專利名稱：測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化妝品分析領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活、工作和學(xué)習(xí)節(jié)奏不斷加快，人們承受的心理壓力日益加重,人群中脫發(fā)的發(fā)病率也越來越高,先天性脫發(fā)、雄激素性脫發(fā)、斑禿等病狀越來越普遍發(fā)生。脫發(fā)現(xiàn)象的愈發(fā)普遍，市場(chǎng)上針對(duì)脫發(fā)而產(chǎn)生的生發(fā)、育發(fā)產(chǎn)品層出不窮。在市場(chǎng)上、電視上、網(wǎng)絡(luò)上關(guān)于該類產(chǎn)品的廣告到處可見。然而，由于育發(fā)化妝品行業(yè)生產(chǎn)技術(shù)含量不高，行業(yè)準(zhǔn)入門檻較低，加上企業(yè)對(duì)于品牌的知識(shí)產(chǎn)權(quán)及產(chǎn)品的質(zhì)量與安全意識(shí)缺乏，導(dǎo)致目前育發(fā)化妝品行業(yè)秩序混亂，主要存在以下問題:1、產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，大量的偽劣產(chǎn)品充斥市場(chǎng)。2、虛假、過分的廣告宣傳嚴(yán)重。3、禁用藥物的非法添加。部分企業(yè)為了突出產(chǎn)品的功效性，虛假宣傳，往往打著中藥治脫發(fā)的名號(hào)，而事實(shí)上在產(chǎn)品中添加西藥作為主要功效成分。2010年所曝出的新加坡、香港的某產(chǎn)品查出含有違禁物“米諾地爾”成分事件就是一個(gè)典型的例子。丙酸氯倍他索為人工合成的高效局部外用糖皮質(zhì)激素類藥物，具有較強(qiáng)的抗炎、抗瘙癢和毛細(xì)血管收縮作用，其抗炎作用為氫化可的松的112.5倍，倍他米松磷酸鈉的2.3倍，氟輕松的18.7倍。因此，丙酸氯倍他索常常作為首選藥物應(yīng)用于慢性濕疹、神經(jīng)性皮炎、銀屑病、掌跖膿皰病、扁平苔蘚、盤狀紅斑狼瘡等糖皮質(zhì)激素外用治療有效的瘙癢性及非感染性炎癥性皮膚病。然而，由于丙酸氯倍他索具有突出的消炎效果，其經(jīng)常與酮康唑、米諾地爾及其他藥物復(fù)配，被非法添加于生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中。這類藥物長時(shí)間停留在皮膚、面部、毛發(fā)等部位上，可能造成過敏反應(yīng)或毒害性，對(duì)消費(fèi)者的健康和安全帶來嚴(yán)重隱患，《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007版)將糖皮質(zhì)類激素西藥成分列為禁用物質(zhì)。因此，為了規(guī)范育發(fā)化妝品行業(yè)的市場(chǎng)秩序，維護(hù)企業(yè)及消費(fèi)者的合法權(quán)益，我們迫切需要建立一種育發(fā)化妝品中丙酸氯倍他索的高通量檢測(cè)方法，并完善相關(guān)國家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，能對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
基于此，本發(fā)明提供了一種高效的測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索含量的方法?！N測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，采用超高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，包括以下步驟:(I)制備供試樣品精確稱取樣品，依次加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中間層澄清液；再往原樣品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中間層澄清液；合并澄清液，力口沉淀劑，用水定容，冷凍離心，上清液過濾膜，即為供試樣品；
(2)超高效液相色譜測(cè)定將供試樣品進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)定，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:35-45O;流動(dòng)相:乙腈和水，梯度洗脫；流速:0.3-0.4mL/min ;洗脫時(shí)間:2.0-3.0分鐘；檢測(cè)波長:230-240nm。在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟(2)中所述色譜柱的柱溫為40°C。在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟(2)中所述梯度洗脫程序?yàn)?0-l.5min，維持50%乙腈，
1.5-1.8min,乙臆體積由50%升至70% ； 1.8-2.5min,乙臆體積由70%降至50%。在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟⑵中所述流速為0.3mL/min，所述梯度洗脫的時(shí)間為
2.5min。在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟(I)為:準(zhǔn)確稱取0.5 1.0g樣品，置于比色管中，依次準(zhǔn)確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，充分均質(zhì)，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉(zhuǎn)移至離心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重復(fù)以上步驟；將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0.2mL，再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL，用水稀釋至10mL，混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，即為供試樣品。本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)摸索出了超高效液相色譜法測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的含量的最佳測(cè)得條件。采用超高效液相色譜法對(duì)丙酸氯倍他索含量的儀器檢測(cè)限(S/N=3)為0.lmg/L，平均回收率為90.4% 95.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.3% 10.2%。采用本發(fā)明的方法檢測(cè)生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索含量，檢測(cè)限低，準(zhǔn)確度高，前處理簡(jiǎn)單，非常適合生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的快速、批量檢測(cè)；為化妝品產(chǎn)品的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測(cè)提供重要技術(shù)支持，具有良好的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。


圖1為實(shí)施例1中丙酸氯倍他索濃度為2.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖；圖2為實(shí)施例1中丙酸氯倍他索濃度一峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖3為實(shí)施例2中生發(fā)液樣品的色譜圖；圖4為實(shí)施例3中添加濃度為4.0mg/kg的生發(fā)液樣品的色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。以下實(shí)施例中所使用的原料均來源于市售。實(shí)施例1丙酸氯倍他索對(duì)照品色譜圖的建立包括以下步驟:(I)丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制以流動(dòng)相溶液(乙腈/水=1:1)為溶劑，分別配制濃度為0.1mg/L、0.2mg/L、
0.5mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L 的丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)溶液。
(2)超高效液相色譜檢測(cè)將標(biāo)準(zhǔn)溶液按濃度由低到高精密吸取5 μ L，依次進(jìn)行超高效液相色譜檢測(cè)，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, L 7 μ m)柱(Waters)；柱溫:40°C ;流動(dòng)相:乙腈和水，梯度洗脫，程序?yàn)?0-1.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ；1.8-2.5min,乙腈體積由70%降至50% ；流速:0.3mL/min ；洗脫時(shí)間'2.5分鐘；檢測(cè)波長:240nm。(3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖2所示)，獲得R2值。丙酸氯倍他索濃度在0.1 20.0mg/L范圍內(nèi)，濃度與其對(duì)應(yīng)的峰面積值呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.999。所得的線性方程為y=39018x-339.64。(4)丙酸氯倍他索對(duì)照品色譜圖的建立準(zhǔn)確稱取丙酸氯倍他索對(duì)照品(德國Dr公司)，配制2.0mg/L的丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密吸取5 μ L注入超高效液相色譜儀，按照步驟(2)的超高效液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到丙酸氯倍他索對(duì)照品的色譜圖，如圖1所示，丙酸氯倍他索的保留時(shí)間為
1.763min。實(shí)施例2生發(fā)液樣品中丙酸氯倍他索含量的測(cè)定包括以下步驟:(I)制備供試樣品準(zhǔn)確稱取0.5 1.0g (精確至0.0Olg)樣品，置于IOmL比色管中，依次準(zhǔn)確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，再于均質(zhì)器上充分均質(zhì)，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉(zhuǎn)移至IOmL離心管中。再加3mL乙腈于原比色管中，重復(fù)以上步驟。將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0.2mL，再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL，用水稀釋至10mL，混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，供UPLC測(cè)定。(2)超高效液相色譜測(cè)定精密吸取供試樣品5 μ L注入超高效液相色譜儀，進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)定測(cè)定，條件如下:色譜柱:BEHC18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:40°C;流動(dòng)相:乙腈和水，梯度洗脫，程序?yàn)?0-1.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ；1.8-2.5min,乙腈體積由70%降至50% ；流速:0.3mL/min ；洗脫時(shí)間'2.5分鐘；檢測(cè)波長:240nm。⑶測(cè)定得到的色譜圖如圖3所示。圖3表明生發(fā)液樣品中未檢測(cè)到丙酸氯倍他索。
實(shí)施例3 添加濃度為4.0mg/kg的丙酸氯倍他索的生發(fā)液樣品中丙酸氯倍他索含量的測(cè)定包括以下步驟:(I)制備供試樣品準(zhǔn)確稱取實(shí)施例2中生發(fā)液樣品0.5g，在該樣品中加入濃度為20.0mg/L的丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μ L，則該生發(fā)液樣品中丙酸氯倍他索的濃度為4.0mg/kg。后續(xù)處理同實(shí)施例2，得到供試樣品。(2)超高效液相色譜測(cè)定同實(shí)施例2。⑶測(cè)定得到的色譜圖如圖4所示。根據(jù)供試樣品所代表的樣品質(zhì)量，從實(shí)施例1的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到供試樣品中丙酸氯倍他索的含量。計(jì)算得到生發(fā)液樣品中的丙酸氯倍他索含量為3.82mg/kg,回收率為95.5%。丙酸氯倍他索峰出現(xiàn)時(shí)間為1.765min。實(shí)施例4回收率和精密度試驗(yàn)根據(jù)方法的檢測(cè)限，對(duì)實(shí)施例2中的生發(fā)液樣品按照表I中的添加量，在每個(gè)樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行6次實(shí)驗(yàn)。平均回收率和精密度結(jié)果見于表I。表I丙酸氯倍他索在三個(gè)生發(fā)液樣品中的平均添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，采用超高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，包括以下步驟: (1)制備供試樣品 精確稱取樣品，依次加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷后，分散提取2-3次，抽取中間層澄清液；再往原樣品中加入乙腈，提取1-2次，抽取中間層澄清液；合并澄清液，加沉淀齊U，用水定容，冷凍離心，上清液過濾膜，即為供試樣品； (2)超高效液相色譜測(cè)定 將供試樣品進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)定，條件如下:色譜柱:BEH C18 (2.1x50mm, 1.7 μ m)柱;柱溫:35-45 °C ; 流動(dòng)相:乙腈和水，梯度洗脫；流速:0.3-0.4mL/min ； 洗脫時(shí)間:2.0-3.0分鐘； 檢測(cè)波長:230-240nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述色譜柱的柱溫為40°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述梯度洗脫程序?yàn)?0-l.5min,維持50%乙腈，1.5-1.8min,乙腈體積由50%升至70% ； 1.8-2.5min,乙腈體積由 70% 降至 50%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，步驟(2)中所述流速為0.3mL/min，所述梯度洗脫的時(shí)間為2.5min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，其特征在于，所述步驟(I)為:準(zhǔn)確稱取0.5 1.0g樣品，置于比色管中，依次準(zhǔn)確加入乙腈、飽和氯化鈉溶液和正己烷各3mL，充分均質(zhì)，冷凍離心，用針抽取中間層澄清液，轉(zhuǎn)移至離心管中；再加3mL乙腈于原比色管中，重復(fù)以上步驟；將兩次提取的澄清液合并，加入10%亞鐵氰化鉀溶液(v/v)0 .2mL,再加入20%醋酸鋅溶液(v/v)0.2mL,用水稀釋至IOmL,混勻，離心，取上清液用0.45 μ m的濾膜過濾，即為供試樣品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測(cè)定生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的方法，包括制備供試樣品、將供試樣品進(jìn)行超高效液相色譜測(cè)定，采用BEH C18(2.1x50mm，1.7μm)色譜柱；柱溫35-45℃;乙腈和水作為流動(dòng)相，梯度洗脫；恒流速0.3-0.4mL/min；Waters PDA作為檢測(cè)器，檢測(cè)波長230-240nm。采用本發(fā)明的方法檢測(cè)生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索含量，檢測(cè)限低，準(zhǔn)確度高，前處理簡(jiǎn)單，非常適合生發(fā)育發(fā)產(chǎn)品中丙酸氯倍他索的快速、批量檢測(cè)；為化妝品產(chǎn)品的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測(cè)提供重要技術(shù)支持，具有良好的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103197007SQ20131010050
公開日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者席紹峰, 李慧勇, 王繼才, 譚建華 申請(qǐng)人:廣州市質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院