一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法，利用主客體熒光探針在水溶液介質(zhì)條件下，通過熒光發(fā)射光譜法及可視法，能夠高靈敏、高選擇性地檢測識別不同pH值條件下的賴氨酸或色氨酸或賴氨酸和色氨酸的混合物。
【專利說明】一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法屬分析化學(xué)及生命科學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]氨基酸是構(gòu)成生命體的基本物質(zhì)，是細(xì)胞代謝的基礎(chǔ)物質(zhì)。氨基酸的快速識別對細(xì)胞代謝分析具有重要意義，因此氨基酸的選擇性識別與檢測引起了人們極大的興趣。目前，對氨基酸進(jìn)行識別的常用方法是高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)和毛細(xì)管、電泳(CE)等各種色譜法。這些方法具有精確度高和檢出限低的優(yōu)點，但樣品前處理時間長、成本高，很難適應(yīng)快速檢測，限制了它們的應(yīng)用。近年來，由于熒光分析的高靈敏和高選擇性，實時原位檢測，設(shè)備簡單，多種用于氨基酸鑒別的熒光分子傳感器相繼被報道，然而多數(shù)熒光分子傳感器只能選擇性的識別一些含巰基等特殊功能基團(tuán)的氨基酸分子，而對其它氨基酸分子的高選擇性識別檢測則相對較少。尤其是不同PH值條件下關(guān)于氨基酸分子的檢測尚未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于發(fā)明一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法。本發(fā)明的目的通過下列技術(shù)措施完成:
本發(fā)明一種不同PH值下氨基酸的熒光檢測方法是在水溶液中，以七元瓜環(huán)簡稱Q[7]與吖啶鹽酸鹽形成的1:1超分子自組裝結(jié)構(gòu)的熒光探針P，在水溶液中熒光探針P與色氨酸或賴氨酸分子反應(yīng)后利用色氨酸或賴氨酸分子與七元瓜環(huán)Q[7]更容易形成超分子自組裝結(jié)構(gòu)，從而釋放吖啶分子作為熒光信號分子對色氨酸或賴氨酸分子進(jìn)行定性定量檢測，Q[7]與吖啶鹽酸鹽1:1形成的 超分子自組裝結(jié)構(gòu)簡稱熒光探針P的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法其特征是在水溶液中，以七元瓜環(huán)cucurbit [7]uril簡稱Q[7]與Π丫唳鹽酸鹽形成的1:1超分子自組裝結(jié)構(gòu)的突光探針P，在水溶液中熒光探針P與色氨酸或賴氨酸分子反應(yīng)后利用色氨酸或賴氨酸分子與七元瓜環(huán)Q[7]更容易形成超分子自組裝結(jié)構(gòu)，從而釋放吖啶分子作為熒光信號分子對色氨酸或賴氨酸分子進(jìn)行定性定量檢測，Q[7]與吖啶鹽酸鹽1:1形成的超分子自組裝結(jié)構(gòu)簡稱熒光探針P的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種不同PH值下氨基酸的熒光檢測方法，其特征是定性檢測色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物的方法是在一定濃度范圍內(nèi)的純熒光探針?biāo)芤褐?，?dāng)激發(fā)波長為245nm時，熒光探針的最大發(fā)射波長是480nm，當(dāng)熒光探針?biāo)芤褐写嬖谏彼峄蛸嚢彼峄蛏彼岷唾嚢彼岱肿踊旌衔飼r，在pH < 4.0情況下，熒光探針的最大發(fā)射波長從480nm藍(lán)移至470 nm表現(xiàn)為淺綠色熒光，在4.0 < pH < 5.5情況下，熒光探針的最大發(fā)射波長從480nm藍(lán)移至450nm表現(xiàn)為藍(lán)綠色熒光，在6.0 < pH≤7.2情況下的最大發(fā)射波長從480nm藍(lán)移至430nm表現(xiàn)為藍(lán)色熒光,色氨酸或賴氨酸分子的檢測限最低至 10-7 mol.L-1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種快速靈敏檢測硝酸分子的方法，其特征是定量分析方法為(1)熒光探針P溶液的配制方法，分別稱取14毫克七元瓜環(huán)及吖啶鹽酸鹽2.5毫克用水溶解，配制成10.0 mL，濃度為1.0 X 10-3 mol.L-1根據(jù)需要用蒸餾水逐級稀釋到1.00 X1(T4 mo I.L4的濃度；(2)色氨酸或賴氨酸及其它共存氨基酸分子的標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取優(yōu)級純氨基酸配制成IOOmL溶液，氨基酸濃度為1.0OXlO-3 mo I.L—1，根據(jù)需要用蒸餾水逐級稀釋到適宜的濃度；(3)取5個10.0 mL容量瓶中分別加入熒光探針1.00 X 10_4 mol噸―1標(biāo)準(zhǔn)液1.0 mL,分別加入1.00 X 10-4 mol.L-1，O, 0.2, 0.5, 1, 2毫升的色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物溶液，調(diào)節(jié)PH并稀釋至刻度搖勻，室溫放置5分鐘；(4)引入熒光光譜進(jìn)行測定，激發(fā)波長245nm; (5)以色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物濃度為橫坐標(biāo)，熒光強度為縱坐標(biāo)，得到工作曲線；(6)樣品測定，取10.0 mL容量瓶,加入探針濃度為1.00 X 10_4 mol.L-1 1.0 mL，加入被測色氨酸或賴氨酸或色氨酸和賴氨酸分子混合物溶液，稀釋至刻度，室溫放置5分鐘，引入3.0 cm的石英比色皿進(jìn)行熒光測定，根據(jù)熒光強度在工作曲線上查出樣品濃度。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種不同pH值下氨基酸的熒光檢測方法，其特征是定量檢測不同pH值下色氨酸或賴氨酸分子或色氨酸和賴氨酸分子混合物的方法,還可用標(biāo)準(zhǔn)加入法測定。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種不同PH值下氨基酸的熒光檢測方法的應(yīng)用，其特征是以Q[7]與吖啶鹽酸鹽形成的1:1的主客體化合物為熒光探針，在不同pH值環(huán)境中色氨酸或賴氨酸分子或色氨酸 和賴氨酸分子混合物測定中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N21/64GK103472047SQ201310444231
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月26日
【發(fā)明者】宋森, 倪新龍, 陶朱 申請人:貴州大學(xué)