餾水直接溶解后即使通過濾膜也會出現(xiàn)混濁的現(xiàn)象，而用硫酸鋅作沉淀劑時可有效把有機成分沉淀，待測液澄清，更有利于上機測定。經(jīng)測定，方法回收率與精密度試驗結果較好，回收率在90-102%間，平均為96.4%，樣品重復測定12次的變異系數(shù)為0.54%，此方法檢出限為4ng，計算可得嬰幼兒配方奶粉專用維生素添加劑中維生素B12的檢出限為I μ g/g，可滿足任何奶粉專用維生素添加劑中維生素B12的測定。
[0012]本發(fā)明所述的檢測方法，采用HPLC法測定嬰幼兒配方奶粉專用維生素添加劑中維生素B12其測定精密度和準確度能滿足乳制品分析的要求，具有準確度高、重復性高、操作簡便、檢測極限低等特點，可作為常規(guī)檢測方法應用。

【具體實施方式】
[0013]實施例一:
(I)配制維生素B12濃度為lmg/ml的儲備液；然后配制成濃度各為0.5、1.0,2.0,3.0、4.0、5.0 μ g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別為20 μ L。在一定的色譜條件下(色譜柱為ODS色譜柱，色譜柱理論塔板數(shù)為2216 ;柱溫為室溫；流動相流速lml/min ;測定波長36Inm ;流動相為磷酸二氫鈉(10g/L pH=3.5):甲醇=70:30的混合液)上機測定并計算回歸方程及相關系數(shù)。得到的標準曲線為:
Y=-0.1340+0.0009592X,R=0.9976。結果表明:在測定范圍內(nèi)B12濃度與峰高間呈正相關，相關性好，可用于外標法進行定量測定。
[0014](2)稱取測試樣品1g放于125ml三角瓶中。加入30ml30-50°C的蒸餾水溶解后放入超聲波中，10分靜后取出，轉入50ml容量瓶中加入10%硫酸鋅溶液5ml定定容，混勻后用濾紙過濾，濾液通過0.45 μ m的濾膜后在相同的色譜條件下上機測定。根據(jù)標準樣峰高、標準樣濃度與測試樣品峰高計算測試樣品濃度。
[0015]維生素B2含量的計算公式為: 維生素82含量(“8/10(^)=011\￥\0/012\111)\100，其中 hi 為測試樣峰高(mm)，
h2為標準樣峰高(mm), V為測試樣液體積(mL),m為測試樣質(zhì)量(g), C為維生素B12標準溶液濃度(μ g/ml)。
[0016]實施例二:重復性試驗、回收率試驗以及檢出極限試驗
經(jīng)測定，方法回收率與精密度試驗結果較好，回收率在90-102%間，平均為96.4%，樣品重復測定12次的變異系數(shù)為0.54%，此方法檢出限為4ng，計算可得嬰幼兒配方奶粉專用維生素添加劑中維生素B12的檢出限為I μ g/g，可滿足任何奶粉專用維生素添加劑中維生素B12的測定。
【權利要求】
1.復合維生素添加劑中維生素B12含量的檢測方法，包括以下步驟: (1)配制維生素B12濃度為lmg/ml的儲備液；然后配制成濃度各為0.5、1.0,2.0,3.0、4.0,5.0 μ g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別為20 μ L，在一定的色譜條件下上機測定并計算回歸方程及相關系數(shù)； (2)稱取測試樣品1g放于125ml三角瓶中； 加入30ml30-50°C的蒸餾水溶解后放入超聲波中，10分靜后取出，轉入50ml容量瓶中加入10%硫酸鋅溶液5ml定定容,混勻后用濾紙過濾,濾液通過0.45 μ m的濾膜后在相同的色譜條件下上機測定，根據(jù)標準樣峰高、標準樣濃度與測試樣品峰高計算測試樣品濃度。
2.如權利要求1所述的復合維生素添加劑中維生素B12含量的檢測方法，其特征在于所述的色譜條件為色譜柱為ODS色譜柱，色譜柱理論塔板數(shù)為2216 ;柱溫為室溫；流動相流速lml/min ;測定波長361nm ;流動相為10g/L、pH=3.5的磷酸二氫鈉:甲醇=70:30的混合液。
【文檔編號】G01N30/06GK104330484SQ201410573261
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權日:2014年10月23日
【發(fā)明者】李勇, 劉文斌 申請人:西安米億生物科技有限公司