一種連翹葉中連翹酯苷a和連翹苷含量的測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量的測(cè)定方法，由以下步驟構(gòu)成：供試樣品溶液的制備、對(duì)照品溶液的制備、HPLC色譜條件、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果。該方法操作簡單，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，分離度好，結(jié)果可靠。
【專利說明】一種連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量的測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及成分的含量測(cè)定方法。

【背景技術(shù)】
[0002]連激Forsythia suspensa (Thunb.)Vahl是木犀科植物連翅屬落葉灌木。其果實(shí)為常用中藥材，具有清熱解毒，消腫散結(jié)，疏散風(fēng)熱的功效，具有顯著地解熱，抗菌，抗病毒的作用。連翹苷和連翹酯苷A作為其中的主要有效成分列入了 2010年版《中國藥典》含量測(cè)定的指標(biāo)成分。有文獻(xiàn)報(bào)道，連翹葉中的某些有效成分含量高于連翹果實(shí)，具有明顯的抗氧化、抗衰老等作用，部分地區(qū)常用連翹嫩葉制成連翹葉茶飲用，具有較好的保健價(jià)值。
[0003]目前也有測(cè)定連翹葉中活性成分的含量方法，但是重復(fù)性差，效果不好。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確的測(cè)定連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A含量的測(cè)定方法。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
一種連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量的測(cè)定方法，該方法由以下步驟構(gòu)成:
A、供試樣品溶液的制備:精密稱取連翹葉粉碎樣品0.1-0.5g，加入50-70%甲醇50ml，然后稱重，超聲提取10-30min，放冷后稱重，甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻過濾，即得供試樣品溶液；
B、對(duì)照品溶液的制備:精密稱取連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品，分別用50-70%甲醇配制成不同濃度的連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品溶液；
C、HPLC色譜條件:色譜柱C18柱，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液，流速為1.0mL/min,檢測(cè)波長為215-280nm，柱溫為30°C ；
D、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果:將不同濃度的連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品溶液6-10μ1在步驟C色譜條件下分析，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制連翹酯苷Α、連翹苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將供試樣品溶液在步驟C色譜條件下分析，將連翹酯苷Α、連翹苷的峰面積積分值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到連翹酯苷Α、連翹苷的含量。
[0006]作為優(yōu)選，步驟A中用0.22 μ m濾膜濾過。
[0007]作為優(yōu)選，步驟C中色譜柱規(guī)格為5Mm，4.6 X 150mm。
[0008]作為優(yōu)選，步驟C中甲醇-0.1%磷酸溶液的比例為27-37:73-630
[0009]以下是本發(fā)明方法的精確度、精密度的檢測(cè)結(jié)果。
[0010]儀器與試藥
Waters 高效液相色譜儀，包括 2695 Separat1ns Module, 2998 Photod1de ArrayDetector,工作站:Empower 2 Software Build 2154 ;超純水(Mill1-Q Advantage AlO超純水系統(tǒng))；甲醇(Fisher，色譜純)；其他試劑為分析純；連翹酯苷A對(duì)照品(批號(hào)為111810-201102，供含量測(cè)定用，含量以93.2%計(jì))來自中國食品藥品檢定研究院；連翹苷對(duì)照品(批號(hào)為110821-200610)來自中國藥品生物制品檢定所；連翹葉由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)為 20120501,20120901,20120902,20121101 ο
[0011]方法學(xué)考察
專屬性試驗(yàn):在上述色譜條件下，分別吸取連翹酯苷A對(duì)照品溶液、連翹苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白對(duì)照溶液進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果陰性無干擾，連翹酯苷A峰、連翹苷峰與其他峰分離良好。
[0012]線性關(guān)系考察:分別精密吸取濃度為29.317(^g/ml、58.634(^g/ml、73.2925μδ/ml,146.585(^g/ml、219.8774gg/ml、366.4624μδ/πι1 的連翹酯苷 A 對(duì)照品溶液各 10μ1，和濃度為 33.376(^g/ml、66.752(^g/ml、83.440(^g/ml、166.880(^g/ml、250.320(^g/ml、417.2000μδ/πι1的連翹苷對(duì)照品溶液各10μ1，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，連翹酯苷A和連翹苷的進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:計(jì)算得回歸方程:YaaiKiA= 1281.3706X +4256.8182 r=0.999980，Ym =2034.5969X -10608.2670 r=0.999991，結(jié)果表明連翹酯苷 A 在 293.170 ~3664.624ng 范圍內(nèi)；連翹苷進(jìn)樣量在333.760~4172.0OOng范圍內(nèi)，具良好的線性關(guān)系。
[0013]精密度試驗(yàn):分別取連翹酯苷A對(duì)照品溶液和連翹苷對(duì)照品溶液(連翹酯苷A73.2925 μ g/ml、連翹苷83.4400 μ g/ml)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μ I，結(jié)果連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD分別為0.47%、1.14%，說明方法精密度好。
[0014]穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取實(shí)施例1的供試品溶液10μ 1，室溫放置，分別于0、4、8、12、16、24、40h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果連翹酯苷A和連翹苷峰面積的RSD分別為2.12%、0.91%。表明供試品溶液在40h內(nèi)穩(wěn)定。
[0015]重復(fù)性試驗(yàn):取實(shí)施例1中的樣品，分別取0.16g、0.20g、0.24g三個(gè)樣品量，每個(gè)樣品量3份，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果測(cè)得連翹酯苷A的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n=9)為20.8601 mg/g，連翹苷的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n=9)為19.1787 mg/g, RSD%分別為1.54%、1.01%，說明方法重復(fù)性好。
[0016]加樣回收率試驗(yàn):取實(shí)施例1中的樣品9份，每份0.lg，精密稱定，分別加入高、中、低濃度的連翹酯苷A和連翹苷對(duì)照品70%甲醇溶液50ml，制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。
[0017]表1回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

【權(quán)利要求】
1.一種連翹葉中連翹酯苷A和連翹苷含量的測(cè)定方法，其特征在于該方法由以下步驟構(gòu)成: A、供試樣品溶液的制備:精密稱取連翹葉粉碎樣品0.1-0.5g，加入50-70%甲醇50ml，然后稱重，超聲提取10-30min，放冷后稱重，甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻過濾，即得供試樣品溶液； B、對(duì)照品溶液的制備:精密稱取連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品，分別用50-70%甲醇配制成不同濃度的連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品溶液； C、HPLC色譜條件:色譜柱C18柱，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液，流速為1.0mL/min,檢測(cè)波長為215-280nm，柱溫為30°C ； D、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果:將不同濃度的連翹酯苷A、連翹苷對(duì)照品溶液6-10μ1在步驟C色譜條件下分析，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制連翹酯苷Α、連翹苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將供試樣品溶液在步驟C色譜條件下分析，將連翹酯苷Α、連翹苷的峰面積積分值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別得到連翹酯苷Α、連翹苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于步驟A中用0.22 μ m濾膜濾過。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于步驟C中色譜柱規(guī)格為5Mm，4.6 X 150mmo
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于步驟C中甲醇-0.1%磷酸溶液的比例為 27-37:73-63。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104181241SQ201310203252
【公開日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2013年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月28日
【發(fā)明者】姬雪禮, 李曉燕, 鄭曉杰, 李錦 , 張永鋒, 王猛, 李文烈 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司