4H-[1]-苯并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及糖蛋白特異性熒光檢測技術，具體地說是4H-[1]-苯并吡喃[4，3-b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用。本發(fā)明還提供了應用4H-[1]-苯并吡喃[4，3-b]噻吩-2-甲酸酰肼進行糖蛋白特異性熒光檢測的方法，包括步驟：將電泳后含蛋白質(zhì)樣品的凝膠在固定液中固定；高碘酸溶液氧化；乙酸水溶液沖洗；染色；洗脫。本發(fā)明具有靈敏度高、選擇性好、操作簡單迅速、重現(xiàn)性好、線性關系好、質(zhì)譜兼容性好、使用安全、成本低廉等優(yōu)點，可較好地適用于高通量蛋白質(zhì)組學的研究。
【專利說明】4H-[1]-苯并吡喃[4, 3-b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物 在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及糖蛋白特異性熒光檢測技術，具體地說是4H-[1]_苯并吡喃[4,3-b] 噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用。

【背景技術】
[0002] 蛋白質(zhì)糖基化修飾在生命科學研究領域具有至關重要的作用，作為最主要和普遍 的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，目前已知哺乳動物蛋白質(zhì)中至少有二分之一發(fā)生了糖基化，這 些糖蛋白廣泛分布于組織、細胞、體液中，特別是在細胞膜表面、體液等中含量豐富，糖基化 對于蛋白質(zhì)的折疊、運輸和定位等都起著重要作用，并參與受體激活、信號轉(zhuǎn)導、細胞載附 等諸多重要的生物過程。糖蛋白數(shù)量變化或糖鏈結構的改變，都可能導致疾病發(fā)生。不但 目前已知的很多疾病的診斷標志物是糖蛋白，而且通過國際標準認證的藥物中，糖蛋白也 占到較高的比例。
[0003] 目前糖蛋白檢測領域試劑盒主要集中于外國的生物試劑公司，且多數(shù)產(chǎn)品均以高 附加值的價格在市場銷售，價格高昂，不利于生物技術基礎研究的發(fā)展。尤其國內(nèi)利用現(xiàn) 有的生物試劑進行生物實驗成本居高不下，無法實現(xiàn)經(jīng)濟效益與實驗共同發(fā)展。本發(fā)明開 發(fā)的4H-[1]_苯并吡喃[4,3_b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物熒光染色方法靈敏度接近 Pro-Q Emerald488染色法，是一種靈敏、便捷、特異的糖蛋白熒光檢測技術，有較好的基礎 與臨床意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供4H-[1]_苯并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物 在糖蛋白特異性熒光檢測中的應用。
[0005] 本發(fā)明所述的4H-[1]_苯并吡喃[4,3_b]噻吩-2-甲酸酰肼相關化合物是指以 4H-[1]_苯并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼陰離子為母核的鈉鹽、鉀鹽和銨鹽等。
[0006] 4H-[1]_苯并吡喃[4, 3-b]噻吩-2-甲酸酰肼母核為：
[0007]

【權利要求】
1.4H-[1]_苯并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼及其衍生物在糖蛋白特異性熒光檢測 中的應用。
2. 如權利要求1所述的應用，其特征在于所述的4H-[1]_苯并吡喃[4, 3-b]噻吩-2-甲 酸酰肼及其衍生物為4H-[1]_苯并吡喃[4, 3-b]噻吩-2-甲酸酰肼的鈉鹽、鉀鹽或銨鹽。
3. -種凝膠上糖蛋白特異性熒光檢測方法，其包括步驟： 1) 將經(jīng)SDS-PAGE電泳后含蛋白質(zhì)樣品的凝膠置于固定液中固定10?60min，棄固定 液； 2) 在高碘酸溶液里氧化10?40min，其中高碘酸溶液為含重量體積比0. 1?1%的高 碘酸及按體積比〇. 5?5%的乙酸水溶液。然后用按體積比0. 5?5%的乙酸水溶液沖洗 2?5次，每次1?lOmin ; 3) 加入染色液1?40min，其中染色液為含重量體積比0. 0001?0. 001 %的4H-[1]-苯 并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼或其衍生物及按體積比0. 5?5%的乙酸水溶液； 4) 加入洗脫液，洗脫液為體積比0. 5?5%的乙酸，10?70%乙醇及0. 5?2%乙醇胺 水溶液，洗脫1?3次，每次1?lOmin ; 5) 檢測。
4. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟1)中凝膠固定時間為30min，固定液為 按體積比40 %乙醇/10 %乙酸溶液。
5. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)中凝膠在高碘酸溶液里氧化時間為 20min，其中高碘酸溶液為含重量體積比0. 5%的高碘酸及按體積比1 %的乙酸水溶液。然 后用按體積比1 %的乙酸水溶液沖洗3次，每次5min。
6. 如權利要求3?5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)染色液組成為按重量體 積比為0. 0002% 4H-[1]_苯并吡喃[4,3-b]噻吩-2-甲酸酰肼或其衍生物及按體積比1% 的乙酸水溶液。
7. 如權利要求3?5任一項所述的方法，其特征在于，步驟4)洗脫液組成為按體積比 1 %乙酸，40%乙醇及1 %乙醇胺水溶液。
8. 如權利要求3?5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)染色時間為15min。
9. 如權利要求3?5任一項所述的方法，其特征在于，步驟4)洗脫時間為20min。
10. 如權利要求3?5任一項所述的方法，其特征在于，步驟5)可在激光掃描儀下觀察 染色后的糖蛋白。
【文檔編號】G01N21/64GK104251849SQ201310268939
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年6月25日 優(yōu)先權日:2013年6月25日
【發(fā)明者】金利泰, 叢維濤, 朱忠欣, 洪國贏 申請人:溫州安得森生物科技有限公司