血漿8-異前列烷的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了血漿8-異前列烷在制備預(yù)測(cè)肺動(dòng)脈高壓患者預(yù)后效果的試劑盒中的用途，屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明通過(guò)一項(xiàng)前瞻性、臨床對(duì)照隊(duì)列試驗(yàn)研究證明8-異前列烷在肺動(dòng)脈高壓患者血漿中濃度顯著升高，且與WHO肺高壓功能分級(jí)以及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)有很好的相關(guān)性。血漿8-異前列烷濃度>97pg/ml提示患者生存率較差，是預(yù)測(cè)患者預(yù)后獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因素和新的生物標(biāo)志物。
【專利說(shuō)明】 血漿8-異前列烷的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001 ] 本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及血漿8-異前列烷，特別是血漿8-異前列烷的新的用途。
【背景技術(shù)】:
[0002]8-異前列烷是脂質(zhì)過(guò)氧化代謝特異性產(chǎn)物，在體內(nèi)生成，穩(wěn)定存在于血漿、組織液、體液中，且無(wú)種屬差異。正常機(jī)體含量少，日常差別不大。8-異前列烷被廣泛地認(rèn)為是反映慢性心力衰竭的生化標(biāo)志物。機(jī)體在氧化應(yīng)激/損傷水平升高時(shí)大量產(chǎn)生8-異前列烷，因此肺動(dòng)脈高壓患者8-異前列烷水平也顯著增加。最近的ー項(xiàng)研究結(jié)果顯示，在110名PAH患者中尿中8-異前列烷水平明顯升高，是獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素。但是尿中8-異前列烷濃度與這些患者血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)、6分鐘步行距離相關(guān)性不高，且缺乏正常對(duì)照。但血漿中8-異前列烷水平是否能評(píng)估肺動(dòng)脈高壓患者生存率和預(yù)后尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0003]本發(fā)明的目的在于提供了一種血漿中8-異前列烷的新的用途，所述的這種血漿中8-異前列烷的新的用途要解決現(xiàn)有生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)肺動(dòng)脈高壓患者生存率和預(yù)后效果不佳的技術(shù)問(wèn)題。
[0004]本發(fā)明提供了血漿8-異前列烷在制備預(yù)測(cè)肺動(dòng)脈高壓患者預(yù)后效果的試劑盒中的用途。
[0005]本發(fā)明是采用(Cayman公司)的酶聯(lián)免疫吸附(EIA)試劑盒來(lái)檢測(cè)血漿中的8_異前列烷的濃度。酶聯(lián)免疫試劑盒來(lái)檢測(cè)血漿中的8-異前列烷的濃度方法是經(jīng)過(guò)氣相色譜/質(zhì)譜法確定，并按照Cayman公司的酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)推薦的常規(guī)使用方法。
[0006]發(fā)明人通過(guò)試劑盒檢測(cè)血漿中的8-異前列烷的濃度，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血漿8-異前列烷濃度>97pg/ml提示患者生存率較差，是預(yù)測(cè)患者預(yù)后獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因素和新的生物標(biāo)志物。
[0007]本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其效果是積極和明顯的。本發(fā)明通過(guò)ー項(xiàng)前瞻性、臨床對(duì)照隊(duì)列試驗(yàn)研究證明8-異前列烷在肺動(dòng)脈高壓患者血漿中濃度顯著升高，且與WHO肺高壓功能分級(jí)以及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)有很好的相關(guān)性。血漿8-異前列烷濃度>97pg/ml提示患者生存率較差，是預(yù)測(cè)患者預(yù)后獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)因素和新的生物標(biāo)志物。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0008]圖1是標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的示意圖。
[0009]圖2顯示了標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品設(shè)計(jì)的方案。
[0010]圖3顯示了樣品濃度與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0011]圖4是8-異前列烷在肺動(dòng)脈高壓患者血漿中明顯升高。
[0012]圖5是血漿8-異前列烷濃度>97pg/ml提示患者生存率較差。[0013]圖6是血漿8-異前列烷與WHO肺高壓功能分級(jí)相關(guān)。
【具體實(shí)施方式】:
[0014]實(shí)施例1
[0015]本發(fā)明中使用試劑盒按照雙抗體一步夾心法進(jìn)行EIA免疫吸附試驗(yàn)。將8-異前列烷抗體預(yù)先包被微孔，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、8-異前列烷こ酰膽堿酯酶(AChE)標(biāo)記的檢測(cè)抗體(8-異前列烷示蹤物，Tracer)，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用結(jié)合AChE的底物顯色，最終轉(zhuǎn)化為深淺不同的黃顔色，用酶標(biāo)儀在412nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的線性關(guān)系計(jì)算樣品濃度。樣品中8-異前列烷濃度與計(jì)算轉(zhuǎn)換后的吸光度值呈正相關(guān)。該試劑盒適用于尿液、血漿中8-異前列烷濃度檢測(cè)，靈敏性和特異性較好，可檢測(cè)到的濃度至少為2.7pg/ml。試劑盒包括以下組成成分--①8-異前列烷EIA抗血清.’②8-異前列烷AChETracer !③8-異前列烷標(biāo)準(zhǔn)品原液(50ng/ml)沖液；④10XEIA緩沖液；? 400 X EIA洗滌液小鼠抗兔IgG預(yù)包被96孔板.’⑦96孔板覆蓋膜Ellman試劑；@ EIA Tracer染料；⑩EIA抗血清染料。(本發(fā)明的實(shí)施例采用的試劑盒為=Caymen公司的的名稱為“8-1soprostane EIA KU”，型號(hào)為N0.516351的試劑盒，具體使用說(shuō)明書(shū)和采購(gòu)可以根據(jù)Caymen公司的網(wǎng)站(www.caymanchem.com)或者其在全世界各地的經(jīng)銷商獲取。)
[0016]具體檢測(cè)步驟如下:
[0017](1) 1 XEIA緩沖液制備:將IOmllOXEIA緩沖液用90ml雙蒸水稀釋，制成I XEIA緩沖液備用。
[0018](2) IX洗滌液制備:將5ml400XEIA洗滌液用2L雙蒸水稀釋，制成I XEIA洗滌液備用。
[0019](3)EIA標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:取100 u I濃度為50ng/ml的8-異前列烷標(biāo)準(zhǔn)品原液加入900 u I雙蒸水制成5ng/ml貯存標(biāo)準(zhǔn)液。準(zhǔn)備8支干凈EP管，第I支加入900 yl I XEIA緩沖液，其余7支均加入750 u IlXEIA緩沖液；取100 u 15ng/ml標(biāo)準(zhǔn)液加入第I支EP管中充分混勻，標(biāo)記為SI，從SI管中取500 u I混合液加入第2支EP管中，標(biāo)記為S2 ;接下來(lái)從S2管中取500 ill混合液加入第3支EP管中，標(biāo)記為S3，以此類推，直到S8為止。具體的制作過(guò)程見(jiàn)圖1所示。
[0020](4)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品設(shè)計(jì)
[0021]取小鼠抗兔IgG預(yù)包被96孔板，按照下圖設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和加入樣品。做兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品需要做3個(gè)復(fù)孔，設(shè)計(jì)如圖2所示。
[0022]BLK代表空白孔:不加入任何液體；
[0023]TA代表總結(jié)合力:只加入-異前列烷AChE Tracer ；
[0024]NSB代表非特異性結(jié)合:加入EIA緩沖液和8_異前列烷AChE Tracer ；
[0025]BO代表最大結(jié)合力:加入EIA緩沖液、8-異前列烷AChE Tracer和8_異前列烷EIA抗血清；
[0026]S1-S8代表標(biāo)準(zhǔn)曲線:加入各濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、8-異前列烷AChE Tracer和8_異前列烷EIA抗血清；
[0027]1-24代表檢測(cè)樣品:加入樣品、8-異前列烷AChE Tracer和8_異前列烷EIA抗血清；[0028](5)各個(gè)設(shè)計(jì)孔加入試劑成分和量
[0029]各個(gè)孔按照下圖加入相應(yīng)的試劑和量。
[0030]
【權(quán)利要求】
1.血漿8-異前列烷在制備`預(yù)測(cè)肺動(dòng)脈高壓患者預(yù)后效果的試劑盒中的用途。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK103575879SQ201310548235
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】荊志成, 張銳, 蔣鑫, 趙勤華, 王嵐, 何晶 申請(qǐng)人:荊志成