一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法
【專利摘要】一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，它涉及一種檢測羥基自由基的方法。本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有方法檢測溶液中羥基自由濃度存在檢測費用昂貴，檢測時間長，定量效果不佳，可重復性差和測試精度低的問題。步驟：一、標準曲線的繪制；二、回歸方程的獲得；三、根據(jù)標準曲線獲得回歸方程：A＝0.00476C(mol·L-1)+0.01271(r＝0.99951)計算溶液中羥基自由基的濃度。本發(fā)明首次通過添加FeSO4成功抑制了萃取劑對堅牢藍BB鹽的萃取，大大削弱堅牢藍BB鹽對檢測結果的影響，提高檢測精度，檢測誤差在5％以內，且實驗可重復性極高。本發(fā)明可獲得一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法。
【專利說明】一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測羥基自由基的方法。
【背景技術】
[0002]在已知的氧化劑中，.0H的氧化能力僅次于F2,是一種非選擇性的氧化劑，能很容易的氧化各種有機物和無機物，氧化效率高，反應速度快。在廢水的均相和非均相氧化降解過程中，都認為起氧化作用的主要因素是.0Η。近年來，.0H已應用于深入的環(huán)境化學研究，如在大氣化學、天然水體化學和廢水深度氧化等的研究中，涉及許多自由基參與的化學反應，自由基與污染物的轉化和清除密切相關。由于自由基非?；顫?，濃度低、存在的壽命短，因此在有關涉及自由基的研究中，其測定方法就顯得特別重要。
[0003]溶液中羥基自由基的檢測方法包括:電子自旋共振法、高效液相色譜法、化學發(fā)光法、熒光分析法和分光光度法。電子自旋共振法儀器昂貴，操作步驟復雜，檢測時間長，定量效果不佳?；瘜W發(fā)光法操作簡單，但抗干擾能力差，測試精度低。熒光分析法檢測速度較快，但檢測精度同樣較差。高效液相色譜法和分光光度法在定量檢測.0H方面具有范圍廣，精度高的優(yōu)點。但高效液相色譜法操作時間長，儀器價格遠高于分光光度計。研究檢測溶液中.0H濃度的經(jīng)濟可靠分光光度法對于推動可廣泛采用的自由基檢測技術，推動相關領域研究進步具有現(xiàn)實意義。 [0004]基于Russell反應機理進行分光光度法檢測.0Η濃度是一個重要的研究分支。首先用二甲基亞砜(DMSO)作為.0H的分子探針，生成甲基亞磺酸MSIA，再與各種染料進行著色反應，反應產(chǎn)物經(jīng)萃取劑萃取后進行光度檢測。普渡大學Babbs對Russell反應機理檢測.0H濃度進行了探究。由于甲基亞磺酸MSIA不能在自然界中長期穩(wěn)定存在，研究用苯亞磺酸鈉或甲基亞磺酸鈉代替DMSO與.0H的反應產(chǎn)物MSIA繪制標準曲線。使用DMSO作.0H捕獲劑，加入堅牢藍BB鹽反應生成重氮砜產(chǎn)物，用萃取劑萃取重氮砜產(chǎn)物進行光度檢測。然而萃取劑萃取重氮砜產(chǎn)物的同時，會同時萃取堅牢藍BB鹽，導致測試精度低，可重復性差。抑制萃取劑對堅牢藍BB鹽的萃取，是萃取劑選擇性地僅萃取重氮砜產(chǎn)物是該檢測方法亟待解決的問題。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的是要解決現(xiàn)有方法檢測溶液中羥基自由濃度存在檢測費用昂貴，檢測時間長，定量效果不佳，可重復性差和測試精度低的問題，而提供一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法。
[0006]一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，具體是按以下步驟完成的:
[0007]—、標準曲線的繪制:將甲基亞磺酸鈉溶液分別加入到編號為①到⑥的六個容器中，其中①號加入摩爾濃度為25μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，②號加入摩爾濃度為50 μ mo 1-T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，③號加入摩爾濃度為75ymol -T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，④號加入摩爾濃度為100μ mol L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，⑤號加入摩爾濃度為150μmol.l-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;⑥號加入摩爾濃度為250μmol.l-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;然后將編號為①到⑥的容器置于暗處，分別向編號為①到⑥的容器中加入摩爾濃度為2mmol.I/1的堅牢藍BB鹽，其中①號加入1.25mL 號加入2.50mL，③號加入3.75mL，④號加入5.0OmL，⑤號加入7.50mL 號加入12.5mL ;再在室溫下反應lOmin，得到編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；再分別向編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4及3mL甲苯/ 丁醇萃取劑，萃取5min，去除下層液，得到編號為①到⑥的3mL上層萃取液；再分別向編號為①到⑥的3mL上層萃取液中加入ImL吡啶，得到編號為①到⑥的待測萃取液；用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，測定425nm處編號為①到⑥的待測萃取液的吸光度；以吸光度為縱坐標，以甲基亞磺酸鈉濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
[0008]步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ~500mmol):1L ；[0009]步驟一中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1;
[0010]二、回歸方程的獲得:
[0011]根據(jù)步驟一的標準曲線獲得回歸方程:A = 0.00476C(ymol.L’+0.01271 (r =0.99951);其中A為吸光度；C為甲基亞磺酸鈉濃度；
[0012]三、溶液中羥基自由基的測定:
[0013]①取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.002g~0.02g 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液；
[0014]②將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入1.25mL~12.5mL摩爾濃度為2mmol -l-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；
[0015]③向含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4,再使用3mL甲苯/ 丁醇混合萃取劑對含有重氮砜產(chǎn)物混合溶液進行萃取，萃取時間為5min，去除下層液，得到上層液；使用丁醇/水飽和溶液將上層液清洗I次~2次，再在轉速為500r/min~1000r/min的條件下離心2min~3min，再去除離心后的下層液，得到離心后的上層液；向離心后的上層液中加入吡啶，再用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，在425nm處測定溶液的吸光度，根據(jù)步驟二中回歸方程計算溶液中羥基自由基濃度；
[0016]步驟三③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ~500mmol):1L ；
[0017]步驟三③中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ;
[0018]步驟三③中所述的吡啶的體積與離心后的上層液的體積比為1:3。
[0019]本發(fā)明的有益效果:
[0020]一、本發(fā)明使用的捕獲劑為DMS0，該捕獲劑是一種性能極其突出的.0Η捕獲劑，適用于各種液體環(huán)境，且價格極低，捕獲效果佳；本發(fā)明一次檢測溶液中羥基自由基的濃度的捕獲劑及其他化學藥品的費用不到2元人民幣，僅為DMPO捕獲劑費用的萬分之一；
[0021]二、本專利使用的檢測儀器僅為紫外可見分光光度計，儀器技術成熟，價格低廉；
[0022]三、本發(fā)明首次通過添加FeSO4成功抑制了萃取劑對堅牢藍BB鹽的萃取，大大削弱堅牢藍BB鹽對檢測結果的影響，提高檢測精度，檢測誤差在5 %以內，且實驗可重復性極聞;[0023]四、本發(fā)明涉及的操作方法受溶液pH影響小，無論酸性體系還是堿性體系的溶液均適用；
[0024]五、本發(fā)明涉及的操作方法適用的.0H濃度范圍大，檢測的最佳.0H濃度為25 μ mo L.I/1~250 μ mo I.L-1,對于.0H濃度更高的亦可通過稀釋方法進行檢測；
[0025]六、本發(fā)明涉及的操作方法適用范圍廣，F(xiàn)enton體系、堿性H2O2體系、生物體內、漂白體系、有機廢水體系等均適用。
[0026]本發(fā)明可獲得一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1為試驗一繪制的甲基亞磺酸鈉濃度與吸光度的標準曲線。
【具體實施方式】
[0028]【具體實施方式】一:本實施方式是一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，具體是按以下步驟完成的:
[0029]一、標準曲線的繪制:將甲基亞磺酸鈉溶液分別加入到編號為①到⑥的六個容器中，其中①號加入摩爾濃度為25μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，②號加入摩爾濃度為50 μ mo 1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，③號加入摩爾濃度為75ymol -L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，④號加入摩爾濃度為100μ mol .L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，⑤號加入摩爾濃度為150μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;⑥號加入摩爾濃度為250μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;然后將編號為①到⑥的容器置于暗處，分別向編號為①到⑥的容器中加入摩爾濃度為2mmol.I/1的堅牢藍BB鹽，其中①號加入1.25mL 號加入2.50mL，③號加入3.75mL，④號加入5.00mL，⑤號加入7.50mL 號加入12.5mL ;再在室溫下反應lOmin，得到編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；再分別向編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4及3mL甲苯/ 丁醇萃取劑，萃取5min，去除下層液，得到編號為①到⑥的3mL上層萃取液；再分別向編號為①到⑥的3mL上層萃取液中加入ImL吡啶，得到編號為①到⑥的待測萃取液；用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，測定425nm處編號為①到⑥的待測萃取液的吸光度；以吸光度為縱坐標，以甲基亞磺酸鈉濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
[0030]步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ~500mmol):1L ；
[0031]步驟一中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ;
[0032]二、回歸方程的獲得:
[0033]根據(jù)步驟一的標準曲線獲得回歸方程:A = 0.00476C(ymol.L-1) +0.01271 (r =0.99951);其中A為吸光度；C為甲基亞磺酸鈉濃度；
[0034]三、溶液中羥基自由基的測定:
[0035] ①取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.002g~0.02g 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液；
[0036]②將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入1.25mL~12.5mL摩爾濃度為2mmol -L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；[0037]③向含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4,再使用3mL甲苯/ 丁醇混合萃取劑對含有重氮砜產(chǎn)物混合溶液進行萃取，萃取時間為5min，去除下層液，得到上層液；使用丁醇/水飽和溶液將上層液清洗I次?2次，再在轉速為500r/min?1000r/min的條件下離心2min?3min，再去除離心后的下層液，得到離心后的上層液；向離心后的上層液中加入吡啶，再用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，在425nm處測定溶液的吸光度，根據(jù)步驟二中回歸方程計算溶液中羥基自由基濃度；
[0038]步驟三③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ?500mmol):1L ；
[0039]步驟三③中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ;
[0040]步驟三③中所述的吡啶的體積與離心后的上層液的體積比為1:3。
[0041]本實施方式的有益效果:
[0042]一、本實施方式使用的捕獲劑為DMS0，該捕獲劑是一種性能極其突出的.0H捕獲齊U，適用于各種液體環(huán)境，且價格極低，捕獲效果佳；本發(fā)明一次檢測溶液中羥基自由基的濃度的捕獲劑及其他化學藥品的費用不到2元人民幣，僅為DMPO捕獲劑費用的萬分之一；
[0043]二、本實施方式使用的檢測儀器僅為紫外可見分光光度計，儀器技術成熟，價格低廉；
[0044]三、本實施方式首次通過添加FeSO4成功抑制了萃取劑對堅牢藍BB鹽的萃取，大大削弱堅牢藍BB鹽對檢測結果的影響，提高檢測精度，檢測誤差在5 %以內，且實驗可重復性極高；
[0045]四、本實施方式涉及的操作方法受溶液pH影響小，無論酸性體系還是堿性體系的溶液均適用；
[0046]五、本實施方式涉及的操作方法適用的.0H濃度范圍大，檢測的最佳.0H濃度為25 μ mo I.L-1?250 μ mo I.I71,對于.0H濃度更高的亦可通過稀釋方法進行檢測；
[0047]六、本實施方式涉及的操作方法適用范圍廣，F(xiàn)enton體系、堿性H2O2體系、生物體內、漂白體系、有機廢水體系等均適用。
[0048]本實施方式可獲得一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法。
[0049]【具體實施方式】二:本實施方式與【具體實施方式】一不同點是:步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(250mmol?450mmol):1L0其他步驟與【具體實施方式】一相同。
[0050]【具體實施方式】三:本實施方式與【具體實施方式】一或二之一不同點是:步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.002g?0.0lg 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液。其他步驟與【具體實施方式】一或二相同。
[0051]【具體實施方式】四:本實施方式與【具體實施方式】一至三之一不同點是:步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.005g?0.02g 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至三相同。
[0052]【具體實施方式】五:本實施方式與【具體實施方式】一至四之一不同點是:步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.0lg?0.02g 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至四相同。
[0053]【具體實施方式】六:本實施方式與【具體實施方式】一至五之一不同點是:步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入1.25mL~2.5mL摩爾濃度為2mmol -L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至五相同。
[0054]【具體實施方式】七:本實施方式與【具體實施方式】一至六之一不同點是:步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入5mL~IOmL摩爾濃度為2mmol.L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至六相同。
[0055]【具體實施方式】八:本實施方式與【具體實施方式】一至七之一不同點是:步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入IOmL~12.5mL摩爾濃度為2mmol.l-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。其他步驟與【具體實施方式】一至七相同。
[0056]【具體實施方式】九:本實施方式與【具體實施方式】一至八之一不同點是:步驟三
③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(300mmol~500mmol): 1L。其他步驟與【具體實施方式】一至八相同。 [0057]【具體實施方式】十:本實施方式與【具體實施方式】一至九之一不同點是:步驟三
③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol~400mmol): 1L。其他步驟與【具體實施方式】一至九相同。
[0058]下面結合實施例對本發(fā)明進一步闡述:
[0059]實施例一:
[0060]一、標準曲線的繪制:將甲基亞磺酸鈉溶液分別加入到編號為①到⑥的六個容器中，其中①號加入摩爾濃度為25μπιο1.l-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，②號加入摩爾濃度為50 μ mo 1-T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，③號加入摩爾濃度為75ymol -T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，④號加入摩爾濃度為100μ mol ?L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，⑤號加入摩爾濃度為150μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;⑥號加入摩爾濃度為150μπιο1.l-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;然后將編號為①到⑥的容器置于暗處，分別向編號為①到⑥的容器中加入摩爾濃度為2mmol.I/1的堅牢藍BB鹽，其中①號加入1.25mL 號加入2.50mL，③號加入3.75mL，④號加入5.00mL，⑤號加入7.50mL 號加入12.5mL ;再在室溫下反應lOmin，得到編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；再分別向編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4及3mL甲苯/ 丁醇萃取劑，萃取5min，去除下層液，得到編號為①到⑥的3mL上層萃取液；再分別向編號為①到⑥的3mL上層萃取液中加入ImL吡啶，得到編號為①到⑥的待測萃取液；用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，測定425nm處編號為①到⑥的待測萃取液的吸光度；以吸光度為縱坐標，以甲基亞磺酸鈉濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
[0061]步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為300mmol:1L ；
[0062]步驟一中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1;
[0063]步驟一中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1;
[0064]二、回歸方程的獲得:
[0065]根據(jù)步驟一的標準曲線獲得回歸方程:A = 0.00476C(ymol.L-1) +0.01271 (r =0.99951);其中A為吸光度；C為甲基亞磺酸鈉濃度；
[0066]三、制備羥基自由基濃度為50 μ mo I.L-1的溶液:
[0067]取DMSO和FeSO4的摩爾濃度分別為50mmol.L 1和Immol.L 1的溶液80mT,；向80mLDMS0和FeSO4的摩爾濃度分別為50mmol.L-1和Immol.L-1的溶液中加入H2O2和DMSO的摩爾濃度分別為250μπιΟ1.L-1和50mmol.L-1的溶液20mL，得到羥基自由基濃度為50 μ mo I.L 1 的溶液；
[0068]四、溶液中羥基自由基的測定:
[0069]取羥基自由基濃度為50 μ mo I.-1的溶液ImL置于暗處，加入2.5mL摩爾濃度為2mmol.L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；
[0070]③向含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4,再使用3mL甲苯/ 丁醇混合萃取劑對含有重氮砜產(chǎn)物混合溶液進行萃取，萃取時間為5min，去除下層液，得到上層液；使用丁醇/水飽和溶液將上層液清洗2次，再在轉速為800r/min的條件下離心2min，再去除離心后的下層液，得到 離心后的上層液；向離心后的上層液中加入吡啶，再用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，在425nm處測定溶液的吸光度，根據(jù)步驟二中回歸方程計算溶液中羥基自由基濃度；
[0071]步驟三③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為300mmol:1L ；
[0072]步驟三③中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ;
[0073]步驟三③中所述的吡啶的體積與離心后的上層液的體積比為1:3。
[0074]根據(jù)步驟二中回歸方程計算實施例一溶液中羥基自由基濃度為48.1 μ mol.?Λ與配置的羥基自由基濃度為50μπιΟ1.L-1的溶液相比，誤差僅為3.8%。
[0075]圖1為試驗一繪制的甲基亞磺酸鈉濃度與吸光度的標準曲線；根據(jù)圖1的的標準曲線獲得回歸方程:Α = 0.00476C(ymol.L-1)+0.01271 (r = 0.99951);其中 A 為吸光度；C為甲基亞磺酸鈉濃度，也就是羥基自由基濃度。
【權利要求】
1.一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法具體是按以下步驟完成的: 一、標準曲線的繪制:將甲基亞磺酸鈉溶液分別加入到編號為①到⑥的六個容器中，其中①號加入摩爾濃度為25μmο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，②號加入摩爾濃度為50 μ mo 1-T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，③號加入摩爾濃度為75ymol -T1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，④號加入摩爾濃度為100μ mol.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液lmL，⑤號加入摩爾濃度為150μπιο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;⑥號加入摩爾濃度為250μmο1.L-1的甲基亞磺酸鈉溶液ImL ;然后將編號為①到⑥的容器置于暗處，分別向編號為①到⑥的容器中加入摩爾濃度為2mmol.I/1的堅牢藍BB鹽，其中①號加入1.25mL 號加入2.50mL，③號加入3.75mL，④號加入5.0OmL，⑤號加入7.50mL 號加入12.5mL ;再在室溫下反應lOmin，得到編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液；再分別向編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4及3mL甲苯/ 丁醇萃取劑，萃取5min，去除下層液，得到編號為①到⑥的3mL上層萃取液；再分別向編號為①到⑥的3mL上層萃取液中加入ImL吡啶，得到編號為①到⑥的待測萃取液；用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，測定425nm處編號為①到⑥的待測萃取液的吸光度；以吸光度為縱坐標，以甲基亞磺酸鈉濃度為橫坐標，繪制標準曲線； 步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ~500mmol):1L ； 步驟一中所述的甲苯/ 丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ; 二、回歸方程的獲得: 根據(jù)步驟一的標準曲線獲得回歸方程:A = 0.00476C(ymol.L-10)+Ο.01271 (r =0.99951);其中A為吸光度；C為甲基亞磺酸鈉濃度； 三、溶液中羥基自由基的測定: ①取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.002g~0.02g 二甲基亞諷，得到含甲基亞橫酸的溶液； ②將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入1.25mL~12.5mL摩爾濃度為2mmol.I/1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液； ③向含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液中加入FeSO4,再使用3mL甲苯/丁醇混合萃取劑對含有重氮砜產(chǎn)物混合溶液進行萃取，萃取時間為5min，去除下層液，得到上層液；使用丁醇/水飽和溶液將上層液清洗I次~2次，再在轉速為500r/min~1000r/min的條件下離心2min~3min，再去除離心后的下層液，得到離心后的上層液；向離心后的上層液中加入吡啶，再用Icm比色皿，丁醇試劑空白作參比，在425nm處測定溶液的吸光度，根據(jù)步驟二中回歸方程計算溶液中羥基自由基濃度； 步驟三③中所述的F e S O4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol ~500mmol):1L ； 步驟三③中所述的甲苯/丁醇混合萃取劑中甲苯與丁醇的摩爾比為2:1 ; 步驟三③中所述的吡啶的體積與離心后的上層液的體積比為1:3。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟一中所述的FeSO4的物質的量與編號為①到⑥的含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(250mmol ~450mmol):1L0
3.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.002g~0.01g 二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.005g~0.02g 二甲基亞諷，得到含甲基亞橫酸的溶液。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三①中取含有羥基自由基的溶液lmL，再向ImL含有羥基自由基的溶液中加入0.01g~0.02g二甲基亞砜，得到含甲基亞磺酸的溶液。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入1.25mL~2.5mL摩爾濃度為2mmol -L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液 置于暗處，加入5mL~IOmL摩爾濃度為2mmol -L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三②中將含甲基亞磺酸的溶液置于暗處，加入IOmL~12.5mL摩爾濃度為2mmol.L-1的堅牢藍BB鹽溶液，室溫下反應lOmin，得到含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液。
9.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(300mmol~500mmol):1L0
10.根據(jù)權利要求1所述的一種檢測溶液中羥基自由基濃度的方法，其特征在于步驟三③中所述的FeSO4的物質的量與含有重氮砜產(chǎn)物的混合溶液的體積比為(200mmol~400mmo1):1L。
【文檔編號】G01N21/78GK103983592SQ201410249893
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年6月6日 優(yōu)先權日:2014年6月6日
【發(fā)明者】高繼慧, 趙海謙, 周偉, 韓瑞, 吳少華 申請人:哈爾濱工業(yè)大學