一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法，該方法包括HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法。該方法通過HPLC法和簡單的梯度洗脫建立一組特征峰，并將檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)特征峰進(jìn)行對比。該方法還公開了黃香藥物組合物及其制劑的TLC色譜鑒別。本發(fā)明的檢測方法操作簡便、快速、檢測成本低、重現(xiàn)性好、信息量大，所得樣品的HPLC特征峰明顯，比對容易，且能較全面反映黃香藥物組合物及其制劑的配方組成。
【專利說明】-種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，大黃有顯著地降血脂作用；廣蕾香是臨床上常用的芳香化濕 藥，其味辛、微溫，具有芳香化濁的功效，特別是其揮發(fā)油成分有極其顯著地藥理活性，依據(jù) 傳統(tǒng)古方的黃香顆粒在臨床用于高血脂證取得了良好的療效。黃香顆粒收載于國家藥品標(biāo) 準(zhǔn)部分（內(nèi)科也系分冊），標(biāo)準(zhǔn)編號；WS-10902狂D-0902)-2002-2012Z，黃香顆粒的組成為 大黃200g、廣蕾香200g及藏糖。
[0003] 目前該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有大黃及百秋李醇的鑒別和大黃素含量測定項，其檢測結(jié) 果不能完全體現(xiàn)黃香制劑整體質(zhì)量，且操作繁瑣，檢索現(xiàn)有技術(shù)中也未發(fā)現(xiàn)對于黃香顆粒 的進(jìn)行整體測定的方法及技術(shù)。
[0004] HPLC特征圖譜檢測方法具有操作簡便、快速、檢測成本低、重現(xiàn)性好和信息量大等 優(yōu)點，對于藥物組合物的檢測具有重要的意義?，F(xiàn)有技術(shù)中未發(fā)現(xiàn)同時檢測大黃和廣蕾香 的特征圖譜檢測方法，但對大黃或廣蕾香的特征圖譜檢測方法很多，如《大黃不同炮制品的 HPLC特征圖譜比較研究》（2011年3月第31卷第3期的《湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》）也W甲 醇-0. 05%磯酸水溶液為流動相建立了大黃的特征圖譜檢測方法，但其梯度變化變化復(fù)雜， 甲醇比例從10%逐漸變到90%，總時間80min，對照品多達(dá)8種，實驗操作繁瑣?！禜PLC建 立廣蕾香特征圖譜的方法學(xué)研究》（《中成藥》2005年27卷12期）也建立了廣蕾香的特征 圖譜檢測方法，也W甲醇-0. 05%磯酸水溶液為流動相，W 26個檢測峰為指標(biāo)，比對困難， 實驗操作繁瑣，要求較高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明公開了一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法， 該方法包括HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法。
[000引術(shù)語說明：
[0007] 黃香顆粒是國家藥品標(biāo)準(zhǔn)部分（內(nèi)科也系分冊）記載的藥品名稱。
[0008] 黃香藥物組合物及其制劑包括黃香顆粒藥物組合物及用黃香顆粒原料藥配方制 備的制劑。
[0009] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0010] 一種原料藥組成為大黃200重量份、廣蕾香200重量份的黃香藥物組合物及其制 劑的檢測方法，該方法包括如下HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法：
[0011] HPLC特征圖譜檢測法：
[0012] a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗；W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇-體 積份數(shù)比0. 5 %磯酸水溶液為流動相，按如下條件梯度洗脫；0 - 30分鐘甲醇體積比例 40% - 80%，30 - 60分鐘甲醇體積比例保持80%;檢測波長為280?300皿；流速；0. 8? I. 2ml/min ;分析時間；60分鐘；理論板數(shù)按大黃素峰計算不低于2000 ;
[0013] b)對照品溶液的制備；取大黃素對照品，加甲醇制成每Iml含大黃素0. 2mg的溶 液，即得；
[0014] C)供試品溶液的制備；取黃香藥物組合物或其制劑研細(xì)后粉末l-5g，加入甲醇 IO-SOml，超聲處理30-40分鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0015] d)檢測；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?15U 1，注入高效液相色譜 儀，記錄60分鐘內(nèi)的色譜圖；所得圖譜包含黃香藥物組合物或其制劑的特征峰，各特征峰 相對保留時間誤差不超過10% ;
[001引 TLC鑒別檢測法：
[0017] 取黃香藥物組合物或其制劑2-5g，加沸程60-9(TC石油離10-30ml，超聲處理 30min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加沸程60-9(TC石油離2ml使溶解，作為供試品溶液；取 大黃對照藥材Ig,同法制得大黃對照藥材溶液；取廣蕾香對照藥材Ig,同法制得廣蕾香對 照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法，吸取上述H種溶液各10 U 1，分別點于同一娃膠G薄 層色譜板上，W體積份數(shù)比為3-5:0. 5-2:0. 2-1的沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上 清液為展開劑，展開，取出，瞭干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的英光斑點。
[0018] 本發(fā)明優(yōu)選的，一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法，其中HPLC特征圖譜檢 測法中黃香藥物組合物或其制劑的特征峰為11個，其中9號峰大黃素為標(biāo)準(zhǔn)峰，11個峰的 相對保留時間分別為 0. 195, 0. 208, 0. 271，0. 428, 0. 505, 0. 531，0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114 ,1. 335。
[0019] 本發(fā)明優(yōu)選的，一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法，其中HPLC特征圖譜檢 測方法中的檢測波長為290nm ;流速為1. Oml/min ;進(jìn)樣量為10 y 1。
[0020] 本發(fā)明優(yōu)選的，一種黃香藥物組合物及其制劑的檢測方法，其中TLC鑒別檢測法 展開劑沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上清液體積份數(shù)比為4:1:0. 5。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選的，一種原料藥組成為大黃200重量份、廣蕾香200重量份的黃香顆粒 的檢測方法，該方法包括如下HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法：
[0022] HPLC特征圖譜檢測法：
[0023] a)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗；W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇-體 積份數(shù)比0. 5 %磯酸水溶液為流動相，按如下條件梯度洗脫；0 - 30分鐘甲醇體積比例 40%-80%，30 - 60分鐘甲醇體積比例保持80%;檢測波長為290皿；流速；1.01111/111111; 分析時間；60分鐘；理論板數(shù)按大黃素峰計算不低于2000 ;
[0024] b)對照品溶液的制備；取大黃素對照品，加甲醇制成每Iml含大黃素0. 2mg的溶 液，即得；
[00巧]C)供試品溶液的制備；取黃香顆粒研細(xì)后粉末4g，加入甲醇50ml，超聲處理30分 鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0026] d)檢測；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入高效液相色譜儀， 記錄60分鐘內(nèi)的色譜圖；所得圖譜包含黃香藥物組合物或其制劑的特征峰，各特征峰相對 保留時間誤差不超過10% ;
[0027] TLC鑒別檢測法：
[0028] 取黃香顆粒3g，加沸程60-9(TC石油離25ml，超聲處理30min，放冷，濾過，濾液蒸 干，殘渣加沸程60-9(TC石油離2ml使溶解，作為供試品溶液；取大黃對照藥材Ig,同法制得 大黃對照藥材溶液；取廣蕾香對照藥材Ig,同法制得廣蕾香對照藥材溶液；照中國藥典薄 層色譜法，吸取上述H種溶液各10 U 1，分別點于同一娃膠G薄層色譜板上，W體積份數(shù)比 為4:1:0. 5的沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上清液為展開劑，展開，取出，瞭干，置 365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的英 光斑點。
[0029] 本發(fā)明所述的制劑是指取黃香顆粒原料藥，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨 床可接受的任何一種劑型，包括但不限于丸劑、微丸、滴丸、片劑、膠囊、飲片、分散片。
[0030] 本說明書中所述的重量份與體積份的單位對應(yīng)關(guān)系為g/ml或kg/1。
[0031] 發(fā)明的有益效果：
[0032] 本發(fā)明的檢測方法操作簡便、快速、檢測成本低、重現(xiàn)性好、信息量大，所得樣品的 HPLC特征峰明顯，比對容易，且能較全面反映黃香藥物組合物及其制劑的配方組成。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0033] 圖1為黃香顆粒的HPLC標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜；
[0034] 圖2為大黃素標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜；
[0035] 圖3為黃香顆粒的TLC鑒別圖譜。
[003引其中，圖1、圖2的橫坐標(biāo)是時間，單位：分鐘（min);縱坐標(biāo)是電壓，單位：伏特 (Volts)。圖3中1為大黃對照藥材，2為黃香顆粒，3為廣蕾香對照藥材。

【具體實施方式】
[0037] 下述實驗例和實施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。
[0038] 實驗例1 ;黃香藥物組合物特征圖譜的建立
[0039] 試驗儀器；高效液相色譜儀；日立心2100粟心2400紫外檢測器
[0040] 電子天平：島津AUW-220D型
[0041] 紫外分光光度計；島津UV-2450型
[004引對照品；大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所）批號：110756-200110
[0043] 供試品：黃香顆粒（金巧藏藥股份有限公司）批號；20100105、20100806、 20110204、20110902、20120103、20120704、20130207、20130906、20140102、20140503
[0044] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗；W十八焼基娃焼鍵合娃膠為填充劑；W甲醇（A)-體 積份數(shù)比0. 5%磯酸水溶液炬）為流動相，梯度洗脫；0?30分鐘甲醇由40%升至80%， 30?60分鐘甲醇保持80% ;檢測波長為290nm ;柱溫；35°C ;流速；1. Oml/min ;分析時間： 60分鐘。理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于2000 ;
[0045] 對照品溶液的制備；取大黃素對照品適量，加甲醇制成每Iml含大黃素0. 2mg的溶 液，即得；
[0046] 供試品溶液的制備；取黃香藥物組合物或其制劑研細(xì)后粉末2g，加入甲醇25ml， 超聲處理30分鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0047] 檢測波長選擇：按按供試品溶液的制備方法得到供試品溶液，190-400nm波長范 圍內(nèi)進(jìn)行掃描，根據(jù)紫外吸收圖譜，選定290nm為檢測波長。
[0048] 高效液相色譜法測定標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜：取10批黃香顆粒按供試品溶液的制備方法 得到供試品溶液，按上述色譜條件獲得10批黃香顆粒制劑的高效液相色譜圖，W該10批黃 香顆粒的HPLC圖譜進(jìn)行對比評價，建立黃香顆粒的標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜，具體為特征峰11個，其 中9號峰大黃素為標(biāo)準(zhǔn)峰，11個峰的相對保留時間分別為0. 195, 0. 208, 0. 271，0. 428, 0. 50 5, 0. 531，0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114, 1. 335。
[0049] 實驗例2 ;特征圖譜檢測方法的適應(yīng)性考察
[0050] 1、精密度試驗
[0051] 取批號為20140503批黃香顆粒樣品，按實驗例1供試品溶液的制備方法得到供試 品溶液一份，在實驗例1色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次測定，結(jié)果表明；本發(fā)明提供的特征圖譜 檢測方法精密度良好。測定結(jié)果見表1。
[0052] 表1黃香顆粒液相特征圖譜精密度考察結(jié)果（相對保留時間）
[0053]

【權(quán)利要求】
1. 一種原料藥組成為大黃200重量份、廣藿香200重量份的黃香藥物組合物及其制劑 的檢測方法，特征在于，該方法包括如下HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法： HPLC特征圖譜檢測法： a) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積 份數(shù)比0. 5%磷酸水溶液為流動相，按如下條件梯度洗脫：0 - 30分鐘甲醇體積比例40% -80 %，30 - 60分鐘甲醇體積比例保持80 % ;檢測波長為280?300nm ;流速：0. 8? 1. 2ml/min ;分析時間：60分鐘；理論板數(shù)按大黃素峰計算不低于2000 ; b) 對照品溶液的制備：取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含大黃素0. 2mg的溶液，即 得； c) 供試品溶液的制備：取黃香藥物組合物或其制劑研細(xì)后粉末l_5g，加入甲醇 10-50ml，超聲處理30-40分鐘，放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得； d) 檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5?15 μ 1，注入高效液相色譜儀， 記錄60分鐘內(nèi)的色譜圖；所得圖譜包含黃香藥物組合物或其制劑的特征峰，各特征峰相對 保留時間誤差不超過10% ; TLC鑒別檢測法： 取黃香藥物組合物或其制劑2_5g，加沸程60-90°C石油醚10_30ml，超聲處理30min，放 冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加沸程60-90°C石油醚2ml使溶解，作為供試品溶液；取大黃對照 藥材lg，同法制得大黃對照藥材溶液；取廣藿香對照藥材lg，同法制得廣藿香對照藥材溶 液；照中國藥典薄層色譜法，吸取上述三種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層色譜板 上，以體積份數(shù)比為3-5:0. 5-2:0. 2-1的沸程60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液為展 開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，特征在于，其中HPLC特征圖譜檢測法中黃香藥物組合 物或其制劑的特征峰為11個，其中9號峰大黃素為標(biāo)準(zhǔn)峰，11個峰的相對保留時間分別為 0. 195, 0. 208, 0. 271, 0. 428, 0. 505, 0. 531, 0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114, 1. 335〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，特征在于，其中HPLC特征圖譜檢測方法中的檢測波長 為290nm ;流速為L Oml/min ;進(jìn)樣量為10μ 1。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，特征在于，其中TLC鑒別檢測法展開劑沸程60-90°C石 油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液體積份數(shù)比為4:1:0.5。
5. -種原料藥組成為大黃200重量份、廣藿香200重量份的黃香顆粒的檢測方法，特征 在于，該方法包括如下HPLC特征圖譜檢測法和/或TLC鑒別檢測法： HPLC特征圖譜檢測法： a) 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積 份數(shù)比0. 5%磷酸水溶液為流動相，按如下條件梯度洗脫：0 - 30分鐘甲醇體積比例40% -80 %，30 - 60分鐘甲醇體積比例保持80% ;檢測波長為290nm ;流速：1. Oml/min ;分析 時間：60分鐘；理論板數(shù)按大黃素峰計算不低于2000 ; b) 對照品溶液的制備：取大黃素對照品，加甲醇制成每lml含大黃素0. 2mg的溶液，即 得； c) 供試品溶液的制備：取黃香顆粒研細(xì)后粉末4g，加入甲醇50ml，超聲處理30分鐘， 放冷，濾過，取續(xù)濾液，即得； d)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄 60分鐘內(nèi)的色譜圖；所得圖譜包含黃香藥物組合物或其制劑的特征峰，各特征峰相對保留 時間誤差不超過10% ; TLC鑒別檢測法： 取黃香顆粒3g，加沸程60-90°C石油醚25ml，超聲處理30min，放冷，濾過，濾液蒸干， 殘渣加沸程60-90°C石油醚2ml使溶解，作為供試品溶液；取大黃對照藥材lg，同法制得 大黃對照藥材溶液；取廣藿香對照藥材lg，同法制得廣藿香對照藥材溶液；照中國藥典薄 層色譜法，吸取上述三種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層色譜板上，以體積份數(shù)比 為4:1:0.5的沸程60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液為展開劑，展開，取出，晾干，置 365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒 光斑點。
【文檔編號】G01N30/06GK104237415SQ201410508144
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】班瑪才仁, 任松鵬, 孫緒丁, 姬濤, 張克升 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司