一種鳳岡鋅硒茶的hplc指紋圖譜的建立方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法，包括供試品溶液的制備、指紋圖譜的制作、標(biāo)準(zhǔn)指紋譜圖的確認(rèn)，利用SPSS及SIMCA-P+統(tǒng)計(jì)分析軟件選擇了29批中的20批鳳岡鋅硒茶樣品、4批六盤水茶葉樣品、5批都勻茶葉樣品、9批銅仁茶葉樣品及14批湄潭茶葉樣品進(jìn)行鳳岡鋅硒茶指紋圖譜模型驗(yàn)證，結(jié)果顯示所建鳳岡鋅硒茶指紋圖譜能有效應(yīng)用與鳳岡鋅硒茶的真?zhèn)舞b別及產(chǎn)地確認(rèn)，所建指紋圖譜模型能更好的應(yīng)用于鳳岡鋅硒茶的地理產(chǎn)品保護(hù)及其更全面的質(zhì)量控制。
【專利說(shuō)明】—種鳳岡鋅砸茶的HPLC指紋圖譜的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鳳R地處黔北高原的富鋅富硒地帶，境內(nèi)丘陵廣布，土壤主要以微酸性黃壤為主，且富含鋅、硒等微量元素，土壤PH值4.5?6.5，土層深厚，土壤疏松肥沃，有機(jī)質(zhì)和氮、磷、鉀含量豐富。鳳網(wǎng)鋅硒茶產(chǎn)于貴州省遵義市鳳網(wǎng)縣，是貴州省鳳網(wǎng)縣的名優(yōu)綠茶，也是全國(guó)唯一的集鋅、硒、有機(jī)三位一體的天然營(yíng)養(yǎng)保健茶，具有色澤綠潤(rùn)、湯色綠亮、滋味醇厚、葉底嫩綠鮮活等特點(diǎn)，2006年I月國(guó)家質(zhì)檢總局批準(zhǔn)對(duì)鳳R鋅硒茶實(shí)施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)。
[0003]中藥指紋圖譜是指某種(或某產(chǎn)地)中藥材或中成藥進(jìn)行適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段得到的、能夠標(biāo)示該中藥材或中成藥特性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜，它具有特征性和穩(wěn)定性。通過(guò)指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；通過(guò)其主要特征峰的面積或比例的限定，能有效控制樣品的質(zhì)量，確保藥品質(zhì)量的相對(duì)穩(wěn)定。對(duì)非單一成分藥物的質(zhì)量控制而言，指紋圖譜能全面、綜合地反應(yīng)和控制中藥或天然藥物質(zhì)量。
[0004]本發(fā)明運(yùn)用中藥指紋圖譜的研究平臺(tái)，建立了貴州鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)貴州鳳網(wǎng)鋅硒茶的真?zhèn)舞b別及產(chǎn)品地理保護(hù)，并且同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)鳳網(wǎng)鋅硒茶質(zhì)量的更好控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題:針對(duì)鳳R鋅硒茶沒(méi)有一種好的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明提供了一種鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法及其標(biāo)準(zhǔn)譜圖，實(shí)現(xiàn)了貴州鳳R鋅硒茶的真?zhèn)舞b別及產(chǎn)品地理保護(hù)，并且同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)鳳網(wǎng)鋅硒茶質(zhì)量的更好控制。
[0006]本發(fā)明采用的技術(shù)方案:鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟:
[0007](I)供試品溶液的制備:取樣品粉碎，過(guò)40目篩，準(zhǔn)確稱取樣品粉末0.25g，置25mL具塞比色管中，加入70%甲醇20mL超聲萃取30min，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45 μ m微孔濾膜；
[0008](2)指紋圖譜的制作:HPLC的色譜條件:C18色譜柱，4.6 X 250mm，5 μ m ;柱溫:30°C ;流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.3%冰乙酸，梯度洗脫:0min5 %乙腈，4minl4%乙腈，21minl4% 乙臆,26minl5% 乙臆,34minl5% 乙臆,40minl7% 乙臆,45min25% 乙臆,55min25% 乙腈；流速:0.3?0.8mL.mirT1 ;進(jìn)樣量10 μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng)365nm,記錄譜圖得到鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜；
[0009](3)標(biāo)準(zhǔn)指紋譜圖的確認(rèn):按照上述提供的方法，對(duì)多批次鳳R鋅硒茶建立了HPLC指紋圖譜，通過(guò)分析比較確定了 15個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為:16.5min、19.6min、20.3min、21.0min、22.0min、23.4min、24.4min、27.5min、31.9min、32.5min、35.5min、37.3min、38.6min、46.2min、50.0min,這些共有峰構(gòu)成了鳳網(wǎng)鋒硒茶的指紋特征，
作為鳳R鋅硒茶的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0010]乙腈為色譜純,水為超純水,其他試劑均為分析純。
[0011]本發(fā)明達(dá)到的技術(shù)效果:本發(fā)明運(yùn)用中藥指紋圖譜的研究平臺(tái)，建立了貴州鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)貴州鳳網(wǎng)鋅硒茶的真?zhèn)舞b別及產(chǎn)品地理保護(hù)，并且同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)鳳R鋅硒茶質(zhì)量的更好控制，主要技術(shù)效果體現(xiàn)在一下幾個(gè)方面:
[0012](I)精密度高，穩(wěn)定性好:本發(fā)明方法的精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積的RSD均小于3%，精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)相關(guān)系數(shù)R均大于0.9，具有良好的精密度和穩(wěn)定性，符合指紋圖譜的要求。
[0013](2)本發(fā)明建立的貴州鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜可靠有效:抽取29批鳳岡鋅硒茶樣品中的前20批、采集于貴州六盤水的4批茶葉樣品、都勻的5批茶葉樣品、銅仁的9批茶葉樣品及湄潭的14批茶葉樣品，對(duì)建立的鳳R鋅硒茶HPLC指紋圖譜模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示所建鳳R鋅硒茶指紋圖譜能有效應(yīng)用與鳳R鋅硒茶的真?zhèn)舞b別及產(chǎn)地確認(rèn)，所建指紋圖譜模型能更好的應(yīng)用于鳳R鋅硒茶的地理產(chǎn)品保護(hù)及其更全面的質(zhì)量控制。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1:本發(fā)明的鳳岡鋅硒茶的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0015]圖2:精密度試驗(yàn)的指紋圖譜的疊加圖；
[0016]圖3:穩(wěn)定性試驗(yàn)指紋圖譜的疊加圖；
[0017]圖4:重復(fù)性試驗(yàn)指紋圖譜的疊加圖；
[0018]圖5:29批鳳岡鋅硒茶樣品HPLC指紋圖譜；
[0019]圖6:本發(fā)明鳳岡鋅硒茶HPLC對(duì)照指紋圖譜；
[0020]圖7:本發(fā)明52批貴州茶葉樣品HPLC指紋圖譜系統(tǒng)聚類分析圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]實(shí)施例1
[0022]精密度試驗(yàn):
[0023]本發(fā)明鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法按照以下步驟進(jìn)行:
[0024](I)供試品溶液的制備:取樣品粉碎，過(guò)40目篩，準(zhǔn)確稱取樣品粉末0.25g，置25mL具塞比色管中，加入70%甲醇20mL超聲萃取30min，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45 μ m微孔濾膜。
[0025](2)指紋圖譜的制作:HPLC的色譜條件:色譜柱:AgiIentZORBAXEclipsePlusC18,
4.6X 250mm, 5 μ m ;柱溫:30 V ;流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.3%冰乙酸，梯度洗脫:0min5% 乙臆,4minl4% 乙臆，21minl4% 乙臆，26minl5% 乙臆，34minl5% 乙臆,40minl7% 乙臆，45min25%乙腈,55min25%乙腈；流速:0.5mL.mirT1 ;進(jìn)樣量10 μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng)365nm,記錄譜圖得到鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜，見(jiàn)附圖1 ;
[0026](3)準(zhǔn)確吸取上述供試品溶液，按照上述的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄HPLC指紋圖譜，通過(guò)分析比較確定了 15個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為:16.5min、19.6min、20.3min、21.0min、22.0min、23.4min、24.4min、27.5min、31.9min、32.5min、35.5min、37.3min、38.6min、46.2min、50.0min,以13號(hào)峰為參照峰S，分別計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積的一致性，結(jié)果見(jiàn)表1和表2，共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積的RSD均小于3%，運(yùn)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004A版，采用中位數(shù)法計(jì)算相似度，精密度試驗(yàn)的指紋圖譜的疊加圖見(jiàn)附圖2，精密度試驗(yàn)相關(guān)系數(shù)R均大于0.9，相似度結(jié)果見(jiàn)表3。上述試驗(yàn)結(jié)果表明儀器穩(wěn)定，精密度良好，符合指紋圖譜要求。
[0027]表1:相對(duì)保留時(shí)間精密度試驗(yàn)結(jié)果
[0028]
【權(quán)利要求】
1.一種鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取樣品粉碎，過(guò)40目篩，準(zhǔn)確稱取樣品粉末0.25g，置25mL具塞比色管中，加入70%甲醇20mL超聲萃取30min，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45 μ m微孔濾膜； (2)指紋圖譜的制作=HPLC的色譜條件:C18色譜柱，4.6X 250mm，5 μ m ;柱溫:30°C ;流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.3%冰乙酸，梯度洗脫:0min5%乙腈，4minl4%乙腈，21minl4%乙臆，26minl5% 乙臆，34minl5% 乙臆，40minl7% 乙臆，45min25% 乙臆，55min25% 乙臆；流速:0.3?0.8mL.min—1 ;進(jìn)樣量10 μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng)365nm,記錄譜圖得到鳳岡鋅硒茶的HPLC指紋圖譜； (3)標(biāo)準(zhǔn)指紋譜圖的確認(rèn):按照上述提供的方法，對(duì)多批次鳳R鋅硒茶建立了HPLC指紋圖譜，通過(guò)分析比較確定了 15個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為:16.5 m i η、19.6 m i η、20.3min、21.0min>22.0min>23.4min>24.4min>27.5min、31.9min>32.5min>35.5min、37.3min、38.6min、46.2min、50.0min,這些共有峰構(gòu)成了鳳岡鋅硒茶的指紋特征，作為鳳岡鋅硒茶的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鳳R鋅硒茶的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于:乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103869019SQ201410119877
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月27日
【發(fā)明者】李霞, 馮發(fā)青, 張俊英, 王蘭蘭, 李梅, 向麗萍, 王奧, 馬昌洪, 朱麗 申請(qǐng)人:遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)院