用于光度式測定樣品中的β-D-葡聚糖的存在的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型提供了一種用于光度式測定樣品中的β-D-葡聚糖的存在的試劑盒，其中，所述試劑盒包括：a)至少一個(gè)容量為1～1000ml的第一容器，和容納在所述第一容器內(nèi)的選自卡爾科弗盧爾型染料的第一組分，b)至少一個(gè)容量為1～1000ml的第二容器，和容納在所述第二容器內(nèi)的選自緩沖溶液的第二組分，以及可任選的c)至少一個(gè)容量為1～1000ml的第三容器，和容納在所述第三容器內(nèi)的選自用于涵蓋濃度范圍在1～2000mg/l的β-葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的第三組分。
【專利說明】用于光度式測定樣品中的β-D-葡聚糖的存在的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及液體樣品或被制成液體形式的樣品的分析。更具體地說，本實(shí)用新型涉及一種用于測定樣品(例如，谷物來源的樣品)中的β-葡聚糖的濃度的試劑盒。本實(shí)用新型還可用于其中天然地含有β-D-葡聚糖或者其中含有外加β-D-葡聚糖的非谷物來源的樣品。本實(shí)用新型還提供了一種測定β_葡聚糖的濃度的方法，以及卡爾科弗盧爾染料的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]在啤酒釀造過程中，葡聚糖是最重要的分析物之一。葡聚糖存在于麥芽和大麥的細(xì)胞壁中，并且在某些條件下在碾壓過程中所釋放葡聚糖可能不能充分地水解。這種β_葡聚糖能夠堵塞加工過程的過濾器，并且高水平的β_葡聚糖會導(dǎo)致麥芽汁過濾和啤酒過濾性能變差。過量的葡聚糖可能導(dǎo)致產(chǎn)品渾濁，甚至損害啤酒的味道。由于這個(gè)原因，測定β-葡聚糖的濃度就很重要，特別是其分子量大小約為10，OOODa或更大的葡聚糖聚合物部分。
[0003]有關(guān)釀造工業(yè)中的標(biāo)準(zhǔn)分析方法的手冊Analytica-EBC(歐洲釀酒協(xié)會)以及ASBC(美洲啤酒釀造化學(xué)家學(xué)會)提供了各種測定麥芽的總混聯(lián)(1，3) (1，4)-β-D-葡聚糖含量、麥芽提取物(協(xié)定糖化)以及麥芽熱水提取物(恒溫糖化)方法。
[0004]Analytica-EBC中所介紹的最常用的常規(guī)方法是基于使用卡爾科弗盧爾熒光染料通過流動(dòng)注射(FIA)分析儀或者通過在微孔板甲酸中進(jìn)行熒光分析的任何熒光測量(參看EBC法4.16.2)。所使用的熒光染料卡爾科弗盧爾在溶液中與含有分子量超過10，OOODa的高分子量β_葡聚糖復(fù)合，以增加染料的熒光強(qiáng)度。
[0005]Analytica-EBC還例舉了基于吸收波長在550nm的β -葡聚糖_染料復(fù)合物的形成來測定β -葡聚糖的分光光度分析法(EBC4.16.3)。(EBC法4.16.3是含有染料混合物的商品化試劑盒，剛果紅作為一種或主要的組分)。
[0006]現(xiàn)有方法存在一些缺陷。
[0007]卡爾科弗盧爾法是基于染料與葡聚糖之間的對光和氧高度敏感的反應(yīng)。EBC8.13.2,4.16.2和3.10.2中所公布的那種熒光法尚未應(yīng)用于分立式分析儀；而自動(dòng)分立式分析儀通常是基于光度分析法。
[0008]另一方面，采用所推薦的光度法(剛果紅，EBC方法集4.16.3)所獲得的結(jié)果與采用卡爾科弗盧爾法所產(chǎn)生的結(jié)果不相吻合。這明顯地反映出這兩種方法測定的是β_葡聚糖聚合物的不同部分的事實(shí)。實(shí)際上，所使用的染料卡爾科弗盧爾與剛果紅對于不同種類的分子分?jǐn)?shù)很敏感。進(jìn)一步來說，光度EBC剛果紅法很難在自動(dòng)分析儀中使用，這是因?yàn)樗鼉?yōu)選需要一個(gè)預(yù)處理柱以區(qū)分不同大小的分子。該方法也很慢。
[0009]除了在EBC手冊中規(guī)定的具體方法外，本領(lǐng)域中還有其他的分析β -葡聚糖濃度的方法。
[0010]一種替代的分光光度法是基于使用Lichinase酶，該方法包括測量和測定從β-葡聚糖中獲得的作為酶降解產(chǎn)物的葡萄糖。但是，此方法也沒有得到與熒光卡爾科弗盧爾法相吻合的結(jié)果，這是因?yàn)槊笇⑺械木酆衔镦湶鸱譃槠咸烟菃误w，這意味著分析結(jié)果將反映葡聚糖分子的所有大小/聚合物的總濃度。正如EBC4.16.3中的分光光度法，此方法也很難用于自動(dòng)操作，這是因?yàn)樗枰訜嵋约皹悠分性咸烟呛康臏y量。
[0011]總之，Analytica-EBC中所述的且常用于釀造工業(yè)中的熒光分析法需要流動(dòng)注射分析或者微孔板閱讀器，以進(jìn)行熒光性并以及因此β_葡聚糖的可重現(xiàn)量化。手動(dòng)的光度法是基于分子量大小約2.5Χ IO5的β -葡聚糖吸附到染料剛果紅上和/或在測量之前他們需要進(jìn)行依賴大小的過濾來獲得最佳效果。
[0012]熒光法和分光光度法的結(jié)果彼此不相吻合，為此，分光光度法方法在釀造工業(yè)中的應(yīng)用范圍較小。
[0013]實(shí)際上，啤酒工業(yè)必須遵循EBC或ASBC的建議。因此，卡爾科弗盧爾一直都用于熒光檢測，其商品名為卡爾科弗盧爾和熒光增白劑28。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0014]本實(shí)用新型的目的是解決至少一部分本領(lǐng)域中存在的上述問題，并提供一種用于選擇性地測定液體樣品中的β -D-葡聚糖的技術(shù)方案。
[0015]本實(shí)用新型提供了 一種容易適用于樣品、如采自谷物(如燕麥或大麥)的加工過程的液體樣品的分析方法，其可任選地可以在自動(dòng)分析儀上施行。這種谷物樣品可能可任選地含有單獨(dú)添加的β-D-葡聚糖。作為加工的結(jié)果，與樣品中天然存在的水平的含量相比，該樣品可能還會出現(xiàn)β-D-葡聚糖含量的貧化。
[0016]本實(shí)用新型還提供了一種分析方法，該方法容易適用于其中天然含有β-D-葡聚糖或其中含有單獨(dú)添加的β-D-葡聚糖的非谷物來源的樣品，并且可任選地可以在自動(dòng)分析儀上施行。
[0017]本實(shí)用新型基于下述發(fā)現(xiàn)，即二苯乙烯基熒光試劑卡爾科弗盧爾可以在測定液體樣品中的β-D-葡聚糖的分光光度法中用作染料。
[0018]與熒光分析中使用的卡爾科弗盧爾試劑相反，卡爾科弗盧爾熒光增白劑M2R(Calcofluor White M2R)是無色的，已經(jīng)用于殼聚糖酶的動(dòng)力學(xué)光度分析中來測定其酶活力(Somashekat和Josept, 1997年)。該方法既不是定量的，也不是自動(dòng)的或快速的。相反，該方法被用于研究染料和殼聚糖酶之間的相互作用。在406nm的波長處測定吸光度。
[0019]本實(shí)用新型依賴于卡爾科弗盧爾試劑和葡聚糖多糖聚合物的大分子量部分之間的復(fù)合物的形成或絡(luò)合反應(yīng)。
[0020]出人意料地，發(fā)現(xiàn)了相同的試劑或者相同類型(卡爾科弗盧爾)的試劑在所述染料用于測量熒光性的反應(yīng)時(shí)和在采用光度測定法測量樣品時(shí)得到相同的結(jié)果。
[0021]基于上述，該方法包括以下步驟使含有樣品的β_葡聚糖與液相中的染料接觸，將β -葡聚糖與染料絡(luò)合得到改良液相，在主波長及次波長(可任選地)處采用光度法測量改良液相的吸光度，并且基于改良液相的吸光度來測定β -葡聚糖濃度。
[0022]熒光卡爾科弗盧爾染料可用于谷物來源的樣品或者含有添加的β -葡聚糖的非谷物來源的樣品中的β_葡聚糖的光度法測定中。優(yōu)選地，樣品含有由水或溶劑形成的液相。[0023]該試劑能夠以其中包含至少一個(gè)含有卡爾科弗盧爾的容器的光度法檢測試劑盒的形式提供。
[0024]更加具體地說，本實(shí)用新型提供了一種用于光度式測定樣品中的β -D-葡聚糖的存在的試劑盒，其中，所述試劑盒包括:
[0025]a)至少一個(gè)容量為I?1000ml的第一容器，和容納在第一容器內(nèi)的選自卡爾科弗盧爾型染料的第一組分，
[0026]b)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的第二容器，和容納在第二容器內(nèi)的選自緩沖溶液的第二組分，以及可任選的
[0027]c)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的第三容器，和容納在第三容器內(nèi)的選自用于涵蓋濃度范圍在I?2000mg/l的β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的第三組分。
[0028]根據(jù)本實(shí)用新型，所述試劑盒包括至少一個(gè)容量為I?IOOml并且含有卡爾科弗盧爾染料的容器，以及可任選的b)至少一個(gè)容量為I?IOOml的含有緩沖溶液的容器，以及可任選的c)至少一個(gè)容量為I?IOOml的含有用于涵蓋濃度范圍為15?500mg/l的β-葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的容器。
[0029]在一個(gè)實(shí)施例中，對于每種組分包括I?100個(gè)容器，至少I個(gè)容器用于每個(gè)組分。所述試劑盒包括I?100個(gè)容器，而至少I個(gè)容器用于每個(gè)組分。在一個(gè)實(shí)施例中，該試劑盒包括例如I?50個(gè)容器，優(yōu)選I?20個(gè)容器，一般每個(gè)組分多達(dá)10個(gè)容器，而至少I個(gè)容器用于每個(gè)組分。
[0030]根據(jù)本實(shí)用新型，所述試劑盒包括第一組容器，其包括2?50個(gè)含有第一組分的容器，可任選地包括第二組容器，其包括2?50個(gè)含有第二組分的容器，以及可任選地包括第三組容器，其包括2?50個(gè)含有第三組分的容器。
[0031]在一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒中，至少一個(gè)容器含有5?60ml的卡爾科弗盧爾染料。
[0032]在一另個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒中，至少一個(gè)容器含有5?60ml的緩沖溶液。
[0033]根據(jù)本實(shí)用新型，所述試劑盒中，至少一個(gè)容器含有5?60ml的用于涵蓋濃度范圍為I?2000mg/l的β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一個(gè)實(shí)施例中，該β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍優(yōu)選為I?1500mg/l、更優(yōu)選為I?1000mg/l、進(jìn)一步優(yōu)選為15?500mg/l。
[0034]在一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒包括清洗溶液、樣品預(yù)處理溶液或稀釋溶液及其組合，這些溶液在至少一個(gè)容器的容量均為I?1000ml，優(yōu)選為I?100ml。
[0035]在另一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒包括至少一個(gè)空的容器。
[0036]根據(jù)本實(shí)用新型，所述試劑盒包括選自使用說明、分析證明及加樣說明中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。
[0037]在一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑盒包括其中至少有一部分具有條形碼的容器。
[0038]通過本實(shí)用新型可以獲得相當(dāng)大的優(yōu)勢。因此，本方法所獲得的結(jié)果與依照EBC8.13.2，4.16.2，3.10.2和ASBC Wort-18所規(guī)定的使用卡爾科弗盧爾熒光染料通過熒光計(jì)所獲得的結(jié)果相吻合。本實(shí)用新型提供了使用卡爾科弗盧爾熒光染料對大麥β_葡聚糖進(jìn)行自動(dòng)化的高通量定量光度分析。
[0039]上文已經(jīng)提到，該方法可以對各種樣品特別是液體樣品、溶液以及分散體施行。其特別適用于測定谷物來源的液體樣品的β -D-葡聚糖含量。[0040]樣品的例子尤其是取自麥芽、麥芽汁和啤酒的樣品，一般是取自諸如麥芽等的谷物粉的任何樣品及其混合物，其本身或經(jīng)發(fā)酵或其他化學(xué)或生化處理后的均一樣品。樣品的進(jìn)一步來源包括水果和漿果的果汁，以及在不同處理階段的葡萄酒，尤其是年輕葡萄酒，及其他來自有機(jī)來源的食品。在一個(gè)實(shí)施方式中，樣品取自在將谷物粉、諸如麥芽等浸入水中、優(yōu)選25~100°C的溫水或熱水中以及發(fā)酵(可任選地)時(shí)獲得的成分。
[0041]除本身含有的β -D-葡聚糖成分，樣品中還可能包含其中還含有添加的或摻雜的β-D-葡聚糖的成分。
[0042]樣品可以是液體等的形式，或者還可以通過在水或溶劑中溶解或分散樣品材料來獲得。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0043]接下來將借助于詳細(xì)說明并參照附圖來詳細(xì)說明本實(shí)用新型。
[0044]圖1顯示了采用自動(dòng)光度測定分析儀(Gallery)測得的校準(zhǔn)曲線示例，
[0045]圖2顯示了采用自動(dòng)光度測定分析儀(Gallery)測得的線性度示例，
[0046]圖3是根據(jù)本實(shí)用新型的試劑盒的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0047]如以上的簡要說明，本實(shí)用新型提供了一種光度法測定例如谷物來源的液體樣品中的β-D-葡聚糖的新方法。
[0048]在下文中，“ β -D`-葡聚糖”和“ β -葡聚糖”可以替換使用。
[0049]提供了一種新型試劑組合物。該組合物的活性組分包含一種或幾種卡爾科弗盧爾染料，特別是具有能夠結(jié)合到葡聚糖中所存在的羥基的硫磺基團(tuán)(例如磺基)的一種或幾種卡爾科弗盧爾染料，或者由上述組成，或者基本上由上述組成。
[0050]尤其是，所述染料選自4，4’-雙[4-[雙(2-羥乙基)氨基]-6-苯胺基-1，3，5-三嗪基_2_基]氨基]二苯乙烯-2，2’- 二磺酸、5_[[4-(苯胺基)-6-[雙(2-輕乙基)氨基]-1，3，5-三嗪基-2-基]氨基]_2-[2-[4-[[4-(苯胺基)-6-[雙(2-羥乙基)氨基]-1，3，5-三嗪基-2-基]氨基]-2-磺酰苯基]乙烯基]苯磺酸鹽，以及4，4’ -雙[6-苯胺基_[4_[雙(2-輕乙基)氨基]-1，3, 5- 二嗪基-2-基]氨基]二苯乙烯_2，2’ - 二磺酸酯及其鹽，如鈉鹽。因此，在上述情況中列出的三種染料可以使用其相應(yīng)的二鈉鹽。
[0051]其他卡爾科弗盧爾染料的例子包括7_( 二乙氨基)-4_甲基色烯-2-酮和7_( 二乙氨基)-4-甲基-2H-1-苯并吡喃-2-酮及其鹽。
[0052]優(yōu)選地，該活性組分即該染料可以在pH值9~11的條件下再生。
[0053]該試劑盒組合物通常包括一種液體組合物，其由染料溶于額外含有用來調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值的緩沖劑、例如TritonX-1OO的液相中形成。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述液體組合物含有以質(zhì)量計(jì)大約0.01~0.1%、例如大約0.05%的染料，以及以質(zhì)量計(jì)0.01~1%、特別是大約0.1%的緩沖液，其用合適的堿如NaOH將pH值調(diào)整到10±0.5的范圍內(nèi)。
[0054]所述染料的商品名為熒光增白劑28(Fluorescent Brighter28)、卡爾科弗盧爾熒光增白劑 M2R (Calcofluor White M2R)，以及天來寶 UNPA-GX (Tinopal UNPA-GX)? 其分子的CAS號碼為4404-43-7，或者是含有如熒光增白劑或其鹽類的卡爾科弗盧爾類試劑的衍生物，如CAS號碼為4193-55-9或95508-20-6。
[0055]在卡爾科弗盧爾染料中，尤其優(yōu)選的是卡爾科弗盧爾熒光增白劑M2R，因?yàn)樗菬o色的。然而，卡爾科弗盧爾熒光增白劑染料也容易使用，因?yàn)樗乃{(lán)顏色或色調(diào)可以在分析中被消隱。
[0056]這種染料與β -D葡聚糖之間的反應(yīng)是在緩沖pH值范圍為7?10，特別是7.5?
8.5的條件下進(jìn)行的。
[0057]在一個(gè)實(shí)施例中，任何樣品顏色干擾都可以通過緩沖液或樣品消隱來消除。實(shí)際上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，樣品的顏色會干擾檢測，例如含有在測量范圍內(nèi)具有吸光度的組分的啤酒。根據(jù)該實(shí)施例，這種干擾可以通過使用一種其中樣品的顏色可采用消隱法消除的雙試劑測量法來消除。在測量中，首先對三羥甲基氨基甲烷緩沖液以及樣品(例如10?1000 μ I的體積量的一部分，例如約50?300 μ I)進(jìn)行測量以確定背景吸光度。然后添加試劑染料，并在反應(yīng)進(jìn)程中或者在反應(yīng)完成后進(jìn)行另一吸光度值的測定。與使用卡爾科弗盧爾的不穩(wěn)定的(對光和氧化敏感)熒光測定法不同，已獲得了一種穩(wěn)定的光度反應(yīng)。
[0058]若要消除試劑本身的任何光敏性，可以將該試劑存儲在深色瓶子內(nèi)。在用于自動(dòng)測量(板載)時(shí)，試劑可以很好地避光。因此，這里所述的試劑組合物特別適用于可以同時(shí)處理若干分析物的自動(dòng)分析儀中進(jìn)行可靠性好、重復(fù)性高的光度法測定。
[0059]消隱法與可靠性好的光度測量法的結(jié)合將消除原試劑染料的穩(wěn)定性差的問題。
[0060]基于上述，該方法包括以下步驟:
[0061]-在緩沖pH值為7?10條件下使樣品與卡爾科弗盧爾染料接觸；
[0062]-使β-葡聚糖與染料復(fù)合；
[0063]-在波長為380?450nm、例如405nm處對復(fù)合物的吸光度進(jìn)行光度法測量；
[0064]-基于由此得到的吸光度來測定葡聚糖的復(fù)合部分的濃度。
[0065]利用規(guī)定的方法，可以對未經(jīng)單獨(dú)預(yù)處理的樣品進(jìn)行β -D-葡聚糖的測定。
[0066]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，在該方法中，實(shí)際測量步驟優(yōu)選在溫度范圍為0.5?50°C，例如在溫度范圍為I?20°C，或在高于室溫的溫度，例如在大約37°C ±5°C的溫度的條件下進(jìn)行。
[0067]在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，吸光度不僅可以在被認(rèn)為是主波長的規(guī)定波長405nm處，或更為一般地在380?450nm處測量，而且還可以在500?800nm、如600nm的次波長處測量。
[0068]在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，該方法包括對β_葡聚糖進(jìn)行定量的終點(diǎn)測定。因此，反應(yīng)可在開始進(jìn)行吸光度測定前完成。反應(yīng)在終點(diǎn)測量之前的孵育步驟中發(fā)生。反應(yīng)速度取決于溫度，孵育時(shí)間依賴于測量時(shí)的溫度和溶液的體積。
[0069]在另一個(gè)實(shí)施例中，通過動(dòng)力學(xué)測量進(jìn)行測定，該術(shù)語是指這樣一種過程，其中吸光度是在反應(yīng)進(jìn)行過程中按照一定的時(shí)間間隔進(jìn)行測量。動(dòng)力學(xué)檢測也可在微量滴定板閱讀器平臺上進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施例中，在大約I?30°C、例如在15?25°C的溫度下進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測量。合適的溫度取決于反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。反應(yīng)向較低的溫度減慢，使得可以采用動(dòng)力學(xué)測量而非終點(diǎn)測量?？梢愿鶕?jù)儀器規(guī)格來選擇適宜的溫度。上文中所提供的方法可以在自動(dòng)分析儀上施行。如果需要的話，可對樣品進(jìn)行自動(dòng)稀釋。
[0070]因此,在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法采用Thermo Fisher Scientific Gallery或Arena分析儀(由賽默飛世爾科技有限公司，Thermo Fisher Scientific Inc.提供)或另一種光度測定分立式分析儀施行。
[0071]在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法采用流動(dòng)注射型儀器、微孔板閱讀儀進(jìn)行，或使用常規(guī)型分光光度計(jì)手動(dòng)進(jìn)行。
[0072]由于是測定β-D-葡聚糖組合物的選擇性部分，即大分子部分，通常分子量為10，OOODa或更大，例如達(dá)到700，OOODa,因而本實(shí)用新型是選擇性的。從這個(gè)方面來看，該測定的結(jié)果能夠完全地與使用不同的卡爾科弗盧爾染料的熒光分析結(jié)果相當(dāng)。
[0073]如上所述，在一個(gè)實(shí)施例中，液體樣品是“均一的”是指通常的任何樣品，一般為任何含有目標(biāo)分子的可被分析的代表性部分水基樣品。一方面，均一的樣品是透明的，或者任何分散相在室溫下持續(xù)在至少30min以上的時(shí)間、優(yōu)選至少2個(gè)小時(shí)不發(fā)生沉積。
[0074]在另一個(gè)實(shí)施例中，對渾濁的樣品或經(jīng)離心處理的渾濁的有色樣品進(jìn)行測定。出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過樣品的消隱可以消除任何本底吸收，而不會減損測量的可靠性。該方法是特別適用于對源自啤酒制備過程中的工業(yè)生產(chǎn)液流的樣品進(jìn)行常規(guī)分析。所述樣品取自含有麥芽汁或麥芽的液體流，或者一般是取自諸如麥芽等的谷物粉的任何樣品及其混合物，其本身或經(jīng)發(fā)酵或其他化學(xué)或生化處理后的液體流。
[0075]樣品中β -葡聚糖的濃度通常大致上約為0.1?10，000mg/l，特別地約為0.1?1500mg/l,優(yōu)選地約為0.1?500mg/l。原β -葡聚糖濃度高的樣品可以被稀釋到更適合的濃度范圍。
[0076]本實(shí)用新型提供了一種用于光度法測定含有所述葡聚糖的樣品中的β -D-葡聚糖的存在的試劑盒10，如圖3所示。該試劑盒10包括:a)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的含有選自卡爾科弗盧爾型染料的第一組分的第一容器1，可任選地b)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的含有選自緩沖溶液的第二組分的第二容器2，以及可任選地c)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的含有選自用于涵蓋濃度范圍在I?2000mg/l的β -葡聚糖的例如用于質(zhì)量控制或校定目的的標(biāo)準(zhǔn)溶液的第三組分的第三容器3 (見下文)。該試劑盒還可以另外包括清洗溶液、樣品預(yù)處理溶液或稀釋溶液，每種至少存在于一個(gè)容量為I?IOOOml的容器中。另外，還可以包括至少一個(gè)空的容器。
[0077]通常情況下，該容器的容量在I?20ml、I?60ml、I?IOOmlU?200ml、I?300ml、I ?400ml、I ?500ml、I ?600ml、I ?700ml、I ?800ml、I ?900ml 或 I ?IOOOml
的范圍內(nèi)。
[0078]用于第一試劑的容器的一般尺寸為20ml、50ml和60ml。
[0079]上述標(biāo)準(zhǔn)溶液可涵蓋從I?2000mg/l、l?1500mg/l、l?1000mg/l或15?500mg/l的濃度范圍。
[0080]每個(gè)試劑盒中通常有I?20個(gè)容器，然而也可以提供包含有甚至50?150個(gè)容器的試劑盒(每盒)。至少I個(gè)容器用于每種試劑或組分，一般每個(gè)試劑(即組分)多達(dá)10個(gè)容器。在一個(gè)實(shí)施例中，每種組分可以包含于一組容器中，每組分別包含有2?50個(gè)容器。
[0081]根據(jù)一個(gè)實(shí)施例，至少一個(gè)容器中含有5?60ml的卡爾科弗盧爾染料(取決于容器容量)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施例，至少一個(gè)容器中含有5?60ml的緩沖溶液(取決于容器容量)。根據(jù)又一個(gè)實(shí)施例，至少一個(gè)容器中含有5?60ml的β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液或溶液(取決于容器容量)。還可以是這些實(shí)施例中的兩個(gè)或三個(gè)的組合。[0082]該試劑盒還可能含有例如使用說明、分析證明或加樣說明。在容器上可以任選地設(shè)有條形碼。
[0083]接下來通過非限制性的工作實(shí)施例對本實(shí)用新型進(jìn)行說明。
[0084]在這些實(shí)施例中，空白試劑和啟動(dòng)試劑組成如下:
[0085]空白試劑:
[0086]三羥甲基氨基甲烷緩沖液，pH大約為8。
[0087]啟動(dòng)試劑:
[0088]0.05%的熒光增白劑28溶于0.1%的TritonX-100中，用IM的NaOH將pH值調(diào)整到約10。
[0089]熒光增白劑是4，4’-雙[4-[雙(2-羥乙基)氨基]_6_苯氨基_1，3，5_三嗪基-2-基]氨基]-二苯乙烯-2，2’ - 二橫酸的二鈉鹽。
[0090]實(shí)施例1
[0091]用于分立式分析儀的應(yīng)用實(shí)施例
[0092]下面的實(shí)施例在自動(dòng)光度分析儀上進(jìn)行，該分析儀由賽默飛世爾科技提供，名為Thermo Scientific Gallery Plus。它是專門用于食品、飲料、水和土壤檢測的高容量臺式系統(tǒng)。Thermo Scientific Gallery Plus是一種自動(dòng)化的系統(tǒng),可用于大量樣品的實(shí)驗(yàn)室檢測。分析步驟均為自動(dòng)。
[0093]Gallery Plus的分立單元技術(shù)允許對同一樣品同時(shí)進(jìn)行若干不同檢測的測量，并且不需要隨時(shí)間而改變方法。該技術(shù)適應(yīng)于各種工業(yè)和環(huán)境應(yīng)用。Gallery Plus能夠達(dá)到很低的檢出水平，這是特別重要的，例如在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行水質(zhì)檢測。此外，利用比色法可以通過任選的電化學(xué)(ECM)裝置來測量電導(dǎo)率和pH值。在必要時(shí)，稀釋和再分析均可以完全自動(dòng)地處理,正如對試劑使用情況進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)視一樣。
[0094]以下參數(shù)適合于在Gallery或類似類型的分立式分析儀上應(yīng)用本實(shí)用新型的方法:
[0095]緩沖液，pH值8，分配量120 μ I (2?120 μ I)
[0096]樣品，分配量20 μ 1(2 ?120 μ I)
[0097]孵育，200s(O ?3600s)
[0098]空白測量，在405nm(380 ?450nm)處，次波長 600nm(500 ?800nm)
[0099]啟動(dòng)試劑，分配量18 μ 1(2 ~ 120 μ I)
[0100]孵育，450s(O ?3600s)
[0101]終點(diǎn)測量，在405nm處，次波長600nm
[0102]分配量取決于樣本基質(zhì)和濃度。孵育時(shí)間取決于分配量和溫度。
[0103]圖1顯示出采用Gallery測得的校準(zhǔn)曲線的示例。校準(zhǔn)曲線取決于實(shí)際應(yīng)用和基質(zhì)。不同的校準(zhǔn)器、分配量和孵育時(shí)間可能會改變所測得的吸光度。
[0104]圖2顯示了采用Gallery測得的線性度示例。線性度是利用水基標(biāo)準(zhǔn)溶液(15?500mg/l,大麥β -葡聚糖,Sigma-Aldrich)獲得的。線性曲線取決于實(shí)際應(yīng)用和基質(zhì)。不同的基質(zhì)、分配量和孵育時(shí)間可能會改變線性曲線。可以通過改變自動(dòng)稀釋參數(shù)或使用手動(dòng)預(yù)稀釋來擴(kuò)展線性度范圍。
[0105]表1.利用Gallery測得的精度示例
【權(quán)利要求】
1.一種用于光度式測定含有β-D-葡聚糖的樣品中的所述β-D-葡聚糖的存在的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括: a)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的第一容器，和容納在所述第一容器內(nèi)的選自卡爾科弗盧爾型染料的第一組分， b)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的第二容器，和容納在所述第二容器內(nèi)的選自緩沖溶液的第二組分，以及可任選的 c)至少一個(gè)容量為I?IOOOml的第三容器，和容納在所述第三容器內(nèi)的選自用于涵蓋濃度范圍在I?2000mg/l的β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的第三組分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包括至少一個(gè)容量為I?IOOml并且含有卡爾科弗盧爾染料的容器，以及可任選的b)至少一個(gè)容量為I?IOOml的含有緩沖溶液的容器，以及可任選的c)至少一個(gè)容量為I?IOOml的含有用于涵蓋濃度范圍為15?500mg/l的β-葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液的容器。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，對于每種組分包括I?100個(gè)容器，至少I個(gè)容器用于所述每個(gè)組分。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包括第一組容器，其包括2?50個(gè)含有第一組分的容器，可任選地包括第二組容器，其包括2?50個(gè)含有第二組分的容器，以及可任選地包括第三組容器，其包括2?50個(gè)含有第三組分的容器。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，至少一個(gè)容器含有5?60ml的卡爾科弗盧爾染料。
6.根據(jù)權(quán)利要求1?5中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，至少一個(gè)容器含有5?60ml的緩沖溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，至少一個(gè)容器含有5?60ml的用于涵蓋濃度范圍為I?2000mg/l的β -葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包括至少一個(gè)空的容器。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包括選自使用說明、分析證明及加樣說明中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包括其中至少有一部分具有條形碼的容器。
【文檔編號】G01N21/78GK203630037SQ201320065541
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月3日
【發(fā)明者】莎莉·蒂卡諾亞, 安奴·索涅米·卡哈拉, 莉莎·奧塔馬 申請人:賽默飛世爾科技公司