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一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片的制作方法

文檔序號:5982416閱讀:134來源:國知局
專利名稱:一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本實(shí)用新型涉及生物領(lǐng)域和化學(xué)領(lǐng)域,尤其涉及一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片。
背景技術(shù)
生物化學(xué)反應(yīng)中化合物的濃度是一個重要的參數(shù),在常規(guī)生物檢測中是必不可少的。一般而言,要測定化合物對于生物體系或細(xì)胞的劑量效應(yīng)時,需要制備一系列相差幾個數(shù)量級的遞升或遞降濃度梯度以進(jìn)行生物反應(yīng)測試。這類實(shí)驗(yàn)通常需要包括梯度濃度溶液的配制、細(xì)胞刺激、細(xì)胞標(biāo)記和信號檢測等一系列繁瑣的操作。同時由于這些遞升或遞降濃度是以串行形式產(chǎn)生,制備化合物濃度的準(zhǔn)確性往往受人為誤差和串行式稀釋的影響而難以生成高通量的濃度梯度。而產(chǎn)生高通量濃度梯度可以擴(kuò)大生物反應(yīng)的檢測范圍,提高生物檢測的效率和精確度。微流控芯片的通道直徑一般介于幾十至幾百微米之間,在此微小尺寸通道中的流體具有層流特性。當(dāng)兩種或更多種不同試劑流入同一通道時,各試劑流能夠保持自身的流型不變,而只在相與相的接觸界面上發(fā)生反應(yīng)或分子擴(kuò)散現(xiàn)象,并且具有較高的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。通過控制通道長度、形狀和布局,可以實(shí)現(xiàn)溶液的可控混合,進(jìn)而形成一系列復(fù)雜的濃度梯度。微流控芯片設(shè)計(jì)靈活的特點(diǎn)可以實(shí)現(xiàn)復(fù)雜通道網(wǎng)絡(luò)的加工。多相層流在微流控通路網(wǎng)絡(luò)中經(jīng)分配、擴(kuò)散和混合,可以形成連續(xù)穩(wěn)定的濃度梯度,從而以有限數(shù)量的輸入濃度獲得一系列復(fù)雜濃度梯度,便于模擬體內(nèi)復(fù)雜的微環(huán)境,進(jìn)行多種細(xì)胞生物學(xué)研究?,F(xiàn)有技術(shù)中,以微流控芯技術(shù)產(chǎn)生濃度梯度的代表結(jié)構(gòu)有T型微流管。該結(jié)構(gòu)有兩個進(jìn)樣口和一個出樣口,化合物與緩沖液在T型管交叉點(diǎn)接觸后沿該出樣管下游以擴(kuò)散作用混合。由于T型管所產(chǎn)生的濃度梯度只集中在僅僅數(shù)百微米內(nèi),所以無法在低液流速度下產(chǎn)生高通量的濃度梯度。提升流速雖然有助于增寬T型管的濃度梯度,但對于脆弱的生物細(xì)胞而言,提升流速所增加的剪切力對細(xì)胞活性有不良影響。
實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型實(shí)施例提供了一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,用以產(chǎn)生高通量的濃度梯度。本實(shí)用新型實(shí)施例中的用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,包括:第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道(6),第六微流管道(7),第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15),呈三角形的初級稀釋微流池(3),呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)、呈三角形的第二次級稀釋微流池(11),第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9);其中,所述第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與所述初級稀釋微流池(3)相連接;所述第三微流管道(4),第五微流管道¢),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與所述第一次級稀釋微流池(10)相連接;所述第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于所述第一次級稀釋微流池(10)中;所述初級稀釋微流池(3)與所述第一次級稀釋微流池
(10)通過所述第三微流管道(4)相連接;所述第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與所述第二次級稀釋微流池(11)相連接;所述細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于所述次第二級稀釋微流池(11)中;所述初級稀釋微流池(3)與所述第二次級稀釋微流池(11)通過所述第四微流管道(5)相連接。從以上技術(shù)方案可以看出,本實(shí)用新型實(shí)施例具有以下優(yōu)點(diǎn):用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片包括十條微流管道,分別為,第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道¢),第六微流管道(7),第七微流管道
(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15)個呈三角形的初級稀釋微流池(3) ;二個呈三角形的次級稀釋微流池,分別為第一次級稀釋微流池(10),第二次級稀釋微流池(11) ;二個細(xì)胞固定結(jié)構(gòu),分別為第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9),其中,第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與初級稀釋微流池(3)相連接,第三微流管道(4),第五微流管道¢),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與次級稀釋微流池(10)相連接,第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于第一次級稀釋微流池(10)中,第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于第二次級稀釋微流池(11)中,初級稀釋微流池⑶與第一次級稀釋微流池(10)通過第三微流管道⑷相連接,第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與第二次級稀釋微流池(11)相連接,初級稀釋微流池(3)與第二次級稀釋微流池(11)通過第四微流管道(5)相連接,由此結(jié)構(gòu),可提高檢測效率和精確度,此微流控芯片利用獨(dú)特的并連式稀釋結(jié)構(gòu)產(chǎn)生高通量濃度梯度,同時利用“水壩”結(jié)構(gòu)固定細(xì)胞,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞響應(yīng)的高效率、高精確度的檢測。

為了更清楚地說明本實(shí)用新型實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案,下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹,顯而易見地,下面描述中的附圖僅僅是本實(shí)用新型的一些 實(shí)施例,對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來講,在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例中用于生物檢測的并連式微流控芯片的結(jié)構(gòu)示意圖;圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例中用于生物監(jiān)測的并連式微流芯片中的細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)的放大示意圖;圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例中用于生物檢測的并連式微流控芯片中的細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)產(chǎn)生的濃度梯度的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步說明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案,顯然,所描述的實(shí)施例僅僅是本實(shí)用新型一部分實(shí)施例,而不是全部的實(shí)施例。基于本實(shí)用新型中的實(shí)施例,本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范圍。本實(shí)用新型實(shí)施例提供了一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,用于產(chǎn)生高通量的濃度梯度,同時利用“水壩”結(jié)構(gòu)固定細(xì)胞,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞響應(yīng)的高效率、高精確度的檢測。以下進(jìn)行詳細(xì)說明。請參閱圖1,本實(shí)用新型實(shí)施例中的用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片的一個實(shí)施例包括:十條微流管道:第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道¢),第六微流管道(7),第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15);一個呈三角形的初級稀釋微流池:初級稀釋微流池(3);二個呈三角形的次級稀釋微流池:第一次級稀釋微流池(10),第二次級稀釋微流池(11);二個細(xì)胞固定結(jié)構(gòu):第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9);其中,第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與初級稀釋微流池(3)相連接;第三微流管道(4),第五微流管道¢),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與第一次級稀釋微流池(10)相連接;第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于第一次級稀釋微流池(10)中;初級稀釋微流池(3)與第一次級稀釋微流池(10)通過第三微流管道(4)相連接;第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與第二次級稀釋微流池(11)相連接;第二細(xì)胞固定 結(jié)構(gòu)(9)位于第二次級稀釋微流池(11)中;初級稀釋微流池(3)與第二次級稀釋微流池(11)通過第四微流管道(5)相連接。本實(shí)用新型實(shí)施例中,以活細(xì)胞染色素混合液(鈣黃綠素(CAM)-羅丹明B(RhoB))對細(xì)胞的劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)為例進(jìn)行說明。具體地,將10微升人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞(HL60細(xì)胞)溶液由第五微流管道(6)及第六微流管道(7)進(jìn)入本實(shí)施例中的用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片(以下簡稱微流控芯片),HL60細(xì)胞溶液經(jīng)由第五微流管道(6)及第六微流管道(7),分別進(jìn)入呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)及呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中。而后,在微流控芯片中與第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15)相連的進(jìn)樣口加入10微升的hank’s平衡鹽緩沖液(HBSS,Hank’sBalanced Salt Solutions),而后,減少與第五微流管道(6)及第六微流管道(7)相連進(jìn)樣口的液體量5微升,產(chǎn)生液體壓力差,由此使得細(xì)胞固定在第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)及第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)中5分鐘,其中,第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)中,第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中,繼而,將CAM/RhoB混合液由第一微流管道(I)加入呈三角形的初級稀釋微流池(3) ^fHBSS緩沖液則由第二微流管道(2)、第五微流管道¢)、第六微流管道(7),具體地,經(jīng)由第二微流管道(2)進(jìn)入呈三角形的初級稀釋微流池(3),再經(jīng)由第三微流管道(4),第四微流管道(5)分別進(jìn)入呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)及呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中,進(jìn)入到微流控芯片中。進(jìn)一步地,微流控芯片中的細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)放大結(jié)構(gòu)圖請參閱圖2,第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)8中固定了多個細(xì)胞14(圖中未完全標(biāo)出)。[0029]本實(shí)施例以10微升CAM/RhoB混合液試劑液為例,以共聚焦熒光顯微鏡觀察細(xì)胞反應(yīng)2分鐘,其中CAM激發(fā)波長為488納米,發(fā)射濾光片選擇為505 530納米,RhoB激發(fā)波長為543納米,發(fā)射濾光片選擇為560 615納米,并以光電倍增管拍攝記錄。劑量效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示,第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)產(chǎn)生的濃度梯度的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),可見CAM在不同濃度下對細(xì)胞產(chǎn)生的劑量效應(yīng),反應(yīng)以熒光強(qiáng)度表示(任意單位)。由于CAM/RhoB混合液在初級稀釋微流池(3)的不對稱分配,CAM/RhoB混合液到達(dá)第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)的濃度較第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)低,在20分鐘的反應(yīng)時間內(nèi)劑量效應(yīng)不明顯。微流控芯片結(jié)構(gòu)能產(chǎn)生高通量的濃度梯度,并可監(jiān)察細(xì)胞的反應(yīng)。本實(shí)用新型實(shí)施例中,用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片包括十條微流管道,分別為,第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道¢),第六微流管道(7),第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15);—個呈三角形的初級稀釋微流池(3) ;二個呈三角形的次級稀釋微流池,分別為第一次級稀釋微流池(10),第二次級稀釋微流池(11) ;二個細(xì)胞固定結(jié)構(gòu),分別為第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9),其中,第一微流管道(1),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與初級稀釋微流池(3)相連接,第三微流管道(4),第五微流管道¢),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與第一次級稀釋微流池(10)相連接,第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于第一次級稀釋微流池(10)中,第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于第二次級稀釋微流池(11)中,初級稀釋微流池(3)與第一次級稀釋微流池(10)通過第三微流管道(4)相連接,第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與第二次級稀釋微流池(11)相連接,初級稀釋微流池(3)與第二次級稀釋微流池(11)通過第四微流管道(5)相連接,由此結(jié)構(gòu),可提高檢測效率和精確度,此微流控芯片利用獨(dú)特的并連式稀釋結(jié)構(gòu)產(chǎn)生高通量濃度梯度,同時利用“水壩”結(jié)構(gòu)固定細(xì)胞,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞響應(yīng)的高效率、高精確度的檢測。為便于理解,下面以另一實(shí)施例詳細(xì)說明本實(shí)用新型實(shí)施例中的用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,請繼續(xù)參閱圖1,本實(shí)用新型實(shí)施例中的用于高通量生物檢驗(yàn)的并連式微流控芯片的另一個實(shí)施例包括:十條微流管道:第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道¢),第六微流管道(7),第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15);一個呈三角形的初級稀釋微流池:初級稀釋微流池(3);二個呈三角形的次級稀釋微流池:第一次級稀釋微流池(10),第二次級稀釋微流池(11);二個細(xì)胞固定結(jié)構(gòu):第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9);其中,第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與初級稀釋微流池(3)相連接;第三微流管道(4),第五微流管道(6),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與第一次級稀釋微流池(10)相連接;第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于第一次級稀釋微流池(10)中;初級稀釋微流池(3)與第一次級稀釋微流池(10)通過第三微流管道(4)相連接;第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與第二次級稀釋微流池(11)相連接;第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于第二次級稀釋微流池(11)中;初級稀釋微流池(3)與第二次級稀釋微流池(11)通過第四微流管道(5)相連接。需要說明的是,上述微流控芯片的第一次級稀釋微流池(10),及第二次級稀釋微流池(11)均可為等腰三角形,且,第一次級稀釋微流池(10)的橫街面積,及第二次級稀釋微流池(11)的橫截面積均為初級稀釋微流池(3)橫截面積的2 25倍。進(jìn)一步地,本實(shí)施例中的微流控芯片是由同一塊印刷電路板模版復(fù)制而成,且,微流控芯片的模塊由聚二甲基硅氧烷注塑成型。本實(shí)用新型實(shí)施例中,以CAM/RhoB混合液對細(xì)胞的劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)為例進(jìn)行說明。具體地,將10微升HL60細(xì)胞溶液由第五微流管道(6)及第六微流管道(7)加入本實(shí)施例中的用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片(以下簡稱微流控芯片),HL60細(xì)胞溶液經(jīng)由第五微流管道(6)及第六微流管道(7),分別進(jìn)入呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)及呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中。而后,在微流控芯片中與第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道
(14),第十微流管道(15)相連的進(jìn)樣口加入10微升的hank’s平衡鹽緩沖液(HBSS,Hank’sBalanced Salt Solutions),而后,減少與第五微管道(6)及第六微流管道(7)相連進(jìn)樣口的液體量5微升,產(chǎn)生液體壓力差,由此使得細(xì)胞固定在第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)及第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)中5分 鐘,其中,第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)中,第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中,繼而,將CAM/RhoB混合液由第一微流管道(I)加入呈三角形的初級稀釋微流池(3) ^fHBSS緩沖液則由第二微流管道(2)、第五微流管道¢)、第六微流管道(7),具體地,經(jīng)由第二微流管道
(2)進(jìn)入呈三角形的初級稀釋微流池(3),再經(jīng)由第三微流管道(4),第四微流管道(5)分別進(jìn)入呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)及呈三角形的第二次級稀釋微流池(11)中,進(jìn)入到微流控芯片中。本實(shí)用新型實(shí)施例中,微流控芯片的第一次級稀釋微流池(10),及第二次級稀釋微流池(11)均可為等腰三角形,且,第一次級稀釋微流池(10)的橫街面積,及第二次級稀釋微流池(11)的橫截面積均為初級稀釋微流池(3)橫截面積的2 25倍,微流控芯片是由同一塊印刷電路板模版復(fù)制而成,微流控芯片的模塊由聚二甲基硅氧烷注塑成型,更有利于產(chǎn)生高通量濃度梯度,進(jìn)一步提高細(xì)胞響應(yīng)的高效率、高精確度的檢測。以上對本實(shí)用新型所提供的一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,進(jìn)行了詳細(xì)介紹,對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員,依據(jù)本實(shí)用新型實(shí)施例的思想,在具體實(shí)施方式
及應(yīng)用范圍上均會有改變之處,綜上所述,本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本實(shí)用新型的限制。
權(quán)利要求1.一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,其特征在于,包括:第一微流管道(1),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5),第五微流管道¢),第六微流管道(7),第七微流管道(12),第八微流管道(13),第九微流管道(14),第十微流管道(15),呈三角形的初級稀釋微流池(3),呈三角形的第一次級稀釋微流池(10)、呈三角形的第二次級稀釋微流池(11),第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8),第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9); 其中,所述第一微流管道(I),第二微流管道(2),第三微流管道(4),第四微流管道(5)與所述初級稀釋微流池(3)相連接; 所述第三微流管道(4),第五微流管道¢),第七微流管道(12),第八微流管道(13)與所述第一次級稀釋微流池(1 0)相連接; 所述第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(8)位于所述第一次級稀釋微流池(10)中; 所述初級稀釋微流池(3)與所述第一次級稀釋微流池(10)通過所述第三微流管道(4)相連接; 所述第四微流管道(5),第六微流管道(7),第九微流管道(14),第十微流管道(15)與所述第二次級稀釋微流池(11)相連接; 所述第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)(9)位于所述第二次級稀釋微流池(11)中; 所述初級稀釋微流池(3)與所述第二次級稀釋微流池(11)通過所述第四微流管道(5)相連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的并連式微流控芯片,其特征在于: 所述初級稀釋微流池(3),所述第一次級稀釋微流池(10),所述第二次級稀釋微流池(11)均為等腰三角形。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的并連式微流控芯片,其特征在于: 所述第一次級稀釋微流池(10),及第二次級稀釋微流池(11)的橫截面積為所述初級稀釋微流池⑶的橫截面積的2 25倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3任一項(xiàng)所述的并連式微流控芯片,其特征在于: 所述微流控芯片是由同一塊印刷電路板模版復(fù)制而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 3任一項(xiàng)所述的并連式微流控芯片,其特征在于: 所述微流控芯片的模塊由聚二甲基硅氧烷注塑成型。
專利摘要本實(shí)用新型實(shí)施例公開了一種用于高通量生物檢測的并連式微流控芯片,用于產(chǎn)生高通量的濃度梯度,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞響應(yīng)的高效率、高精確度的檢測。本實(shí)用新型包括十條微流管道,一個呈三角形的初級稀釋微流池,二個呈三角形的次級稀釋微流池,二個細(xì)胞固定結(jié)構(gòu);其中,第一微流管道,第二微流管道,第三微流管道,第四微流管道與初級稀釋微流池相連接;第三微流管道,第五微流管道,第七微流管道,第八微流管道與第一次級稀釋微流池相連接;第一細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)位于第一次級稀釋微流池中;初級稀釋微流池與第一次級稀釋微流池通過第三微流管道相連接;第四微流管道,第六微流管道,第九微流管道,第十微流管道與第二次級稀釋微流池相連接;第二細(xì)胞固定結(jié)構(gòu)位于第二次級稀釋微流池中;初級稀釋微流池與第二次級稀釋微流池通過第四微流管道相連接。
文檔編號G01N33/50GK203075967SQ201220259439
公開日2013年7月24日 申請日期2012年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月4日
發(fā)明者李卓榮, 易長青, 岳振峰, 肖來龍 申請人:澳門大學(xué), 深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
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