番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開一種番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，包括盒蓋、盒身和試紙條，盒蓋上設(shè)置用于收納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的反應(yīng)槽，盒身內(nèi)設(shè)置試紙條收納位；所述的試紙條是番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙條，由底板和附著在底板上依次緊密相接的樣品墊、層析膜和吸水墊組成，所述的層析膜上設(shè)有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)固定與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體。使用本實(shí)用新型的檢測盒可在極短時(shí)間完成植物番茄環(huán)斑病毒的檢測，具有良好的特異性和靈敏度，是一種理想的番茄環(huán)斑病毒感染檢測工具。
【專利說明】番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用免疫層析技術(shù)檢測植物番茄環(huán)斑病毒感染的裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]番爺環(huán)斑病毒(tomato ring spot virus, ToRSV)是檢疫性病毒病害之一，是線蟲傳多面體組成員，可感染105屬157種草本和木本植物，主要感染果樹和漿果作物，屬我國對(duì)外檢疫的一類檢疫性有害生物。ToRSV的檢測方法主要有生物學(xué)、血清學(xué)和電鏡技術(shù)，ELISA和PCR是應(yīng)用最多的兩種檢測ToRSV的技術(shù)。但是上述技術(shù)普遍存在著對(duì)人員、環(huán)境要求高的問題，難以進(jìn)行現(xiàn)場快速檢測。免疫層析技術(shù)是上世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種基于抗原抗體反應(yīng)的簡便快速檢測技術(shù)，該技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床、食品安全檢測領(lǐng)域。膠體金免疫層析檢測試紙條是體外快速檢測試劑的主要品種之一。以其快速、簡便、價(jià)廉、所用樣品量少、可以直接測定未經(jīng)處理的樣品、污染小、不需要貴重儀器、可以直觀判斷結(jié)果、易于基層和現(xiàn)場使用等優(yōu)點(diǎn)，而得到廣泛應(yīng)用。但是膠體金免疫層析試紙條的靈敏性不夠理想，這大大限制了它在檢測領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用。
[0003]采用比納米金顆粒信號(hào)更為強(qiáng)的標(biāo)記物質(zhì)即可在一定程度上提高免疫層析試紙條的靈敏性。新型的熒光納米顆粒恰恰具有這樣一種優(yōu)勢。熒光納米顆粒是將熒光物質(zhì)(如FITC、量子點(diǎn)、稀土螯合物)包裹在高分子材料中，形成納米顆粒(Nanoparticles, NPs)。包裹作用一方面能使更多的發(fā)光分子連接在生物分子上起到信號(hào)放大作用，另一方面可克服外界環(huán)境對(duì)發(fā)光試劑的影響(如淬滅作用等)，增加發(fā)光試劑的穩(wěn)定性。包裹著熒光分子或其它發(fā)光分子的納米顆粒比單個(gè)熒光分子有高得多的發(fā)光強(qiáng)度和光化學(xué)穩(wěn)定性。熒光納米顆粒還具有顆粒均一，大小任意可調(diào)等優(yōu)勢；尤其是在標(biāo)記方面，完全摒棄了膠體金依靠被動(dòng)物理吸附的標(biāo)記方式，采用定向共價(jià)偶聯(lián)技術(shù)，幾乎完整保持了抗體和抗原的活性，使檢測的背景噪音大大降低。采用相同的抗原和抗體試劑，熒光納米顆粒在靈敏性上可以輕易超出膠體金1-2個(gè)數(shù)量級(jí)，是極有應(yīng)用前景的生物分子標(biāo)記材料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實(shí)用新型的目的在于提供一種使用方便，靈敏度高的針對(duì)番茄環(huán)斑病毒快速檢測裝置，用于植物番茄環(huán)斑病毒感染的現(xiàn)場快速檢測。
[0005]本實(shí)用新型公開一種番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，包括盒蓋、盒身和試紙條，盒蓋上設(shè)置用于收納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的反應(yīng)槽，盒身內(nèi)設(shè)置試紙條收納位；所述的試紙條是番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙條，由底板和附著在底板上依次緊密相接的樣品墊、層析膜和吸水墊組成，所述的層析膜上設(shè)有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)固定與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體。所述番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的形式更有有益于產(chǎn)品的保存和使用，檢測時(shí)熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物與檢測樣品充分接觸，更有助于陽性樣品的檢出，并且時(shí)間證明有非常高的靈敏度。[0006]為適用不同情況下的番茄環(huán)斑病毒快速檢測，本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒可制備為各種具體的實(shí)施方式。
[0007]為實(shí)現(xiàn)多次使用的目的，本實(shí)用新型的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的【具體實(shí)施方式】之一是在所述的盒身內(nèi)設(shè)置試劑瓶收納位，所述的試劑瓶收納位放置收納了熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的棕色試劑瓶。試劑瓶中預(yù)先灌入可供多次使用量的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物反應(yīng)液。使用時(shí)，向反應(yīng)槽中倒入一次檢測量的反應(yīng)液，即可進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)。為了避免所述熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的失活，該實(shí)施方式下的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒需要于4°C度保存。
[0008]為應(yīng)用于多個(gè)樣品檢測目的，本實(shí)用新型的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的另一【具體實(shí)施方式】是在所述檢測盒中配置具孔反應(yīng)板，所述具孔反應(yīng)板上設(shè)有用于容納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的盲孔。作為優(yōu)選地，所述的具孔反應(yīng)板從整體外型上與盒身反應(yīng)槽相匹配，具孔反應(yīng)板上設(shè)有多個(gè)孔徑0.5?1.0cm、深度0.5?1.0cm的盲孔。所述的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物可以采用上文述及的試劑瓶方式保存，使用時(shí)加入到具孔反應(yīng)板的盲孔中。更為優(yōu)選地，是在盲孔中預(yù)先吸附凍干的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物。檢測過程中，將具孔反應(yīng)板取出放置于反應(yīng)槽中，并以每一個(gè)盲孔作為一個(gè)獨(dú)立的展開槽進(jìn)行加樣檢測?？蓪?shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)對(duì)多個(gè)樣品的檢測。
[0009]上述各個(gè)技術(shù)特征，也可以在番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的設(shè)計(jì)中組合使用，其組合而成的技術(shù)方案也應(yīng)當(dāng)在本實(shí)用新型所延及的范圍內(nèi)。
[0010]此外，為實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型所述的現(xiàn)場快速檢測番茄環(huán)斑病毒的實(shí)用新型目的，還可以將其設(shè)計(jì)組裝為本領(lǐng)域常見的試紙形式，本實(shí)用新型提供一種具體的試紙?jiān)O(shè)計(jì)思路為:一種番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙，由底板和附著在底板上依次緊密相接的樣品墊、結(jié)合墊、層析膜和吸水墊組成，其特征在于所述的結(jié)合墊上包埋有熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物；所述的層析膜上設(shè)有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)固定與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0011]上述本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙可以與檢測樣品提取用的潔凈塑料袋組裝成為試劑盒保存，以應(yīng)對(duì)一次或多次檢測使用。
[0012]上述本實(shí)用新型任一技術(shù)方案中所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒或番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙中所述的檢測區(qū)所固定的與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)抗體優(yōu)選單克隆抗體。所述單克隆抗體可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中所記載的單抗制備方法制備，也可以購買商品單克隆抗體。所述的檢測區(qū)可以采用現(xiàn)有技術(shù)中所記載的點(diǎn)涂法制備:將與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的多克隆抗體或單克隆抗體作為硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)包被抗原，將適當(dāng)濃度的包被抗原用點(diǎn)膜儀以lyL/cm的量噴于黏于PVC底板上的硝酸纖維素膜上。然后置于干燥密閉的37°C真空烘箱內(nèi)烘烤60min，取出后干燥環(huán)境保存?zhèn)溆谩?br> [0013]上述本實(shí)用新型任一技術(shù)方案中所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒或番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙中所述的質(zhì)控區(qū)固定有羊抗鼠IgG。所述的質(zhì)控區(qū)可以采用現(xiàn)有技術(shù)中所記載的點(diǎn)涂法制備:將適當(dāng)濃度的羊抗鼠IgG用點(diǎn)膜儀以I μ L/cm的量噴于黏于PVC底板上的硝酸纖維素膜上。然后置于干燥密閉的37°C真空烘箱內(nèi)烘烤60min，取出后干燥環(huán)境保存?zhèn)溆谩?br> [0014]使用本實(shí)用新型的檢測盒或檢測試紙可在極短時(shí)間完成植物番茄環(huán)斑病毒的檢 測，具有良好的特異性和靈敏度，是一種理想的番茄環(huán)斑病毒感染檢測工具。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]本實(shí)用新型附圖4幅，其中，
[0016]圖1是本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒結(jié)構(gòu)示意圖，I (a)為盒蓋結(jié)構(gòu)示意圖，1(b)為盒身結(jié)構(gòu)示意圖；
[0017]圖2是本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒中的試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0018]圖3是本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒中的具孔反應(yīng)板結(jié)構(gòu)示意圖；
[0019]圖4是本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙結(jié)構(gòu)示意圖；
[0020]附圖中:1、盒蓋；2、盒身；3、試紙條收納位；4、反應(yīng)槽；5、稀土熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物；6、底板；7、樣品墊；8、層析膜；9:吸水墊；81、檢測區(qū)；82、質(zhì)控區(qū)；10、結(jié)合墊；11、具孔反應(yīng)板；12、盲孔。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本實(shí)用新型，但不以任何方式限制本實(shí)用新型。如無特殊說明，本實(shí)用新型所述及的
[0022]牛血清白蛋白(BSA)購自上海生工。硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜購自美國Millipore公司。所用試劑均為分析純。用于對(duì)比試驗(yàn)的40nm膠體金參考Frens方法制備([J].Nat Phys.Sci, 1973，241 (105):20)制備。番茄環(huán)斑病毒感染陽性樣品由遼寧省出入境檢驗(yàn)檢疫局提供，經(jīng)過RT-PCR (檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T2670-2010)方法鑒定確定為陽性樣品。
[0023]實(shí)施例1.番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒及番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙的制備
[0024]1、熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物反應(yīng)液的制備
[0025]取熒光顆粒(購自深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司)50μ L (10mg/ml)，加入550 μ L50mM MES(pH6.0)、lOOmg/mL 的 sulfo-NHS 和 EDC 各 200 μ L,室溫?fù)u動(dòng) 30min ;離心，棄上清；用lmL50mM的MES (pH6.0)重懸顆粒；加入適量番茄環(huán)斑病毒單克隆抗體(購自北京蘭伯瑞生物技術(shù)有限公司)，室溫振搖Ih ;加入等體積的PBS-BSA (BSA含量2%，pH7.4)，繼續(xù)反應(yīng)Ih ;離心，棄上清；用50mM MES (pH6.0)洗滌顆粒3次，ImL/次；用300 μ L重懸液(IOmM Tris-HCl (ρΗ8.0)，10%蔗糖)重懸顆粒，4°C保存，備用。
[0026]制備所得的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物反應(yīng)液以下述方式之一處理:
[0027]a.獨(dú)立保存于棕色試劑瓶，并裝配至番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒中；
[0028]b.在聚苯乙烯制備的具孔反應(yīng)板上吸附熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物，吸附的方法可使用現(xiàn)有技術(shù)中已非常成熟的凍干吸附。作為參考，本實(shí)用新型使用的凍干技術(shù)參數(shù)主要包括(中試型凍干機(jī)，德國CHRIST，EPSIL0N2-6D):
[0029]冷凍速度(CoolingRate) 1.5°C /min ；
[0030]早期冷凍點(diǎn)(IncipientFreezing Point)-1°C, 15min ；
[0031]冷凍溫度(Coolingtemperature)-40°C ；
[0032]共溶點(diǎn)(MeltingPoint Eutectic temperature) -27°C ；[0033]加熱溫度(Heatingtemperature) 20°C , 120mino
[0034]c.將其負(fù)載于硝酸纖維素膜上制備負(fù)載了熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的結(jié)合墊。
[0035]2、層析膜的制備
[0036]I)檢測區(qū):以番茄環(huán)斑病毒多克隆抗體(購自北京蘭伯瑞生物技術(shù)有限公司)為硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)包被抗原。將濃度為lmg/mL的包被抗原用點(diǎn)膜儀以I μ L/cm的量噴于黏于PVC底板上的硝酸纖維素膜上。置于干燥密閉的37°C真空烘箱內(nèi)烘烤60min，取出后放于干燥皿中待用。
[0037]2)質(zhì)控區(qū):以羊抗鼠IgG (購自深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司)包被硝酸纖維素膜，作為質(zhì)控區(qū)。將濃度為0.5mg/mL的羊抗鼠IgG用點(diǎn)膜儀以I μ L/cm的量噴于黏于PVC底板上的硝酸纖維素膜上。置于干燥密閉的37°C真空烘箱內(nèi)烘烤60min，取出后放于干燥皿中待用。
[0038]3、番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的裝配
[0039]如附圖1示，番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒包括盒蓋1、盒身2和試紙條3，盒蓋I上設(shè)置用于收納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物5的反應(yīng)槽4，盒身2內(nèi)設(shè)置試紙條收納位3，試紙條收納位3可以收納一或多張?jiān)嚰垪l。
[0040]所述的試紙條3是番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙條，單張的試紙條如附圖2示:在底板6上依次緊密搭接的樣品墊7、層析膜8和吸水墊9 ;其中，所述的層析膜8上設(shè)有檢測區(qū)81和質(zhì)控區(qū)82，檢測區(qū)81固定有與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體；質(zhì)控區(qū)82固定有羊抗鼠IgG。裝配后裁切成5mm寬的條狀,可收納于盒身2內(nèi)。
[0041]非檢測狀態(tài)下，所述的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物以反應(yīng)液的形式存貯于棕色試劑瓶，該試劑瓶可放置于盒身2內(nèi)。裝配得到的檢測盒需4°C度保存。
[0042]同時(shí)可采用聚苯乙烯制備如附圖3的具孔反應(yīng)板11，其上設(shè)有盲孔12。所述具孔反應(yīng)板11外形與反應(yīng)槽4相匹配，具孔反應(yīng)板11上盲孔12孔徑0.5cm，盲孔12深度0.5cm。采用本實(shí)施例1b的方法在盲孔12中凍干負(fù)載熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物。適宜數(shù)量的所述具孔反應(yīng)板11也收納于盒身2內(nèi)適當(dāng)位置即可。檢測時(shí)，可將試紙條做適當(dāng)裁剪以適用于以盲孔12為展開槽的檢測過程。
[0043]4、番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙的裝配
[0044]如附圖4示，在底板6上依次緊密搭接的樣品墊7、結(jié)合墊10、層析膜8和吸水墊9 ;其中，所述的結(jié)合墊10上包埋有熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物；所述的層析膜8上設(shè)有檢測區(qū)81和質(zhì)控區(qū)82，檢測區(qū)81固定有與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體；質(zhì)控區(qū)82固定有羊抗鼠IgG。
[0045]裝配后裁切成5mm寬的條狀，即得本實(shí)用新型所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙，4°C干燥保存。
[0046]實(shí)施例2.樣品檢測
[0047]1、檢測樣品制備
[0048]檢測樣品制備:取Ig待檢測樣品葉片于潔凈塑料袋中，加入3ml PBST (I XPBS,
0.5%Tween20, pH7.4)，揉搓塑料袋中的葉片，取汁液為檢測樣品進(jìn)行檢測。
[0049]2、使用番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒檢測樣品[0050]將所制備的檢測樣品加入至實(shí)施例1.3所制備的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒的反應(yīng)槽12中，加入熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物反應(yīng)液，吹打混勻；插入試紙條，40°C孵育3min, 5min后紫外光下肉眼觀察層析結(jié)果。
[0051]如使用具孔反應(yīng)板檢測，則直接將檢測樣品加入至具孔反應(yīng)板11的盲孔12中，吹打混勻；插入試紙條，40°C孵育3min, 5min后紫外光下肉眼觀察層析結(jié)果。
[0052]3、使用番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙檢測樣品
[0053]將實(shí)施例1.4所制備的番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙的樣品墊端插入檢測樣品，5min,紫外光下肉眼觀察層析結(jié)果。
[0054]4、結(jié)果判定
[0055]無論使用番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒還是番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙檢測樣品，結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是一致的:檢測區(qū)81和質(zhì)控區(qū)82均有熒光顯示，則檢測結(jié)果陽性，顯示樣品被番茄環(huán)斑病毒感染；檢測區(qū)81有熒光顯示而質(zhì)控區(qū)82無熒光顯示，則檢測結(jié)果陰性，顯示樣品未被番茄環(huán)斑病毒感染；檢測區(qū)81和質(zhì)控區(qū)82均無熒光顯示，則試紙作廢，需重新檢測。
[0056]5、檢測特異性及穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0057]使用番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒檢測小西葫蘆花葉病毒(ZYMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、煙草花葉病毒(TMV)、番木瓜環(huán)斑病毒(PRSV)、南瓜花葉病毒(SqMV)、煙草環(huán)斑病毒(TRSV)、甜瓜壞死斑點(diǎn)病毒(MNSV)和黃瓜綠斑駁花葉病毒(CGMMV)陽性樣本(以上病毒均購自中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院)，均無交叉反應(yīng)，本實(shí)用新型的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒應(yīng)用特異性良好。
[0058]將番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒中的試紙條、稀土熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物，以及提取液(IXPBST)放在37°C 7天，取出檢測不同濃度的陽性樣品，觀察其穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，在測試條件下靈敏性沒有明顯降低。
[0059]實(shí)施例3.與膠體金免疫層析法的對(duì)比試驗(yàn)
[0060]參照文獻(xiàn)“抗微囊藻毒素單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的制備及鑒定”([J].衛(wèi)生研究，2006，35 (4):442-445.)的方法制備單抗-膠體金偶聯(lián)物，并參照實(shí)施例1的方法制備番茄環(huán)斑病毒膠體金免疫層析檢測盒及檢測試紙。參照實(shí)施例2的方法進(jìn)行膠體金免疫層析法檢測。
[0061]1、檢測靈敏性比較試驗(yàn)
[0062]使用實(shí)施例2.2 (檢測盒，試劑瓶)的測試形式比較本實(shí)用新型實(shí)施例1.3所制備的番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙條與番茄環(huán)斑病毒膠體金免疫層析檢測試紙條的靈敏度。
[0063]用PBST倍比稀釋同一份陽性樣本，用膠體金免疫層析方法與本實(shí)用新型的方法分別進(jìn)行檢測。判讀結(jié)果如表1所示。從表中可以看出熒光納米顆粒試紙條的靈敏性要高于膠體金試紙條的靈敏性。
[0064]表1
【權(quán)利要求】
1.一種番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，包括盒蓋、盒身和試紙條，盒蓋上設(shè)置用于收納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的反應(yīng)槽，盒身內(nèi)設(shè)置試紙條收納位； 所述的試紙條是番茄環(huán)斑病毒快速檢測試紙條，由底板和附著在底板上依次緊密相接的樣品墊、層析膜和吸水墊組成，所述的層析膜上設(shè)有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測區(qū)固定與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體或多克隆抗體。
2.權(quán)利要求1所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的盒身內(nèi)還設(shè)有試劑瓶收納位，所述的試劑瓶收納位放置收納了熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的棕色試劑瓶。
3.權(quán)利要求2所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于檢測盒4°C度保存。
4.權(quán)利要求1所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于還包括具孔反應(yīng)板，所述具孔反應(yīng)板上設(shè)有用于收納熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物的盲孔。
5.權(quán)利要求4所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的具孔反應(yīng)板外形與盒身反應(yīng)槽相匹配，具孔板上盲孔孔徑0.5?1.0cm,盲孔深度0.5?1.0cm0
6.權(quán)利要求5所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的具孔反應(yīng)板由聚苯乙烯制成，盲孔內(nèi)收納凍干的熒光納米顆粒-番茄環(huán)斑病毒抗體偶聯(lián)物。
7.權(quán)利I?6中任一權(quán)利要求所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的檢測區(qū)固定有與番茄環(huán)斑病毒發(fā)生特異性反應(yīng)的單克隆抗體。
8.權(quán)利I?6中任一權(quán)利要求所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的質(zhì)控區(qū)固定有羊抗鼠IgG。
9.權(quán)利I?6中任一權(quán)利要求所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的熒光納米顆粒為稀土熒光納米顆粒，其含有稀土離子與螯合劑形成的螯合物，所述螯合物可以在紫外光激發(fā)下發(fā)射出特征性熒光；所述稀土離子為Eu3+、Sm3+、Dy3+或Tb3+。
10.權(quán)利9所述的番茄環(huán)斑病毒快速檢測盒，其特征在于所述的稀土熒光納米顆粒粒徑 10 ?IOOOOnm。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK203551571SQ201320706434
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】李鑫, 曹冬梅, 曹際娟, 于娟娟 申請人:李鑫, 曹冬梅, 曹際娟, 于娟娟