專利名稱：一種中藥的前處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的前處理方法。具體地涉及由雜化介孔材料PermanentConfined Micell Arrays_60 (本文以下簡稱PCMA-60)的納米分散液作為中藥樣品前處理中的吸附劑，用來富集丹參酮膠囊中的二萜醌類成分，屬于天然藥物提取制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
丹參為唇形科植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bunge)的干燥根和根莖,用于月經(jīng)不調(diào)、腕腹脅痛、胸壁心痛、痛經(jīng)經(jīng)閉等癥，具有清心除煩、通經(jīng)止痛、活血祛瘀、涼血消癰的作用。臨床上證實(shí)丹參具有擴(kuò)張血管、抑制血小板凝聚及抗血栓形成以及保護(hù)心肌、降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化、增加冠脈流量、抗腫瘤、抗菌消炎等作用。將丹參中的二萜醌類成分經(jīng)過提取制備成的丹參酮膠囊，除了用藥更為便捷之外，還突出了二萜醌類成分的藥理活性，具有抗菌消炎之功效，用于骨髓炎、痤瘡、扁桃腺炎、外耳道炎、癤癰、外傷感染、燒傷感染、乳腺炎以及蜂窩組織炎等癥。丹參酮膠囊中的活性成分主要包括二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA等。 開展儀器分析工作，必不可少地將涉及到樣品前處理這一環(huán)節(jié)。隨著現(xiàn)代分析儀器的研究飛速發(fā)展，如氣相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、高效液相色譜、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等，對儀器分析的靈敏度要求和檢測限要求也越來越高。例如中藥制劑丹參酮膠囊的分析，在制備樣品這一環(huán)節(jié)上，大多對藥材直接進(jìn)行成分提取、進(jìn)樣分析，而未經(jīng)過任何前處理步驟，導(dǎo)致儀器在采集數(shù)據(jù)時(shí)響應(yīng)較低、靈敏度較差，顯然已經(jīng)不能滿足人們對該樣品分析方法的要求。近年來新型有效的樣品前處理方法得到迅速發(fā)展，目的是為了克服上述方法所存在的缺點(diǎn)，一系列微量富集技術(shù)被相繼推出，例如固相萃取法、固相微萃取法、膜技術(shù)、超臨界流體萃取法等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種由雜化介孔材料PCMA-60的納米分散液作為吸附劑的中藥前處理方法，用于富集丹參酮膠囊所含的二萜醌類成分，具體包括:選取丹參酮膠囊中所含有的四種代表性二萜醌類成分，即二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA，制備成對照品(或樣品)溶液，水稀釋后經(jīng)納米分散液吸附、富集、洗脫后，即得富集后的濃縮液并進(jìn)樣分析。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的納米分散液為雜化介孔材料PCMA-60的納米分散體系。具體地，本發(fā)明所述的中藥前處理方法是通過下列技術(shù)措施來實(shí)現(xiàn)的:a.稱取對照品(或樣品)，配制成對照品(或樣品)溶液；b.稱取雜化介孔材料PCMA-60并制備成納米分散液；c.通過最優(yōu)富集方案，對樣品混合液進(jìn)行富集； d.過濾富集液，通過最優(yōu)洗脫方案，對濾膜進(jìn)行洗脫。
其特征是:所述對照品，包括四種二萜醌類成分，分別是:二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA。所述樣品，為丹參酮膠囊提取液，具體制備方式為取丹參酮膠囊粉末約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取5 μ L上層清液加入995 μ L純水混合成樣品溶液。所述納米分散液，其特征在于物質(zhì)配比為每IOmL水中加入2mg雜化介孔材料PCMA-60。所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于富集的時(shí)間為2分鐘。所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于富集所使用的儀器為回旋振蕩器。所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于每IlmL混合液中納米分散液的加入體積為
1.0mL0所述的最優(yōu)洗脫方案，其特征在于洗脫液為微量甲醇。所述的最優(yōu)洗脫方案，其特征在于洗脫液的體積為200μ L。具體的實(shí)驗(yàn)步驟:1.取二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制備成每ImL含500 μ g的溶液，即得。(或取丹參酮膠囊粉末約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，離心，取5 μ L上層清液加入995 μ L純水混合成樣品溶液。)2.稱取2mg雜化介孔材料PCMA-60加入IOmL水，稱重，超聲直至形成均勻的白色分散體系，取出，靜置，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，即得納米分散液。3.取I只規(guī)格為50mL的具塞錐形瓶，加入9mL純水、ImL雜化介孔材料PCMA-60納米分散液、5 μ L 二氫丹參酮、10 μ L丹參酮Ι、5 μ L隱丹參酮、5 μ L丹參酮IIA以及975 μ L純水，稱重，放入回旋振蕩器中混合搖晃。2min后取出，靜置，再次稱重，用水補(bǔ)足減失的重量。4.取規(guī)格為5mL的注射器和0.45 μ m規(guī)格的微孔濾膜，分別用ImL甲醇和純水對濾膜進(jìn)行活化，吸取混合液，利用活化后的濾膜對混合液進(jìn)行富集過濾。5.取微量甲醇200 μ L于注射器中，對富集后的濾膜進(jìn)行洗脫，濾液裝入進(jìn)樣瓶中。6.將進(jìn)樣瓶放入HPLC-Q-T0F/MS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)樣分析。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:經(jīng)過富集方法處理之后，儀器的靈敏度大大提高，丹參酮膠囊中每種二萜醌類成分的檢測限均比傳統(tǒng)方法降低300 500倍左右，使得在測定丹參酮膠囊中的二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA四類二萜醌類成分更加精確有效。本方法屬于分散微固相萃取技術(shù)。該技術(shù)在傳統(tǒng)的領(lǐng)域中，未曾有報(bào)道將雜化介孔材料PCMA-60作為納米分散液進(jìn)行富集。所以本發(fā)明的意義，對分散微固相萃取而言，在于發(fā)現(xiàn)了一種新的雜化介孔材料PCMA-60。另外本發(fā)明的意義對中藥前處理技術(shù)領(lǐng)域來講，又在于發(fā)現(xiàn)了一種新的方法，比以往的方法更加快速便捷。本發(fā)明方法具備一系列優(yōu)異突出的特性:1.雜化介孔材料PCMA-60化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性良好，不易燃，對人體以及環(huán)境無任何毒害作用，使操作環(huán)境安全可靠。2.實(shí)驗(yàn)所用材料簡單易得，價(jià)格低廉；所用儀器快速高效。3.實(shí)驗(yàn)步驟清晰明了、通俗易懂，操作簡單。4.提取效率高、重現(xiàn)性好，能用于天然產(chǎn)物中二萜醌類成分的分離和富集，應(yīng)用范圍廣。


圖1，實(shí)驗(yàn)操作步驟流程2，二萜醌類對照品的TIC/EIC圖和丹參酮膠囊提取液的TIC/EIC圖。其中圖2-1A為二氫丹參酮+丹參酮I+隱丹參酮+丹參酮II A混合對照品的TIC圖，圖2-1B為二氫丹參酮對照品的EIC圖，圖2-1C為丹參酮I對照品的EIC圖，圖2-1D為隱丹參酮對照品的EIC圖，圖2-1E為丹參酮IIA的EIC圖；圖2-2A為丹參酮膠囊提取液的TIC圖，圖2-2B為丹參酮膠囊提取液中二氫丹參酮的EIC圖、圖2-2C為丹參酮膠囊提取液中丹參酮I的EIC圖、圖2-2D為丹參酮膠囊提取液中隱丹參酮的EIC圖，圖2-1E為丹參酮膠囊提取液中丹參酮II A的EIC圖。其中色譜圖峰位置標(biāo)注的數(shù)字代表不同的二萜醌類成分，具體為:I表示二氫丹參酮、2表示丹參酮1、3表示隱丹參酮、4表示丹參酮IIA。
具體實(shí)施例方式通過以下實(shí)例來對本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的描述。下述事例示意性地對本發(fā)明進(jìn)行描述，該描述沒有限制性，在附圖中所述的事例也僅僅只是本發(fā)明創(chuàng)造的方式之一，實(shí)際的結(jié)構(gòu)并不局限于此。所以，假如本領(lǐng)域的研究人員受到本發(fā)明的啟示，未經(jīng)自我創(chuàng)造便設(shè)計(jì) 出與本發(fā)明相似的結(jié)構(gòu)體系與具體事例，均應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。以下實(shí)例中的制備納米分散液時(shí)，可采用任何混合方式將納米分散液分散即可，并不一定完全按照本發(fā)明的方法。實(shí)施中未注明具體條件和步驟的稱量、混合、超聲振蕩等方法均為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)。具體實(shí)例:實(shí)施例1對最優(yōu)富集時(shí)間的考察。具體的操作步驟如下:1.取二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制備成每ImL含500 μ g的溶液。2.稱取2mg雜化介孔材料PCMA-60加入IOmL水，稱重，超聲直至形成均勻的白色分散體系，取出，靜置，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，即得納米分散液。3.取6只規(guī)格均為50mL的具塞錐形瓶編號1、2、3、4、5、6，都加入9mL純水、ImL雜化介孔材料PCMA-60納米分散液、5 μ L 二氫丹參酮、10 μ L丹參酮Ι、5 μ L隱丹參酮、5 μ L丹參酮IIA以及975 μ L純水，稱重。并將6只具塞錐形瓶一同放入回旋振蕩器中。4.啟動(dòng)運(yùn)行回旋振蕩器,進(jìn)行混合搖晃。I號瓶在搖晃Imin后取出，2號瓶在搖晃2min后取出，3號瓶在搖晃4min后取出，4號瓶在搖晃8min后取出，5號瓶在搖晃16min后取出，6號瓶在搖晃32min后取出。將1_6號具塞錐形瓶靜置，稱重，用水補(bǔ)足所減失的重量，即得富集混合液。
5.取規(guī)格均為5mL的注射器和0.45 μ m規(guī)格的微孔濾膜,對應(yīng)具塞錐形瓶編號為1-6，分別用ImL甲醇和純水對6個(gè)濾膜進(jìn)行活化，吸取混合液，利用活化后的濾膜對1-6號具塞錐形瓶中的混合液進(jìn)行富集過濾。6.取微量甲醇200yL于注射器中，分別對1-6號注射器相連的濾膜進(jìn)行洗脫。取6只進(jìn)樣瓶，對應(yīng)注射器編號為1-6，裝入洗脫后的濾液。7.將1-6號進(jìn)樣瓶放入HPLC-Q-T0F/MS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)樣分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示:
權(quán)利要求
1.一種中藥前處理方法，所述方法為:選取丹參酮膠囊中所含有的四種代表性二萜醌類成分，即二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA，制備成對照品(或樣品)溶液，水稀釋后經(jīng)納米分散液吸附、富集、洗脫后，即得富集后的濃縮液并進(jìn)樣分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥前處理方法，其中所述的納米分散液為雜化介孔材料PCMA-60的納米分散體系。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2中任意一權(quán)利要求所述的中藥前處理方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟: a.稱取對照品(或樣品)，配制成對照品(或樣品)溶液； b.稱取雜化介孔材料PCMA-60并制備成納米分散液； c.通過最優(yōu)富集方案，對樣品混合液進(jìn)行富集； d.過濾富集液，通過最優(yōu)洗脫方案，對濾膜進(jìn)行洗脫。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的對照品，包括四種二萜醌類成分，分別是:二氫丹參酮、丹參酮1、隱丹參酮、丹參酮IIA。所述樣品，為丹參酮膠囊提取液，具體制備方式為取丹參酮膠囊粉末約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取5 μ L上層清液加入995 μ L純水混合成樣品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的納米分散液，其特征在于物質(zhì)配比為每IOmL水中加入2mg雜化介孔材料PCMA-60。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于富集的時(shí)間為2分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于富集所使用的儀器為回旋振蕩器。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的最優(yōu)富集方案，其特征在于每IImL混合液中納米分散液的加入體積為1.0mL。
9.根據(jù)權(quán)利要 求3所述的最優(yōu)洗脫方案，其特征在于洗脫液為微量甲醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的最優(yōu)洗脫方案，其特征在于洗脫液的體積為200μ L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種由納米分散液用于富集丹參酮膠囊中二萜醌類成分的中藥前處理方法，所用納米液為雜化介孔材料Permanent Confined Micell Arrays-60的分散體系。本發(fā)明所用方法富集效果顯著，可以更為有效地富集丹參酮膠囊中的二萜醌類化學(xué)成分。
文檔編號G01N1/40GK103217332SQ20131017733
公開日2013年7月24日 申請日期2013年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月9日
發(fā)明者曹君, 胡帥帥, 劉曉娟 申請人:曹君, 胡帥帥, 劉曉娟