專利名稱：活血止痛膏的特征圖譜測定和其質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及活血止痛膏生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及一種活血止痛膏的特征圖譜測定和其質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
活血止痛膏為安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的一種中成藥，用于活血止痛，舒筋通絡(luò)，主治筋骨疼痛，肌肉麻痹，痰核流注，關(guān)節(jié)酸痛。目前，在生產(chǎn)中對活血止痛膏的質(zhì)量控制主要是測定樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯含量和對當(dāng)歸、陳皮、顛茄流浸膏、大黃和香加皮等組分進行薄層鑒別，上述方法雖能在一定程度上控制產(chǎn)品質(zhì)量，但還是無法全面的反映產(chǎn)品的質(zhì)量狀況，為彌補其不足，使其質(zhì)量控制技術(shù)更加完善、科學(xué)并對其今后的標準化生產(chǎn)提供一種可利用的質(zhì)量控制模式，因此有必要建立起該產(chǎn)品的標準特征圖譜，用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。發(fā)明目的本發(fā)明的首要目的是提供一種活血止痛膏的特征圖譜測定方法，該方法操作簡便、精密度高、重現(xiàn)性好。其采取的方案為，一種活血止痛膏的特征圖譜測定方法，是將各標準活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的進樣液分別注入液相色譜儀，在相同的色譜條件下進行分離試驗，然后將得到的色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜分析儀檢測得到活血止痛膏的特征圖譜。中藥指紋圖譜分析儀應(yīng)理解為安裝有中藥指紋圖譜分析軟件且可進行運行的設(shè)備。通過上述方法，可有效測定出活血止疼膏制劑的特征圖譜，且操作方便、重現(xiàn)性好。本發(fā)明的另一個目的是提供一種利用上述測得特征圖譜檢測活血止疼膏質(zhì)量的方法。其方案為一種活血止痛膏的質(zhì)量檢測方法，其特征在于是通過數(shù)據(jù)采集單元對按相同的實驗條件下測定的活血止痛膏產(chǎn)品的色譜圖進行采集，數(shù)據(jù)采集單元將采集的色譜圖輸入至處理單元，處理單元調(diào)取已測得的活血止痛膏的特征圖譜與輸入的色譜圖進行檢測和對照，然后輸出檢測結(jié)果信號至顯示單元，顯示單元顯示產(chǎn)品的質(zhì)量狀況。通過上述方法，可有效的對活血止疼膏制劑的產(chǎn)品質(zhì)量進行檢測，從而對活血止疼膏的產(chǎn)品質(zhì)量進行有效控制，實現(xiàn)活血止疼膏制劑標準化生產(chǎn)。進一步的操作為，還包括在相同實驗條件下測定大黃素甲醚的色譜，處理并獲得活血止痛膏特征圖譜的各特征峰的相對保留時間。通過測定大黃素甲醚的色譜圖，將大黃素甲醚的色譜圖與各標準活血止痛膏測得色譜圖進行比對，確定兩者之間的共有特征峰，亦即找出各標準活血止痛膏測得色譜圖上的大黃素甲醚的特征峰，從而以大黃素甲醚特征峰的相對保留時間為1，計算出其他特征峰的相對保留時間，便于后續(xù)的活血止疼膏產(chǎn)品的檢測。其中，本申請中所指的相同實驗條件是指浸提操作和色譜測定的色譜條件都與標準活血止痛膏進行浸提操作和色譜測定操作時完全相同的條件。具體的操作為浸提操作為取5 10片標準活血止疼膏除去蓋襯,剪成小碎片,加入50 200ml的三氯甲燒，浸泡30 60分鐘，攪拌后傾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到二次膏液，殘渣再加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，將所得膏體加甲醇溶解，過濾后轉(zhuǎn)移至IOml的第一容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶內(nèi)的溶液2ml轉(zhuǎn)移至IOml的第二容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，定容后的溶液即為進樣液。本申請中所進行操作的活血止疼膏的規(guī)格為7cm*10cm，當(dāng)然采用其他不同大小的標準產(chǎn)品進行實驗時，所采用的三氯甲烷和甲醇的體積可以發(fā)生相適應(yīng)的變化。所述的色譜條件為色譜柱以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，流動相由體積比為35 :65 85 15的A相和B相組成，A相為甲醇或乙腈，B相為質(zhì)量分數(shù)為O. 05 O. 15%的磷酸或O. 1% 1. 5%的冰醋酸，梯度洗脫，檢測波長為254±2nm，流速為O. 5 1. 5ml/min,柱溫為30 40°C，進樣液的進樣量為10 20 μ 1，理論塔板數(shù)不低于6000，所指的理論塔板數(shù)是按照大黃素甲醚峰計算的。
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梯度洗脫的時間及流動相比例為0 5min，A相35 40%、B相65 60% ；5 10min，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A 相83 85%、B 相17 15% ；40 65min, A 相85 85%、B 相15 15%。至少取15批標準活血止痛膏分別進行浸提操作，并將得到的進樣液分別注入液相色譜儀進行試驗。按上述限定參數(shù)進行操作，制取的進樣液中各組分的分離效果最好，測得的活血止痛膏的特征圖最為準確。本申請中，所指的標準活血止痛膏是指質(zhì)量完全符合相關(guān)國家醫(yī)藥標準的活血止痛膏?；钛固鄹嗍峭ㄟ^以下原料和制備方法制得。其中原料組成為白芷9 18份、牡丹皮2 4份、荊芥4 8份、陳皮9 18份、干姜16 32份、細辛4 8份、山柰9 18份、辛夷3 6份、生天南星5 10份、辣椒2 4份、川彎3 6份、薄荷腦4 8份、獨活3 6份、沒藥2 4份、香加皮4 8份、大黃8 16份、丁香5 10份、生半夏8 16份、甘松8 16份、樟腦4 8份、當(dāng)歸5 10份、冰片4 8份、乳香2 4份、顛爺流浸膏6 12份、桂枝4 8份、胡椒5 10份、蒼術(shù)2 4份、水楊酸甲酯6 12份；制備方法為二十八味原料中除薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯、顛茄流浸膏、樟腦外；將其余的二十三味粉碎成粗粉，按照流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用90%乙醇作溶劑，進行滲漉，收集漉液，漉液濃縮成相對密度約為1.05的清膏，然后加入上述薄荷腦等剩余五味原料，攪勻，再按常規(guī)方法制成活血止疼膏；或?qū)⑵溆嗟亩斗鬯槌纱址蹨亟O2回流或超臨界萃取后回流，用90%乙醇作溶劑，收集提取液，濃縮成相對密度約為1.05的清膏，加入上述薄荷腦等剩余五味，攪勻，按常規(guī)方法制成活血止疼膏。按照上述的操作，所測得標準特征圖譜(如圖4所示)共有特征峰有6個，其中5號色譜峰為大黃素甲醚的特征峰，以大黃素甲醚的特征峰的相對保留時間為1，計算其他峰的相對保留時間，即得到活血止痛膏的標準特征圖譜為I號峰相對保留時間O. 56 O. 622號峰相對保留時間O. 64 O. 703號峰相對保留時間O. 78 O. 864號峰相對保留時間O. 92 1. 015號峰相對保留時間I· 006號峰相對保留時間1. 20 1. 33。在進行產(chǎn)品檢測時，將抽檢的產(chǎn)品按照相同實驗條件測得其色譜圖，若處理單元檢測得到色譜圖中出現(xiàn)特征圖譜中相同的6各特征峰且各特征峰的保留時間與上述特征圖譜中各特征峰的相對保留時間誤差在5%以內(nèi)，則該產(chǎn)品質(zhì)量合格，反之則不合格，從而快速的對活血止疼膏制劑進行檢測。


圖1為測得的大黃素甲醚圖譜；圖2為實施例2測得的活血止痛膏的特征圖譜；圖3為實施例3中測得 的十五批活血止疼膏色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜軟件中進行分析的截圖；圖4為實施例3測得活血止痛膏的特征圖譜；
具體實施例方式實施例1為測定大黃素甲醚色譜圖，實施例2、3為測定活血止疼膏的特征圖譜，其中實施例1、2、3所用的儀器、藥品如下儀器與試藥儀器Waters高效液相色譜儀，2489檢測器。藥品磷酸、三氯甲烷等(均為分析純)；甲醇(色譜純)；標準活血止痛膏(安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司生產(chǎn))。實施例1測定大黃素甲醚圖譜進樣液的制備取大黃素甲醚對照品適量，精密稱重，加甲醇制成40μ g/ml的進樣液溶液。色譜測定操作取20 μ I進樣向液高效液相色譜儀進行進樣，具體操作按《中國藥典》(2010版)第一部附錄中“高效液相色譜法試驗”的規(guī)定進行操作，得到大黃素甲醚特征峰的保留時間和色譜圖，如圖1所示。其中色譜條件色譜柱以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以甲醇為A相，O. 08 O. 10%磷酸為B相組成流動相；采用梯度洗脫方式，其洗脫時間及流動相比例為0 5min，A 相35 40%、B 相65 60% ；5 lOmin，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A相83 85%、B相17 15% ；40 65min, A相85 85%、B相15 15% ;檢測波長為254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱溫30 40°C，理論塔板數(shù)不低于6000。
實施例2測定活血止痛膏特征圖譜進樣液的制備取十五批標準活血止疼膏，分別按照下述浸提操作制備得到15份進樣液，標號Al A15。浸提操作取5 10片標準活血止疼膏除去蓋襯，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分鐘，攪拌后傾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到二次膏液，殘渣再加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，將所得膏體加甲醇溶解，過濾后轉(zhuǎn)移至IOml的第一容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶內(nèi)的溶液2ml轉(zhuǎn)移至IOml的第二容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，定容后的溶液即為進樣液。色譜測定操作將十五批進樣液分別取10 μ I向液高效液相色譜儀進行進樣，具體操作按《中國藥典》(2010版)第一部附錄中“高效液相色譜法試驗”的規(guī)定進行操作，得到十五張標準活血止疼膏的色譜圖。其中色譜條件色譜柱以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以乙腈為A相，O. 1% 1. 5%的冰醋酸為B相組成流動相；采用梯度洗脫方式，其洗脫時間及流動相比例為0 5min，A相20 30%、B 相80 40% ；5 lOmin，A 相30 40%、B 相70 60% ;10 25min，A相40 57%、B 相60 43% ；25 35min，A 相57 62%、B 相43 38% ；35 45min，A相62 67%、B相38 33% ；45 65min, A相67 85%、B相33 15% ;檢測波長為254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱溫30 40°C，進樣量20 μ I ;理論塔板數(shù)按大黃素甲醚峰計，應(yīng)不低于6000。特征圖譜通過測得的15批標準活血止痛膏和大黃素甲醚的色譜圖進行比較比較，確定活血止痛膏色譜圖有6個共有峰，標號I 6，其中5號色譜峰為大黃素甲醚的特征峰，設(shè)定5號峰的相對保留時間為1，計算其他峰的相對保留時間。將得到的十五張活血止疼膏的色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜軟件中，相應(yīng)操作后得到活血止痛膏的特征圖譜(如附圖3所示)。
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實驗例3測定活血止痛膏特征圖譜進樣液的制備取十五批標準活血止疼膏，分別按照下述浸提操作制備得到15份進樣液，標號SI S15。浸提操作取5 10片標準活血止疼膏除去蓋襯，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分鐘，攪拌后傾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到二次膏液，殘渣再加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，將所得膏體加甲醇溶解，過濾后轉(zhuǎn)移至IOml的第一容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶內(nèi)的溶液2ml轉(zhuǎn)移至IOml的第二容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，定容后的溶液即為進樣液。色譜測定操作將十五批進樣液分別取20 μ I向液高效液相色譜儀進行進樣，具體操作按《中國藥典》(2010版)第一部附錄中“高效液相色譜法試驗”的規(guī)定進行操作，得到15張標準活血止疼膏的色譜圖。其中色譜條件色譜柱以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，以甲醇為A相，O. 08 O. 10%磷酸為B相組成流動相；采用梯度洗脫方式，其洗脫時間及流動相比例為0 5min，A 相35 40%、B 相65 60% ；5 lOmin，A 相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A相83 85%、B相17 15% ；40 65min, A相85 85%、B相15 15% ;檢測波長為254±2nm，流速O. 5 1. 5ml/min，柱溫30 40°C，進樣量20 μ I ;理論塔板數(shù)按大黃素甲醚峰計，應(yīng)不低于6000。特征圖譜將測得的15批活血止痛膏和大黃素甲醚的色譜圖進行比較，確定活血止痛膏的色譜圖有6個共有峰，標號I 6，其中5號色譜峰為大黃素甲醚的特征峰，設(shè)定5號峰的相對保留時間為1，計算其他峰的相對保留時間，具體結(jié)果相詳見表I。將得到的十五張圖譜導(dǎo)入中藥指紋圖譜軟件中(如附圖2所示)，相應(yīng)操作后得到活血止痛膏的特征圖譜(如附圖3所示)。表I實施例3中的15批標準活血止疼膏圖譜的特征峰的相對保留時間統(tǒng)計結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種活血止痛膏的特征圖譜測定方法，是將各標準活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的進樣液分別注入液相色譜儀，在相同的色譜條件下進行分離試驗，然后將得到的色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜分析儀檢測得到活血止痛膏的特征圖譜。
2.如權(quán)利要求1所述的活血止痛膏的特征圖譜測定方法，其特征在于還包括在相同實驗條件下測定大黃素甲醚的色譜圖，處理并獲得活血止痛膏特征圖譜的各特征峰的相對保留時間。。
3.如權(quán)利要求1或3所述的活血止痛膏的特征圖譜測定方法，其特征在于，所述的色譜條件為色譜柱以十八烷基鍵和硅膠為填充劑，流動相由體積比為35 65 85 :15的A相和B相組成，A相為甲醇或乙腈，B相為質(zhì)量分數(shù)為O. 05 O. 15%的磷酸或O. 1% 1. 5%的冰醋酸，梯度洗脫，檢測波長為254±2nm，流速為O. 5 1. 5ml/min,柱溫為30 40°C，進樣液的進樣量為10 20 μ I。
4.如權(quán)利要求2所述的活血止痛膏的特征圖譜測定方法，其特征在于梯度洗脫的時間及流動相比例為0 5min，A相35 40%,B相65 60% ；5 10min，A相40 45%、B 相60 55% ；10 25min，A 相45 62%、B 相55 38% ；25 35min，A 相62 83%、B 相38 17% ；35 40min，A 相83 85%、B 相17 15% ；40 65min，A 相85 85%、B 相15 15%。
5.如權(quán)利要求1或2所述的活血止痛膏的特征圖譜測定方法，其特征在于至少取15批標準活血止痛膏分別進行浸提操作，并將得到的進樣液分別注入液相色譜儀中進行試驗。
6.如權(quán)利要求1或2所述的活血止痛膏的特征圖譜測定方法，其特征在于，浸提操作為取5 10片標準活血止疼膏除去蓋襯，剪成小碎片，加入50 200ml的三氯甲烷，浸泡30 60分鐘，攪拌后傾取得到一次膏液，然后加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到二次膏液，殘渣再加50 IOOml的甲醇，攪拌，靜置5 10分鐘，傾取得到三次膏液，合并上述所得膏液，水浴蒸干，將所得膏體加甲醇溶解，過濾后轉(zhuǎn)移至IOml的第一容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，然后再精密量取第一容量瓶內(nèi)的溶液2ml轉(zhuǎn)移至IOml的第二容量瓶內(nèi)并加甲醇定容，定容后的溶液即為進樣液。
7.—種活血止痛膏的質(zhì)量檢測方法，其特征在于是通過數(shù)據(jù)采集單元對按相同的實驗條件下測定的活血止痛膏產(chǎn)品的色譜圖進行采集，數(shù)據(jù)采集單元將采集的色譜圖輸入至處理單元，處理單元調(diào)取已測得的活血止痛膏的特征圖譜與輸入的色譜圖進行檢測和對照，然后輸出檢測結(jié)果信號至顯示單元，顯示單元顯示產(chǎn)品的質(zhì)量狀況。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種活血止痛膏的特征圖譜測定方法，是將各標準活血止痛膏在相同的浸提操作下浸提得到的進樣液分別注入液相色譜儀，在相同的色譜條件下進行分離試驗，然后將得到的色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜分析儀檢測得到活血止痛膏的特征圖譜。中藥指紋圖譜分析儀應(yīng)理解為安裝有中藥指紋圖譜分析軟件且可進行運行的設(shè)備。通過上述方法，可有效測定出活血止疼膏制劑的特征圖譜，且操作方便、重現(xiàn)性好。
文檔編號G01N30/02GK103048408SQ20121058964
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月29日
發(fā)明者劉道芳, 宋社吾, 劉海兵, 謝紅星, 田湘玲, 徐莉莉, 廖華寧, 楊莉 申請人:安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司