專利名稱：一種細胞復(fù)活劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組織芯片制備領(lǐng)域，特別涉及到一種用于使病理組織蠟塊軟化和生物芯片細胞活性轉(zhuǎn)升的細胞復(fù)活劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在臨床病理診斷過程中，通常需要存檔案，把制備好的蠟塊保存起來，但是，由于通常用于處理標本的液體為醛類、醇類及丙酮等，均有使組織變硬、變脆的副作用，加之受氣溫、濕度、風(fēng)蝕等氣候條件的影響，隨著時間的延長，組織干枯，變脆，變硬，更不能用來制作組織芯片。在組織芯片制作過程中，也經(jīng)常會遇到因為放置過久或保存不當(dāng)，或由于通常用于處理標本的液體為醛類、醇類及丙酮等，均有使組織變硬、變脆的副作用，加之受氣溫、濕度、風(fēng)蝕等氣候條件的影響，保存時間愈久，其副作用愈突出，尤其是子宮肌肉瘤，皮 膚等含纖維成份豐富的組織，極易失去原有的柔韌度。對這些陳舊的正?；虿±淼臉吮静荒苓M行形態(tài)學(xué)觀察和特定基因以及表達蛋白質(zhì)等不同分子水平上的研究，尤其是嚴重影響了回顧性的調(diào)查，涉及到醫(yī)學(xué)，生物學(xué)，及動植物學(xué)。因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種細胞復(fù)活劑及其制備方法和應(yīng)用，旨在解決蠟塊組織變硬、變脆或發(fā)糟，存在著難以制作組織芯片的問題。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種細胞復(fù)活劑，其中，按體積百分比組成為
異丙醇32-38% ；
一縮二甘油32-37% ；
丙三醇7-11%;
水楊酸-羥基苯甲酸7-11% ；
乙酸7-11%;
苯酚1-3% ；
d-芋烯O. 25-0. 45% ；
Y-松油烯O. 18-0. 38% ；
癸醛O. 07-0. 27% ；
辛醛O. 18-0. 38% ；
芳樟醇O. 25-0. 45% ；
檸檬醛O. 31-0. 51% ；
羊毛脂3. 07-4. 07%。
所述的細胞復(fù)活劑，其中，所述異丙醇為質(zhì)量濃度為87%的異丙醇；所述羊毛脂為濃度30%的羊毛脂。所述的細胞復(fù)活劑，其中，按體積百分比組成為
87% 異丙醇34. 57% ；
一縮二甘油33. 87% ；
丙三醇8. 64% ；
水楊酸8. 64% ；
乙酸8. 64% ； 苯酚I. 73% ；
d-芋烯O. 35% ；
Y-松油烯O. 28% ；
癸醛O. 17% ；
辛醛O. 28% ；
芳樟醇O. 35% ；
檸檬醛O. 41% ；
羊毛脂2.07%。一種如上所述的細胞復(fù)活劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟
根據(jù)上述配方，依次把各種液體放進容量瓶內(nèi)，把電磁棒放進液體中，在電磁爐上攪拌，直到全部混合均勻。一種如上所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其特征在于，將所述細胞復(fù)活劑用于復(fù)原組織蠟塊和生物芯片細胞。所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其中，具體包括以下步驟
將需要復(fù)原的組織蠟塊用細胞復(fù)活劑在37°c下浸潤2小時。所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其中，還包括以下步驟
所述經(jīng)過復(fù)原的組織蠟塊在一 20攝氏度條件下冷凍約2小時。有益效果本發(fā)明的細胞復(fù)活劑，可以把由于福爾馬林固定后形成的三維膠聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，而且，使組織變軟，組織細胞復(fù)活，容易進行切片，可以供醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究正常使用。可用于病理組織蠟塊的軟化和生物芯片細胞的反膠聯(lián)、活性轉(zhuǎn)升，具有不損害組織結(jié)構(gòu)和染色效果，并使處理過的標本或芯片達到新鮮蠟塊組織柔軟程度的優(yōu)點。
具體實施例方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進一步詳細說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明提供的細胞復(fù)活劑，是一種既不損害組織結(jié)構(gòu)和染色效果，又能達到新鮮蠟塊組織柔軟程度的、能使組織細胞活性轉(zhuǎn)升的細胞復(fù)活劑。所述細胞復(fù)活劑是一種反膠聯(lián)軟化組織，能使細胞復(fù)活的化學(xué)配方，可以用來搶救珍貴病理組織，可以把因福爾馬林固定后形成的三維膠聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，而且，使組織變軟，組織細胞復(fù)活，容易切片，可以供醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究正常使用。具體地，所述細胞復(fù)活劑，按照體積百分比計，由以下成分組成異丙醇32-38% ；
一縮二甘油32-37% ；
丙三醇7-11%;
水楊酸-羥基苯甲酸7-11% ；
乙酸7-11%;
苯酚1-3% ；
d-芋烯(d-limonene)O. 25-0. 45% ；
Y-松油烯(Terpinene)O. 18-0. 38% ；
癸醛(Decanal)O. 07-0. 27% ；
辛醛(Octanal)O. 18-0. 38% ；
芳棒醇(Linalool)O. 25-0. 45% ；
檸檬醛O. 31-0. 51% ；
羊毛脂3. 07-4. 07%。其中，所述異丙醇的分子式為C3H8O,分子量為60. 07。在所述組織細胞復(fù)合劑中，所述異丙醇優(yōu)選為采用質(zhì)量濃度為87%的異丙醇。所述一縮二甘油為高純的一縮二甘油。所述丙三醇，即甘油,其化學(xué)式為C3H8O3，分子量為92. 09。所述水楊酸-輕基苯甲酸(2-Hydroxybenzoicacid;Keralyt; Occlusal;Verrugon),其分子式為C7H603，結(jié)構(gòu)式為C6H4 (OH) (COOH)，分子量為138. 12，CAS號為69-72-7，EINECS [I]，比重為 I. 443，熔點為 156。。 159。。。所述乙酸，即冰醋酸，分子式為C2H4O2 (常簡寫為HAc)或CH3COOH,其分子量60· 0，CAS 登錄號64-19-7, EINECS 登錄號200-580_7。
所述苯酚化學(xué)式為C6H5OH,又名石炭酸、羥基苯，分子量94. 11，EINECS登錄號203-632-7。所述檸檬醛(英文=Citral )，即“3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛”，化學(xué)式C1qH160。所述羊毛脂為濃度30%的羊毛脂，是指原料存在的濃度為30%的羊毛脂。本發(fā)明中還提供所述細胞復(fù)活劑的制備方法，具體包括以下步驟
根據(jù)上述配方，依次把各種液體放進容量瓶內(nèi)，把電磁棒放進液體中，在電磁爐上攪拌，直到全部混合均勻。其中，所述攪拌過程的時間一般為2小時左右。所述溶液經(jīng)過攪拌一段時間后，用肉眼確認液體全部混合均勻，即可得到所述細胞復(fù)活劑。本發(fā)明中還提供所述細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，將所述細胞復(fù)活劑用于復(fù)原組織蠟塊和生物芯片細胞，可實現(xiàn)組織蠟塊的軟化和生物芯片細胞的反膠聯(lián)、活性轉(zhuǎn)升，其具體包括以下步驟
將需要復(fù)原的組織蠟塊用細胞復(fù)活劑在37°C下浸潤2小時左右。在所述經(jīng)過復(fù)原軟化的組織蠟塊，在一 20攝氏度條件下冷凍約2小時，切片，染色，用顯微鏡觀察組織結(jié)構(gòu)。所述細胞復(fù)活劑能松解組織細胞的纖維組織，且溶解脂肪，使細胞間孔隙疏松，隨之各種軟化試劑更易滲透，而甘油的浸潤使蠟塊組織軟化更完全，更柔韌。本發(fā)明根據(jù)各種試劑的特性，合理配方、揚長避短，通過調(diào)整處理時間及適當(dāng)控制溫度，是可以做出高質(zhì)量的切片的。同樣，對新鮮標本由于處理不好造成的蠟塊組織皺縮、凹陷、變硬等情況，采用本發(fā)明所述的細胞復(fù)活劑也能使蠟塊組織回復(fù)柔軟。所述細胞復(fù)活劑，按照體積百分比計，最佳由以下成分組成
87% 異丙醇34. 57% ；
一縮二甘油33. 87% ；
丙三醇8. 64% ；
水楊酸8. 64% ；
乙酸8. 64% ；
苯酚I. 73% ；
d-芋烯O. 35% ；
Y-松油烯O. 28% ；
癸醛O. 17% ；
辛醛O. 28% ；
芳樟醇O. 35% ；
檸檬醛O. 41% ；
羊毛脂(30%)2.07%。經(jīng)過多次試驗和發(fā)明人的研究調(diào)配發(fā)現(xiàn)，采用上述組分制成的細胞復(fù)活劑處理組織細胞，能達到最好的使細胞復(fù)活的效果。以下通過具體的實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明
實施例I
取87%異丙醇1000ml，一縮二甘油980ml，丙三醇250ml，水楊酸250 ml，乙酸250 ml,苯酹50 ml, d-芋烯10 ml, Y-松油烯8 ml,癸醒5 ml,辛醒8 ml,芳樟醇10 ml,朽1檬醒12 ml，羊毛脂(30%)60 ml，按所取先后順序?qū)⒏鹘M分加入到容量瓶中，把電磁棒放進液體中，在電磁爐上攪拌2小時，直到全部溶解后即可得到本產(chǎn)品。取60塊15年以上存檔的組織蠟塊，包括脾臟、皮膚黑色素瘤和含血豐富的急性膽囊炎組織蠟塊，使用實施例I所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)。處理后組織切片完整，組織化學(xué)和原位雜交試驗結(jié)果與新鮮組織相同。取200個12年以上陳舊的組織蠟塊，包括纖維成分含量高的子宮肌瘤，子宮勁和皮膚等組織，使用實施例I所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)，處理后的切片組織結(jié)構(gòu)完整，染色鮮艷清晰。實施例2
取87%異丙醇640ml，一縮二甘油701. 8ml，丙三醇130ml，水楊酸-羥基苯甲酸220ml，乙酸130ml,苯酌· 60ml, d-芋烯5ml, Y -松油烯7. 6ml,癸醒I. 4 ml,辛醒7. 6 ml,芳樟醇9ml，檸檬醛6.2 ml,羊毛脂(30% ) 81. 4ml，按所取先后順序?qū)⒏鹘M分加入到容量瓶中，把電磁棒放進液體中，在電磁爐上攪拌2小時，直到全部溶解后即可得到本產(chǎn)品。取20塊10年以上存檔的組織蠟塊，包括脾臟、皮膚黑色素瘤和含血豐富的急性膽囊炎組織蠟塊，使用實施例2所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)。處理后組織切片完整，組織化學(xué)和原位雜交試驗結(jié)果與新鮮組織相同。取30個10年以上陳舊的組織蠟塊，包括纖維成分含量高的子宮肌瘤，子宮勁和皮膚等組織，使用實施例2所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)，處理后的切片組織結(jié)構(gòu)完整，染色鮮艷清晰。實施例3
取87%異丙醇721. 8ml，一縮二甘油620ml，丙三醇210ml，水楊酸-羥基苯甲酸120ml，乙酸210 ml,苯酌· 20ml, d-芋烯9 ml, Y -松油烯3. 6 ml,癸醒5. 4 ml,辛醒3. 6 ml,芳樟醇5 ml，檸檬醛10.2 ml，羊毛脂(30%) 61. 4 ml，按所取先后順序?qū)⒏鹘M分加入到容量瓶 中,把電磁棒放進液體中,在電磁爐上攪拌2小時，直到全部溶解后即可得到本產(chǎn)品。取20塊10年以上存檔的組織蠟塊，包括脾臟、皮膚黑色素瘤和含血豐富的急性膽囊炎組織蠟塊，使用實施例3所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)。處理后組織切片完整，組織化學(xué)和原位雜交試驗結(jié)果與新鮮組織相同。取30個10年以上陳舊的組織蠟塊，包括纖維成分含量高的子宮肌瘤，子宮勁和皮膚等組織，使用實施例4所述的細胞復(fù)活劑在37°C條件下浸潤2小時，而后對軟化處理過的蠟塊樣品在_20°C條件下冷凍2小時，對樣品進行切片，HE染色，顯微鏡下觀察處理后組織結(jié)構(gòu)，處理后的切片組織結(jié)構(gòu)完整，染色鮮艷清晰。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種細胞復(fù)活劑，其特征在于，按體積百分比組成為 異丙醇32-38% ； 一縮二甘油32-37% ； 丙三醇7-11%; 水楊酸-羥基苯甲酸7-11% ； 乙酸7-11%; 苯酚1-3% ； d-芋烯O. 25-0. 45% ； Y-松油烯O. 18-0. 38% ； 癸醛O. 07-0. 27% ； 辛醛O. 18-0. 38% ； 芳樟醇O. 25-0. 45% ； 檸檬醛O. 31-0. 51% ； 羊毛脂3. 07-4. 07%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的細胞復(fù)活劑，其特征在于，所述異丙醇為質(zhì)量濃度為87%的異丙醇；所述羊毛脂為濃度為30%的羊毛脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的細胞復(fù)活劑，其特征在于，按體積百分比組成為 87% 異丙醇34. 57% ； 一縮二甘油33. 87% ； 丙三醇8. 64% ； 水楊酸8. 64% ； 乙酸8. 64% ； 苯酚I. 73% ； d-芋烯O. 35% ； Y-松油烯O. 28% ； 癸醛O. 17% ； 辛醛O. 28% ； 芳樟醇O. 35% ； 檸檬醛O. 41% ； 羊毛脂2.07%。
4.一種如權(quán)利要求1-3任一項所述的細胞復(fù)活劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 根據(jù)上述配方，依次把各種液體放進容量瓶內(nèi)，把電磁棒放進液體中，在電磁爐上攪拌，直到全部混合均勻。
5.一種如權(quán)利要求1-3任一項所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其特征在于，將所述細胞復(fù)活劑用于復(fù)原組織蠟塊和生物芯片細胞。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其特征在于，具體包括以下步驟 將需要復(fù)原的組織蠟塊或生物芯片用細胞復(fù)活劑在37°C下浸潤2小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細胞復(fù)活劑的應(yīng)用，其特征在于，還包括以下步驟所述經(jīng)過復(fù)原的組織蠟塊或生物芯片在一 20攝氏度條 件下冷凍約2小時。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種細胞復(fù)活劑及其制備方法和應(yīng)用，該復(fù)活劑的體積百分比組成為異丙醇32-38%；一縮二甘油32-37%；丙三醇7-11%；水楊酸-羥基苯甲酸7-11%；乙酸7-11%；苯酚1-3%；d-芋烯0.25-0.45%；γ-松油烯0.18-0.38%；癸醛0.07-0.27%；辛醛0.18-0.38%；芳樟醇0.25-0.45%；檸檬醛0.31-0.51%；羊毛脂3.07-4.07%。本發(fā)明涉及組織芯片制備領(lǐng)域，用于病理組織蠟塊的軟化和生物芯片細胞的反膠聯(lián)、活性轉(zhuǎn)升，具有不損害組織結(jié)構(gòu)和染色效果，并使處理過的標本或芯片達到新鮮蠟塊組織柔軟程度的優(yōu)點。
文檔編號G01N1/28GK102759470SQ20121026723
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日
發(fā)明者王虎 申請人:王虎