一種用乙醇變性快速測定乳制品中蛋白質(zhì)摻假的方法
【專利摘要】本發(fā)明將牛奶用考馬斯亮蘭法測定，其吸光度為A前。同時，將其用1：2的乙醇變性沉淀，過濾后，濾液用相同的考馬斯亮蘭法測定，吸光度為A后。計算A后/A前作為判斷牛奶是否摻假的根據(jù)。根據(jù)大量測量數(shù)據(jù)，正常比值應(yīng)該在9％～12％，高于此數(shù)值，即為加入其它含氮物質(zhì)，可判為摻假。所需時間僅20分鐘，大大縮短了判斷摻假的時間。有色樣品進(jìn)行脫色后采用上述方法測定。奶粉可稀釋后后采用上述方法測定。
【專利說明】—種用乙醇變性快速測定乳制品中蛋白質(zhì)摻假的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]乳制品中總蛋白質(zhì)含量可用比色法測定，將發(fā)明將乳制品用考馬斯亮蘭法測定，其吸光度為Aw。同時，將其用1:2的乙醇變性沉淀，過濾后，濾液用相同的考馬斯亮蘭法測定，吸光度為ΑΒ。計算Ajs/Ati作為判斷牛奶是否摻假的根據(jù)。并和凱氏定氮法的數(shù)據(jù)進(jìn)行校正，兩者扣除后，可得到乳制品中非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量，使其得到更好的利用于食品、醫(yī)藥和保健品等領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]牛奶、奶粉等乳制品由于營養(yǎng)價值高，隨著人民生活水平的提高，得到快速發(fā)展。
[0003]到2010年，中國將有5700萬戶城市家庭步入中產(chǎn)階層，其中多數(shù)中國城市家庭處于4-6個成年人撫養(yǎng)一個孩子的階段。屆時，中國將可能成為高端嬰幼兒奶粉市場的第一大市場。相信，中國的乳制品市場有著巨大的發(fā)展空間。
[0004]乳制品作為新生嬰幼兒的重要的營養(yǎng)來源，甚至在很大程度上替代了母乳的分量，越來越直接地影響著千萬新生兒的身體健康和生命安全，并直接影響著千千萬萬個普通家庭。自“三聚氰胺”事件發(fā)生后，我國的乳制品市場格局發(fā)生了劇烈的變革，但乳制品安全依然成為行業(yè)企業(yè)乃至全社會最關(guān)心的問題。同時，也對牛奶、奶粉等乳制品的質(zhì)量安全提出了更高的要求。
[0005]蛋白質(zhì)是乳制品最重要的營養(yǎng)成分，是乳制品作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑的根本指標(biāo)，對蛋白質(zhì)含量的檢測是控制乳產(chǎn)品質(zhì)量的重要手段。但是，由于現(xiàn)行的測定乳制品的方法是凱氏定氮法，測定的是總的含氮量，這給不法分子以可乘之機(jī)，可以在產(chǎn)品中加入尿素、三聚氰胺等高含氮的物質(zhì)，以冒充蛋白質(zhì)。最近，發(fā)生的三聚氰胺奶粉事件，給少年兒童的健康造成了極大的損害，因此，建立一種能快速甄別摻假乳制品的測定方法是十分必要的。
[0006]眾所周知，現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)測定方法是凱氏定氮法，其基本原理是:食品(以及所有含氮化合物)經(jīng)加入硫酸消化使蛋白質(zhì)和各種含氮化合物分解，其中氮素與硫酸化合成硫酸銨。然后加堿蒸餾使氨游離，用硼酸液吸收后，再用鹽酸或硫酸滴定根據(jù)鹽酸消耗量，再乘以換算系數(shù)即為蛋白含量。該方法準(zhǔn)確度較高，并且由于歷史的原因，是一種公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，各種數(shù)據(jù)容易比較、對照，所以，至今仍是標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)測定方法。
[0007]但該方法繁瑣、費(fèi)時、費(fèi)力，生產(chǎn)過程中，要即時測定、控制很難；由于難以同時測定多個樣品，要檢測大量樣品時，十分困難。
[0008]另一個嚴(yán)重的困擾是，在已知含有其他含氮化合物的時候必須測定非蛋白質(zhì)類含氮化合物的量加以扣除，但是，當(dāng)一個非自然物質(zhì)含有的非蛋白質(zhì)類含氮化合物不明確的情況下，就無法扣除，測定方法就產(chǎn)生誤差。特別是當(dāng)產(chǎn)品中非法地加入尿素、三聚氰胺等含氮的物質(zhì)時，均可被消化、測定，并無法扣除，即使現(xiàn)在已經(jīng)研究了測定尿素、三聚氰胺的方法，但是，不能排除不法分子用其他非蛋白質(zhì)類含氮化合物冒充作假。
[0009]總之，凱氏定氮法費(fèi)時、費(fèi)力，也難易判斷出摻假，不能快速測定是否摻假。
[0010]其它蛋白質(zhì)分析方法有很多，有電泳法、質(zhì)譜法、光譜法等。綜合考慮，光譜法快速、方便、成本低，是一種切實(shí)可行的方法。
[0011]常用的分析蛋白質(zhì)的光譜法包括:紫外光譜法、雙縮脲法、Folin酚法、BCA法、考
馬斯売蘭法等。
[0012]紫外光譜法是直接利用蛋白質(zhì)在280nm的吸收進(jìn)行測定，該法簡便，使用的儀器比較普及，設(shè)備價格不高。
[0013]雙縮脲法是利用蛋白質(zhì)中的肽鍵和堿性硫酸銅中的銅離子形成紫色絡(luò)合物，從而進(jìn)行定量。該法選擇性和準(zhǔn)確度好，精密度好；呈色穩(wěn)定性好，試劑單一，方法簡便。
[0014]Folin酹法是雙縮脲反應(yīng)的發(fā)展,它結(jié)合了雙縮脲反應(yīng)法中銅鹽反應(yīng)與Folin試劑反應(yīng)的特點(diǎn)，首先在堿性溶液中形成銅與蛋白質(zhì)復(fù)合物，然后該復(fù)合物通過芳香族氨基酸殘基、酪氨酸和色氨酸殘基的迅速反應(yīng)及肽鏈或極性側(cè)鏈或兩者的銅絡(luò)合物較慢的反應(yīng)，而把磷鑰酸、磷鶴酸色團(tuán)還原成深藍(lán)色，在750nm處測定光吸收值。此顏色反應(yīng)和蛋白質(zhì)含量在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系。該法靈敏度較高。
[0015]BCA法的原理是在堿性溶液中，蛋白質(zhì)將二價銅還原成一價銅，后者與測定試劑中BCA[bicin-choninic acid](金雞寧)生成一個在562nm處具有最大光吸收的紫色復(fù)合物。復(fù)合物的光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度正比。BCA法操作簡單，靈敏度與Folin —酚法相似，試劑十分穩(wěn)定，因此對時間控制不需那么嚴(yán)格。顯色后，Ih內(nèi)吸光度值無變化。抗試劑干擾的能力強(qiáng)。
[0016]考馬斯亮蘭是利用G_250(—種染料)和蛋白質(zhì)結(jié)合，蘭色加深，測定595nm處吸光度進(jìn)行定量。該法靈敏度高，快速簡便，干擾少。
[0017]其它各種各種方法則更加繁瑣。
[0018]以上各種方法，均需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，所需時間較長；判斷摻假也較困難。
[0019]現(xiàn)在，一般通過色譜法等方法檢測摻假的成分，但色譜法是針對各個物質(zhì)分別測定，從定性到定量，時間很長，幾天都算短的。
[0020]總之，現(xiàn)有方法要判斷乳制品中摻假，時間較長。鑒于以上原因，必須尋找快速測定蛋白質(zhì)摻假的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021]本發(fā)明將牛奶用考馬斯亮蘭法測定，其吸光度為Aw。同時，將其用1:2的乙醇變性沉淀，過濾后，濾液用相同的考馬斯亮蘭法測定，吸光度為ΑΒ。計算Ajs/Ati作為判斷牛奶是否摻假的根據(jù)。根據(jù)大量測量數(shù)據(jù)，正常比值應(yīng)該在9%?12%，高于此數(shù)值，即為加入其它含氮物質(zhì)，可判為摻假。
[0022]所需時間僅20分鐘，大大縮短了判斷摻假的時間。
[0023]有色樣品進(jìn)行脫色后采用上述方法測定。
[0024]奶粉可稀釋后后采用上述方法測定。
【具體實(shí)施方式】
[0025]實(shí)施例一
[0026]1.取市售5種牛奶各lmL，分別放入I?5號的IOOmL容量瓶中，定容至刻度線。從各容量瓶中取Iml稀釋過的牛奶放入相應(yīng)的25mL比色管中，再加入5mlL配制好的考馬斯亮藍(lán)，定容到IOmL刻度線，搖勻。用紫外分光光度計在595nm處測定吸光度，計為Aw。
[0027]2.將上述牛奶各取10mL，加入I:2乙醇(即20mL)，振搖，靜置，過濾，取濾液，用上述完全相同的考馬斯亮藍(lán)法測定，并考慮稀釋效應(yīng)，吸光度為ΑΒ。
[0028]3.計算A后/Ati的比值，結(jié)果如下:
[0029]
【權(quán)利要求】
1.選擇合適的比色法-考馬斯亮藍(lán)法，測定蛋白質(zhì)含量，其吸光度為Aw。
2.選擇合適的試劑乙醇，選擇合適的比例1:2，進(jìn)行變性沉淀，并過濾。
3.濾液用相同的考馬斯亮蘭法測定，吸光度為ΑΒ。
4.計算Ajs/Ati作為判斷牛奶是否摻假的根據(jù)。根據(jù)大量測量數(shù)據(jù)，正常比值應(yīng)該在9 %?12 %，高于此數(shù)值，即為加入其它含氮物質(zhì)，可判為摻假。
5.有色樣品進(jìn)行脫色后采用上述權(quán)利要求1-4方法測定。
6.奶粉可稀釋后后采用上述權(quán)利要求1-4方法測定。
【文檔編號】G01N21/33GK103575678SQ201310582126
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月15日
【發(fā)明者】宋健, 趙泳 申請人:江南大學(xué)