基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法，包括：將指印轉(zhuǎn)移到基底上，得到指印樣本；往所述指印樣本的指印上加入手指代謝物的抗體溶液進(jìn)行孵育，孵育完成后用緩沖液進(jìn)行沖洗；將所述的指印樣本干燥，然后向指印上加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育；孵育后，用所述的緩沖液沖洗指印樣本，干燥后將指印樣本置于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液中，采集指紋圖像。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單、快速、發(fā)光強(qiáng)度高，成像效果好。
【專利說明】基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)和指紋檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]潛在指紋是經(jīng)身體自然分泌物(如汗液)轉(zhuǎn)移形成的指紋紋路，目視不易發(fā)現(xiàn)，是案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)中最常見的指紋。據(jù)我國各地不完全統(tǒng)計(jì)，警方偵破的刑事案件中，利用指紋破案占七成以上，并且比例正在逐年上升。通常情況下，指紋是犯罪分子在現(xiàn)場(chǎng)留下的最直接物證，所以，研究潛在指紋的顯現(xiàn)技術(shù)，是提高指紋物證的采取率和利用率的重要環(huán)節(jié)。
[0003]現(xiàn)代指紋學(xué)的發(fā)展已經(jīng)具有上百年的歷史，按照顯現(xiàn)原理的不同，傳統(tǒng)的潛在指紋顯現(xiàn)方法主要分為三類:光學(xué)顯現(xiàn)法、化學(xué)顯現(xiàn)法以及物理吸附法。其基本原理是使用一種光線或物質(zhì)作用于指紋印痕的汗液物質(zhì)，使不能看見的潛在指紋變?yōu)榭梢姷?。發(fā)展至今，指紋檢測(cè)不僅在法醫(yī)鑒定、個(gè)體識(shí)別方面起著重要作用，同時(shí)廣泛應(yīng)用于日常生活中的安全檢驗(yàn)、訪問控制、個(gè)人認(rèn)證等領(lǐng)域。近年來隨著分析科學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)指紋的研究已不僅僅停留在利用傳統(tǒng)物理或化學(xué)手段對(duì)其形貌進(jìn)行觀察，同時(shí)更加致力于發(fā)展各種新興技術(shù)如質(zhì)譜成像、紅外/拉曼成像、掃描電化學(xué)顯微鏡以及熒光免疫成像等，對(duì)指紋中的成分進(jìn)行分析檢測(cè)，從而發(fā)掘出更多有價(jià)值的生物學(xué)和醫(yī)學(xué)信息。比如，恐怖分子是否接觸過爆炸物、一個(gè)人是否具有吸煙的習(xí)慣，科學(xué)家都可以通過指紋檢測(cè)來獲取相關(guān)信息。
[0004]盡管指紋顯現(xiàn)技術(shù)在刑偵及分析科學(xué)中發(fā)揮著重大作用，但是目前在指紋顯現(xiàn)領(lǐng)域中仍然存在諸多困難。例如，在傳統(tǒng)方法中，大多要引用一種外源物質(zhì)來對(duì)潛在指紋進(jìn)行顯現(xiàn)，處理過程較為繁瑣復(fù)雜，同時(shí)對(duì)樣本具有破壞性。目前廣泛使用的煙熏法和刷粉法中采用的小粒度粉末對(duì)技術(shù)人員存在一定的身體損傷。而新興的指紋技術(shù)如質(zhì)譜成像法和紅外/拉曼成像法，則需要用到昂貴的大型儀器和專業(yè)的操作知識(shí)，不利于普及。因此目前仍然需要一種簡(jiǎn)單、快速、適用范圍廣的方法對(duì)潛在指紋進(jìn)行顯現(xiàn)。
[0005]化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析是將抗原與抗體的高特異性免疫反應(yīng)與高靈敏的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合的分析方法。它克服了放射性免疫因使用放射性同位素而引起的放射性危害及污染問題，克服了熒光免疫分析中所需儀器復(fù)雜、背景干擾大的缺點(diǎn)，具有靈敏度高、儀器價(jià)格低、使用簡(jiǎn)便、安全、無放射性污染等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，已成為標(biāo)記免疫的重要研究方向。伴隨著高靈敏度、高分辨率CCD檢測(cè)裝置的出現(xiàn)，化學(xué)發(fā)光成像檢測(cè)技術(shù)有了顯著進(jìn)步。與常規(guī)化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)相比，化學(xué)發(fā)光成像技術(shù)可以提供直觀圖像，能產(chǎn)生光學(xué)圖像的動(dòng)態(tài)信息，用于生物分祈、醫(yī)學(xué)臨床診斷時(shí)也顯得更為方便。目前并未有利用化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析來對(duì)指紋進(jìn)行檢測(cè)和成像的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法，該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏且發(fā)光強(qiáng)度高，能夠?qū)χ讣y進(jìn)行清晰的成像。[0007]—種基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋檢測(cè)與成像的方法，包括:
[0008](I)將指印轉(zhuǎn)移到基底上，得到指印樣本；
[0009](2)往所述指印樣本的指印上加入手指代謝物的抗體溶液進(jìn)行孵育，孵育完成后用緩沖液進(jìn)行沖洗；
[0010](3)將所述的指印樣本干燥，然后向指印上加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行
孵育；
[0011](4)孵育后，用所述的緩沖液沖洗指印樣本，干燥后將指印樣本置于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液中，采集指紋圖像。
[0012]人類指紋皮膚表面布滿汗腺，觸物留痕。一般來說留在客體表面的指紋物質(zhì)較少，一般為0.llmg，其中99%為水分，會(huì)迅速蒸發(fā)掉；固體物質(zhì)只占1%，其中2/3是有機(jī)物質(zhì)，如:氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪酸、尿素等；剩余1/3是無機(jī)物質(zhì)。首先選擇手指代謝物的抗體(一抗)，以及辣根過氧化氫酶(HRP)標(biāo)記的二抗，通過抗體與代謝物的特異性免疫反應(yīng)，使HRP間接標(biāo)記到指紋上，然后通過化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，即可顯示出指紋紋路。
[0013]步驟(I)中，所述的指印可以為血指印或汗?jié)撝赣　?br> [0014]所述的基底并沒有特殊要求，可以為玻璃板、塑料板、不銹鋼板、錫箔、紙片、膠帶
坐寸ο
[0015]當(dāng)所述的指印為血指印時(shí)，所述的手指代謝物具體可以為IgG。
[0016]當(dāng)所述的指印為汗?jié)撝赣r(shí)，所述的手指代謝物為表皮生長(zhǎng)因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽 Dermcidin。
[0017]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以IgG、表皮生長(zhǎng)因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽Dermcidin四種代謝物為目標(biāo)對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)，可成功對(duì)指紋成像，且指紋紋理清晰。
[0018]其中，IgG的抗體為羊抗人IgG，具體可購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DAC1011 ;表皮生長(zhǎng)因子抗體具體可購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DA1709 ;溶菌酶抗體可購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DA2322 ;人汗腺抗菌肽Dermcidin抗體可購自百奇生物科技有限公司，貨號(hào)AP6 718b。
[0019]所述抗體溶液的濃度為0.05?0.2mg/mL,優(yōu)選的，所述抗體溶液的濃度為0.1mg/mL。抗體溶液的濃度過高不僅浪費(fèi)試劑，還會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合，或顯色背景重，而濃度過低，則會(huì)導(dǎo)致抗原與抗體的反應(yīng)不完全，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度弱，從而影響指紋成像效果。
[0020]為使反應(yīng)充分進(jìn)行，加入抗體溶液后，所述孵育的時(shí)間為25?35min,優(yōu)選為30mino
[0021]所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗的濃度為0.005?0.015mg/mL,優(yōu)選為0.0lmg/mL。二抗?jié)舛冗^高會(huì)增加非特異性結(jié)合，且發(fā)光強(qiáng)度也不會(huì)無限增強(qiáng)，二抗?jié)舛冗^低則導(dǎo)致化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度弱，指紋成像不清晰。
[0022]為使反應(yīng)充分進(jìn)行，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗后，所述孵育的時(shí)間為25?35min,優(yōu)選為 30min。
[0023]步驟(2)和(4)中，所述的緩沖液為含0.1%吐溫-20的PBS緩沖液。
[0024]所述的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液為含0.15M似(:1、3.0\10-%魯米諾、1.4X10_4M對(duì)碘苯酚和1.2X 10_3M過氧化氫的Tris-HCl緩沖溶液，Tris-HCl緩沖溶液的pH為8.5。在辣根過氧化物酶的催化作用下，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液中的H2O2與魯米諾在指紋上產(chǎn)生波長(zhǎng)425nm的化學(xué)發(fā)光，從而顯現(xiàn)出指紋紋路。采用該種化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液可達(dá)到較好的發(fā)光效果。
[0025]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0026](I)本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單、檢測(cè)迅速，只需數(shù)秒鐘即可得到完整的指紋圖像，遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于掃描電化學(xué)顯微鏡技術(shù)(十幾至幾十小時(shí))。
[0027](2)本發(fā)明的方法不需要昂貴儀器，便于現(xiàn)場(chǎng)快速實(shí)時(shí)檢測(cè)，且發(fā)光試劑具有造價(jià)低、環(huán)境友好的優(yōu)點(diǎn)。
[0028](3)本發(fā)明以酶聯(lián)免疫分析為檢測(cè)手段、化學(xué)發(fā)光成像為信號(hào)獲取方式，與廣泛使用的熒光法相比，本發(fā)明的方法不需要外加激發(fā)光源，因此不存在背景光干擾，指紋圖像更加顯著清晰。
[0029](4)本發(fā)明方法的靈敏度高，可實(shí)現(xiàn)汗?jié)撝赣≈泻哿看x物(表皮生長(zhǎng)因子、溶菌酶、人汗腺抗菌肽Dermcidin等)的特異性檢測(cè)，能夠在進(jìn)行個(gè)體識(shí)別的同時(shí)還能實(shí)現(xiàn)汗?jié)撝赣〕煞址治龅哪康摹?br> 【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0031]其中，1、底座；2、池體；3、凹槽；4、0型密封圈；5、螺栓；6、樣本；
[0032]圖2a為羊抗人IgG濃度為0.0lmg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0033]圖2b為羊抗人IgG濃度為0.lmg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0034]圖2c為羊抗人IgG濃度為0.2mg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0035]圖3a為兔抗羊IgG/HRP濃度為0.0Olmg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0036]圖3b為兔抗羊IgG/HRP濃度為0.0lmg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0037]圖3c為兔抗羊IgG/HRP為0.05mg/mL時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0038]圖4a為一抗孵育時(shí)間為IOmin時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0039]圖4b為一抗孵育時(shí)間為30min時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0040]圖4c為一抗孵育時(shí)間為45min時(shí)檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0041]圖5為采用優(yōu)化后的試驗(yàn)條件，用羊抗人IgG檢測(cè)得到的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0042]圖6a為直接標(biāo)記法檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0043]圖6b為間接標(biāo)記法檢測(cè)的血指印化學(xué)發(fā)光圖；
[0044]圖7為用表皮生長(zhǎng)因子抗體檢測(cè)得到的潛在指紋化學(xué)發(fā)光圖；
[0045]圖8為用溶菌酶抗體檢測(cè)得到的潛在指紋化學(xué)發(fā)光圖；
[0046]圖9為用人汗腺抗菌肽Dermcidin抗體檢測(cè)得到的潛在指紋化學(xué)發(fā)光圖。
【具體實(shí)施方式】
[0047]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步闡釋本發(fā)明。
[0048]本發(fā)明采用的裝置為化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池。如圖1所示，該化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池包括底座I和池體2，均可采用聚四氟乙烯材料，底座I上具有用于容納樣本6的凹槽3。
[0049]池體2通過螺栓5固定在底座I上,池體2中空,池體2的中空部位正對(duì)凹槽3，且該中空部位設(shè)有O型密封圈4。[0050]使用時(shí)，將樣本置于凹槽3內(nèi)，向池體內(nèi)加入化學(xué)發(fā)光底物溶液，樣本上產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光會(huì)被高靈敏CCD照相機(jī)捕獲，由此得到指紋圖像。
[0051]值得注意的是，本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)并不依賴于該裝置。
[0052]試劑溶液
[0053](I)表皮生長(zhǎng)因子抗體:購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DA1709 ；
[0054](2)溶菌酶抗體:購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DA2322 ；
[0055](3)人汗腺抗菌肽Dermcidin抗體:購自百奇生物科技有限公司，貨號(hào)為AP6718b ；
[0056](4)羊抗人IgG:購自生工生物工程有限公司，貨號(hào)為DAC1011 ；
[0057](5)兔抗羊 IgG/HRP:購自 Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.,貨號(hào)為305-065-003 ；
[0058](6)羊抗兔IgG/HRP:購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)為bsb-0295G ；
[0059](7) PBS-T:0.1% 吐溫-20 的 PBS 緩沖液，pH 為 7.4。
[0060](8)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液:含0.15M NaCl、3.0父10-%魯米諾、1.4父10-%對(duì)碘苯酚和1.2X 10-3M過氧化氫的Tris-HCl緩沖溶液，Tris-HCl緩沖溶液的pH為8.5。
[0061]實(shí)施例1 [0062]1、不同羊抗人IgG濃度對(duì)指紋采集的影響
[0063](I)手指上蘸少量新鮮血液，在載玻片上按一枚血指??；
[0064](2)免疫標(biāo)記:用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L羊抗人IgG (抗體溶解時(shí)的溶劑均為含2%BSA，0.1%吐溫-20的PBS)滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min,用PBS-T沖洗以洗去未結(jié)合的抗體，用IS氣將表面吹干，再將100 μ L0.01mg/mL兔抗羊IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。
[0065](3)化學(xué)發(fā)光成像:將上述處理的載玻片(即樣本)安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像。
[0066]按照上述方法，采用不同的一抗(羊抗人IgG)的濃度(分別為0.01、0.1、0.211^/mL)進(jìn)行試驗(yàn),如圖2a-2c所示,一抗?jié)舛忍?0.01mg/mL)時(shí)化學(xué)發(fā)光較弱,指紋某些部位不夠清晰，而一抗?jié)舛葹?.lmg/mL可以使反應(yīng)充分,繼續(xù)提高一抗的濃度(0.2mg/mL)也不會(huì)使化學(xué)發(fā)光更強(qiáng)，所以一抗的濃度選用0.lmg/mL時(shí)效果較佳。
[0067]2、不同二抗?jié)舛葘?duì)指紋采集的影響
[0068]按照“1、不同羊抗人IgG濃度對(duì)指紋采集的影響”的方法，羊抗人IgG的濃度為0.lmg/mL，二抗(兔抗羊IgG/HRP)的濃度分別為0.001,0.01,0.05mg/mL，其余條件不變。
[0069]采集的指紋圖像如圖3a_3c所示,可以看出二抗的濃度(0.001mg/mL)太低時(shí)化學(xué)發(fā)光較弱，指紋圖像不清晰，二抗的濃度為0.01mg/mL可以使反應(yīng)充分,繼續(xù)提高二抗的濃度(0.05mg/mL)也不會(huì)使化學(xué)發(fā)光更強(qiáng),所以二抗的濃度為0.01mg/mL時(shí)效果較佳。
[0070]3、一抗孵育時(shí)間對(duì)指紋采集的影響
[0071]按照“1、不同羊抗人IgG濃度對(duì)指紋采集的影響”的方法，羊抗人IgG的濃度為0.lmg/mL, 二抗(兔抗羊IgG/HRP)的濃度為0.01mg/mL,加入一抗后，室溫培養(yǎng)時(shí)間分別為10min、30min、45min,其余條件不變。[0072]采集的指紋圖像如圖4a_4c所示，可以看出室溫培養(yǎng)時(shí)間為IOmin時(shí)，反應(yīng)不夠充分，化學(xué)發(fā)光較弱，指紋圖像不夠清晰，室溫培養(yǎng)時(shí)間為30min時(shí)反應(yīng)充分，繼續(xù)提高反應(yīng)時(shí)間（45min)也不會(huì)使化學(xué)發(fā)光更強(qiáng),所以反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為30min。
[0073]二抗的孵育時(shí)間可采用與一抗相同的孵育時(shí)間。
[0074]4、最優(yōu)條件
[0075](I)手指上蘸少量新鮮血液，在載玻片上按一枚血指??；
[0076](2)免疫標(biāo)記：用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L O. lmg/mL羊抗人IgG滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗以洗去未結(jié)合的抗體，用氬氣將表面吹干，再將100 μ L 0.05mg/mL兔抗羊IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。
[0077](3)化學(xué)發(fā)光成像：將上述處理的載玻片安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像。[0078]圖5示出了采用優(yōu)化后的反應(yīng)條件后采集的化學(xué)發(fā)光圖像，指紋的紋線清晰分明。
[0079]對(duì)比例
[0080](I)手指上蘸少量新鮮血液，在載玻片上按一枚血指??；
[0081](2)免疫標(biāo)記：用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L O. lmg/mL羊抗人IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。
[0082](3)化學(xué)發(fā)光成像：將上述處理的載玻片安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像。
[0083]如圖6a所示，直接用HRP標(biāo)記的一抗進(jìn)行處理指紋后成像(直接標(biāo)記)，指紋不清晰，而采用間接標(biāo)記（即按照“4、最優(yōu)條件”方法依次用一抗、HRP標(biāo)記的二抗處理后成像）后，起到了明顯的信號(hào)放大作用，發(fā)光更強(qiáng)（圖6b)。
[0084]實(shí)施例2
[0085](I)在載玻片上按一枚汗?jié)撝赣。?br> [0086](2)免疫標(biāo)記：用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L O. lmg/mL表皮生長(zhǎng)因子抗體滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗以洗去未結(jié)合的抗體，用氬氣將表面吹干，再將100 μ L O. Olmg/mL羊抗兔IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。
[0087](3)化學(xué)發(fā)光成像：將上述處理的載玻片安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像，得到圖7所示的化學(xué)發(fā)光圖像。
[0088]圖7示出了本實(shí)施例采集的化學(xué)發(fā)光圖像，指紋的紋線清晰分明。
[0089]實(shí)施例3
[0090](I)在載玻片上按一枚汗?jié)撝赣。?br> [0091](2)免疫標(biāo)記：用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L O. lmg/mL溶菌酶抗體滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗以洗去未結(jié)合的抗體，用氬氣將表面吹干，再將100 μ L O. Olmg/mL羊抗兔IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。[0092](3)化學(xué)發(fā)光成像:將上述處理的載玻片安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像。
[0093]圖8示出了本實(shí)施例采集的化學(xué)發(fā)光圖像，指紋的紋線清晰分明。
[0094]實(shí)施例4
[0095](I)在載玻片上按一枚汗?jié)撝赣。?br> [0096](2)免疫標(biāo)記:用免疫組化筆在指印周圍畫一個(gè)圈，以避免抗體溶液擴(kuò)散，將100 μ L 0.05mg/mL人汗腺抗菌肽Dermcidin抗體滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗以洗去未結(jié)合的抗體，用氬氣將表面吹干，再將100 μ L 0.01mg/mL羊抗兔IgG/HRP滴在指印上，于室溫培養(yǎng)30min，用PBS-T沖洗后氬氣吹干。
[0097](3)化學(xué)發(fā)光成像:將上述處理的載玻片安裝在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)池中，加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液，CCD照相機(jī)采集指紋圖像。
[0098]圖9示出了本實(shí)施例采集的化學(xué)發(fā)光圖像，指紋的紋線清晰分明。
[0099]上述實(shí)施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種基于化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析的潛在指紋成像的方法，其特征在于，包括: (1)將指印轉(zhuǎn)移到基底上，得到指印樣本； (2)往所述指印樣本的指印上加入手指代謝物的抗體溶液進(jìn)行孵育，孵育完成后用緩沖液進(jìn)行沖洗； (3)將所述的指印樣本干燥，然后向指印上加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行孵育； (4)孵育后，用所述的緩沖液沖洗指印樣本，干燥后將指印樣本置于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液中，采集指紋圖像。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的基底為玻璃板、塑料板、不銹鋼板、錫箔、紙片或膠帶。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的指印為血指印或汗?jié)撝赣　?br> 4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的指印為血指印時(shí)，所述的手指代謝物為 IgG。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的指印為汗?jié)撝赣r(shí)，所述的手指代謝物為表皮生長(zhǎng)因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽Dermcidin。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體溶液的濃度為0.05~0.2mg/mL。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗的濃度為0.005 ~0.015mg/mL。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)和(4)中，所述孵育的時(shí)間為25~35min。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的緩沖液為含0.1%吐溫-20的PBS緩沖液。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物溶液為含0.15MNaCl、3.0X 10-4Μ魯米諾、1.4X 10-4Μ對(duì)碘苯酚和1.2 X 10-3Μ過氧化氫的Tris-HCl緩沖溶液。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103543145SQ201310493609
【公開日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】蘇彬, 許林茹 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)