專利名稱：多相微流控免疫印跡芯片及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種芯片，尤其涉及一種多相微流控免疫印跡芯片及其制備方法和用途，屬于生物技術(shù)和組織工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
微流控(Microfluidics)是一種利用微米級別的小型管道、結(jié)構(gòu)對微升量級的微量流體進(jìn)行精細(xì)控制的分析技術(shù)，相應(yīng)的技術(shù)載體即微流控芯片。它以微電子工藝衍生出來的軟蝕刻技術(shù)為依托，通過在芯片上集成微通道、微反應(yīng)室等微小元件來構(gòu)建微流路系統(tǒng)，加載生物樣品或化學(xué)反應(yīng)液，以壓力泵或電滲流作為動力形成微流路，從而在芯片上進(jìn)行一種或多種精細(xì)的操作或反應(yīng)，達(dá)到生物檢測、化學(xué)合成或細(xì)胞生長等多種目的。免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting),是 Towbin 等人于1979年發(fā)明的一種借助特異性抗體鑒定抗原信息的有效方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種免疫生化技術(shù)。將含有目標(biāo)蛋白(抗原)的樣品首先用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)等分離后，然后通過電流引導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)，原位轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜，或聚偏氟乙烯膜或其它膜的表面，然后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行特異性檢測。例如，將經(jīng)SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)帶轉(zhuǎn)移到膜上后，膜用封閉液處理，然后與第一抗體反應(yīng)，膜經(jīng)漂洗后再與酶標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的二抗，即可顯示出目標(biāo)蛋白的位置。現(xiàn)有的免疫印跡存在的問題是:(I) 一次實(shí)驗只能檢測生物樣品中一種蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。不能滿足現(xiàn)在生物學(xué)研究中需要同時對細(xì)胞或組織中多種蛋白進(jìn)行檢測的目的。(2) —次免疫印跡實(shí)驗需要的抗體溶液較多(幾百微升至幾毫升)，而抗體價格昂貴，使免疫印跡實(shí)驗成本較高。為了讓一次實(shí)驗?zāi)軌驒z測多種蛋白，現(xiàn)有的技術(shù)有多色熒光素標(biāo)記二抗法、多色量子點(diǎn)標(biāo)記二抗法(Bakalova.R.；Zhelev, Z.；0hba, H.；Baba Y J.Am.Chem.Soc.2005, 27,9328-9329.)，表面增強(qiáng)拉曼免疫印跡法(Han.X.X.；Jia, H.Y ；ffang, Y.F.；Lu, Z.C.；ffang,C.X.；Xu, ff.Q.；Zhao, B.;0zaki，Y.Anal.Chem.2008，80，2799-2804.)。但是，多色熒光素標(biāo)記和多色量子點(diǎn)標(biāo)記法能檢測的蛋白數(shù)目受到限制，因為不同標(biāo)記的物質(zhì)(熒光素或量子點(diǎn))的激發(fā)光和發(fā)射光的波長區(qū)間會有重疊，現(xiàn)在報道的蛋白檢測數(shù)目大多在5種以下。表面增強(qiáng)拉曼免疫印跡法的缺陷在于，在檢測多種蛋白質(zhì)的混合物時，光譜譜圖復(fù)雜而難以辨別?，F(xiàn)在也有一些報道利用微流控技術(shù)來檢測電泳形成的多種蛋白，例如將整個電泳，轉(zhuǎn)移的過程集中到一個微小的通道中(He，M.，Herr, A.E.，Nat.Prot.2010,5,1844-1856)，但是這種技術(shù)的問題是不能提供目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量的信息，而且讀出手段比較復(fù)雜，難以為一般的生物實(shí)驗室采用；又如，我們之前發(fā)明了一種系統(tǒng)，利用平行的微流通道來引入抗體檢測目標(biāo)蛋白(Pan, ff.Y.；Chen, ff.Jiang, X.Y.；Anal.Chem.2010,82,3974-3976)，可以解決上面的問題，但是這種方法一次只能處理一個樣品，顯然不能滿足生物學(xué)實(shí)驗中需要同時處理很多樣品的需求。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是，針對目前微流控蛋白檢測一次只能處理一個樣品的不足，以及生物學(xué)實(shí)驗中要同時處理大量樣品的需求，發(fā)明設(shè)計一種多相微流控免疫印跡芯片，以期達(dá)到能夠通過微流控技術(shù)高通量地進(jìn)行蛋白檢測。針對上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一方面，本發(fā)明提供一種多相微流控免疫印跡芯片，包括固定有分離的蛋白質(zhì)條帶的基底和與其疊置的片體，所述片體與基底相疊置的表面上設(shè)有至少一個微流凹槽，所述微流凹槽與所述基底共同形成供流體流通的至少一個微流通道，所述片體的另一個表面上在對應(yīng)于所述微流通道的兩個端口的位置處分別設(shè)有穿孔以形成所述微流通道的通道入口和通道出口。優(yōu)選地，所述至少一個微流凹槽包括多個平行分布的第一凹槽，所述多個平行分布的第一凹槽的端部通過第二凹槽依次連接，所述多個平行分布的第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶相垂直。優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹槽與第二凹槽相垂直。優(yōu)選地,所述流體包括抗體。上述多個第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶相垂直，所述多個第一凹槽平行分布，并且第一凹槽與第二凹槽相垂直，可保證測量結(jié)果的精確和準(zhǔn)確性，使結(jié)果更加清晰。優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹槽為5 15個。優(yōu)選地，所述基底由聚偏二氟乙烯膜、聚偏二氟乙烯電紡絲薄膜、表面經(jīng)化學(xué)修飾的鍍金玻璃片、聚苯胺薄膜或聚吡咯薄膜制成，更優(yōu)選地，所述基底由聚偏二氟乙烯膜制成。優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶為從聚丙烯酰胺凝膠中轉(zhuǎn)移到基底上的蛋白質(zhì)條帶，優(yōu)選地，所述轉(zhuǎn)移為電轉(zhuǎn)移，，更優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到由聚偏二氟乙烯膜制成的基底上。優(yōu)選地，所述片體為高分子材料經(jīng)熱塑或熱固化而成的片體，優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯制成，更優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷(PDMS)制成。優(yōu)選地，本發(fā)明所述片體上的微流凹槽的寬度為50-200 iim，深度為50-200 y m，長度為 10cm_50cm。另一方面，本發(fā)明還提供一種多相微流控免疫印跡芯片的制備方法，包括以下步驟:步驟1:制備固定有分尚的蛋白質(zhì)條帶的基底；步驟2:制備設(shè)有至少一個微流凹槽的片體，優(yōu)選地，所述微流凹槽包括多個平行分布的第一凹槽，所述多個平行分布的第一凹槽的端部通過第二凹槽依次連接，所述多個平行分布的第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶相垂直，優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹
槽與第二凹槽相垂直；步驟3:組裝步驟I制備的基底與步驟2制備的片體，即得。
優(yōu)選地，在步驟I中，所述基底由聚偏二氟乙烯膜、聚偏二氟乙烯電紡絲薄膜、表面經(jīng)化學(xué)修飾的鍍金玻璃片、聚苯胺薄膜或聚吡咯薄膜制成，優(yōu)選地，所述基底由聚偏二氟乙烯膜制成。優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶為從聚丙烯酰胺凝膠中轉(zhuǎn)移到基底上的蛋白質(zhì)條帶，優(yōu)選地，所述轉(zhuǎn)移為電轉(zhuǎn)移，更優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到由聚偏二氟乙烯膜制成的基底上。優(yōu)選地，在步驟2中，所述片體為高分子材料經(jīng)熱塑或熱固化而成的片體，優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯制成，更優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷制成。優(yōu)選地，所述片體上的微流凹槽的寬度為50-200 iim，深度為50-200 y m，長度為10cm-50cmo優(yōu)選地，在步驟2中，當(dāng)所述片體由聚二甲基硅氧烷制成時，具體通過包括以下步驟的方法進(jìn)行:將聚二甲基硅氧烷與固化劑混合并倒入具有微流管道的模板，再將其烘干后，將固化的聚二甲基硅氧烷從模板上切下，在預(yù)設(shè)計的進(jìn)樣口和出樣口處打孔，即得。優(yōu)選地，在步驟2中，所述聚二甲基硅氧烷與固化劑按18: 1-24: I的質(zhì)量比混合；優(yōu)選地，于80°C下烘烤10-50分鐘，更優(yōu)選地，所述聚二甲基硅氧烷與固化劑按20: I的質(zhì)量比混合，于80°C下烘烤25分鐘，最優(yōu)選地，所述模板為硅片。優(yōu)選地，在步驟3中，具體通過包括以下步驟的方法進(jìn)行:步驟3.1:將固定按分子量分離的蛋白條帶的聚基底烘干，所述烘干條件優(yōu)選為37°C,60 分鐘；步驟3.2:將設(shè)有至少一個微流凹槽的片體蓋在步驟3.1得到的基底上，優(yōu)選地，將設(shè)有至少一個微流凹槽的片體按多個平行分布的第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶垂直的方向蓋在步驟3.1得到的基底上，輕按壓緊，即得。再一方面，本發(fā)明還提供一種上述方法制得的多相微流控免疫印跡芯片在蛋白質(zhì)檢測中的應(yīng)用，或在制備蛋白質(zhì)檢測的試劑盒中的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)檢測為優(yōu)化免疫反應(yīng)抗體濃度。另一方面，本發(fā)明還提供一種用于檢測蛋白質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包括上述所述的多相微流控免疫印跡芯片或上述所述方法制得的多相微流控免疫印跡芯片。本發(fā)明所提供的微流控免疫印跡芯片的實(shí)用范圍包括同時檢測細(xì)胞中的多種蛋白，檢測蛋白質(zhì)的分子量標(biāo)準(zhǔn)以及優(yōu)化免疫反應(yīng)中抗體濃度等，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的微流控免疫印跡芯片及相應(yīng)的檢測方法具有明顯的優(yōu)勢，能夠明顯地節(jié)約時間，傳統(tǒng)的免疫檢測系統(tǒng)檢測時間為5h至整夜，而本發(fā)明的芯片的檢測時間小于等于Ih ;檢測需要的樣品量少，傳統(tǒng)的免疫檢測系統(tǒng)檢測十種樣品需要的檢測樣品為100 200ii g，而本發(fā)明的芯片檢測十種樣品需要的檢測樣品量為5 IOy g ;耗用抗體少，傳統(tǒng)的免疫檢測系統(tǒng)檢測一種蛋白耗用的抗體溶液體積為5-10mL，而本發(fā)明的芯片檢測一種蛋白耗用的抗體溶液體積為20 40ii L，降低成本，提高印跡分析的效果與質(zhì)量，使傳統(tǒng)耗時耗力的免疫印跡分析進(jìn)入高通量自動化分析階段。


以下，結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中:圖1為本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片的示意圖和相應(yīng)的實(shí)物圖，圖中A為固定有分離的蛋白條帶的基底的示意圖，圖中B為固定有分離的蛋白條帶的基底的實(shí)物圖；圖中C為多相微流控免疫印跡芯片的示意圖，圖中D為多相微流控免疫印跡芯片的實(shí)物圖；圖中E為多相微流控免疫印跡芯片檢測蛋白后的試驗結(jié)果示意圖；圖中F為多相微流控免疫印跡芯片檢測蛋白后的試驗結(jié)果，其中I為基底，101為基底上的蛋白標(biāo)記，102為基底上的分離的蛋白條帶；2為片體，201為形成通道入口的穿孔，202為形成通道出口的穿孔，3為微流凹槽，301為第一凹槽，302為第二凹槽；圖2為本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片檢測蛋白后的試驗結(jié)果的后的局部放大圖，圖中1，1' '2,2' ；3,3/ ；4,4/ ；5,5/ ；6,6/ ;7，7'均表示多相微流控免疫印跡芯片中對稱位置處的檢測結(jié)果，箭頭所示為相應(yīng)的微流通道所加入的抗體，所述抗體分別為抗-肌動蛋白抗體、抗膜聯(lián)蛋白抗體和抗Pan-14-3-3抗體；圖3為本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片用不同濃度蛋白條帶和不同濃度的抗體檢測蛋白的試驗結(jié)果，圖中3-1表示四個NIH 3T3細(xì)胞的裂解全蛋白條帶加不同濃度的抗體檢測的試驗結(jié)果，圖3-1中I表示分離的蛋白條帶為濃度為IOii g的NIH 3T3細(xì)胞的裂解全蛋白的檢測結(jié)果，2表示分離的蛋白條帶為濃度為5 ii g的NIH 3T3細(xì)胞的裂解全蛋白的檢測結(jié)果，3表示分離的蛋白條帶為濃度為2.g的NIH 3T3細(xì)胞的裂解全蛋白的檢測結(jié)果，4表示分離的蛋白條帶為濃度為1.25iig的NIH 3T3細(xì)胞的裂解全蛋白的檢測結(jié)果；圖中3-2表示圖3-1中I加不同濃度的抗體的檢測結(jié)果變化，圖中3-3表示圖3-1中1，2，3，4中的第三點(diǎn)的檢測結(jié)果變化；圖4為本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片與傳統(tǒng)的免疫檢測方法檢測蛋白相比較的試驗結(jié)果，圖中A表示本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片，B表示圖A的局部放大圖，C表示普通的免疫檢測方法的孵育盒，D表示本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片與傳統(tǒng)的免疫檢測方法檢測蛋白結(jié)果的比較，其中Mic-WB表示本發(fā)明的多相微流控免疫印跡芯片蛋白檢測方法，傳統(tǒng)-WB表示傳統(tǒng)的免疫檢測方法，圖中箭頭所示為蛋白條帶；圖5為本發(fā)明所述的多相微流控免疫印跡芯片分離分子量相近蛋白的結(jié)果，圖中1-7分別表示多相微流控免疫印跡芯片中添加不同的抗體的檢測結(jié)果。
具體實(shí)施例方式在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。下面結(jié)合具體的制備實(shí)施例和應(yīng)用實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。這些實(shí)施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中所用的抗P -肌動蛋白抗體(抗P -actin抗體)、抗膜聯(lián)蛋白抗體(抗Annexin抗體),抗Pan-14-3-3抗體購自SantaCruz公司。實(shí)施例1本實(shí)施例說明本發(fā)明的多相微流控免疫印跡芯片的制備方法1.微流控芯片模板的制備制備的主要過程為光刻，即利用光刻膠在紫外線照射下可改變性質(zhì)的特點(diǎn)制作與設(shè)計好的掩膜上的圖形完全一致的光刻膠硅片模板。具體的制備方法可參見Y Xia,
G.Whitesides, Annual Review of Materials Science 1998，28，15。2.設(shè)有多個微流凹槽的片體的制備制備方法為軟刻蝕技術(shù)，制備材料為聚二甲基硅氧烷(PDMS，poly-dimethylsi1xane),其在普通的狀態(tài)下是透明而粘稠的液體，經(jīng)與固化劑(184silicone elastomer curing agent,購自美國道康寧公司)反應(yīng)并加熱后可固化。利用PDMS可以將硅片模板上的突起圖形轉(zhuǎn)換為對應(yīng)的管道圖形，從而得到設(shè)有多個微流凹槽的片體。在成型溫度保持為80°C的情況下，本發(fā)明對制備設(shè)有多個PDMS微流凹槽的片體的原料質(zhì)量配比和高溫成型時間進(jìn)行了優(yōu)化，具體條件表I所示。表I聚二甲基硅氧烷和固化劑的配比不同的各組物質(zhì)
權(quán)利要求
1.一種多相微流控免疫印跡芯片，包括固定有分離的蛋白質(zhì)條帶的基底和與其疊置的片體，所述片體的與基底相疊置的表面上設(shè)有至少一個微流凹槽，所述至少一個微流凹槽與所述基底共同形成供流體流通的至少一個微流通道，所述片體的另一個表面上在對應(yīng)于所述微流通道的兩個端口的位置處分別設(shè)有穿孔以形成所述微流通道的通道入口和通道出口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多相微流控免疫印跡芯片，其特征在于，所述微流凹槽包括多個平行分布的第一凹槽，所述多個平行分布的第一凹槽的端部通過第二凹槽依次連接，所述多個平行分布的第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶相垂直，優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹槽與第二凹槽相垂直，更優(yōu)選地，所述流體包括抗體，更優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹槽為5 15個。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多相微流控免疫印跡芯片，其特征在于，所述基底由聚偏二氟乙烯膜、聚偏二氟乙烯電紡絲薄膜、表面經(jīng)化學(xué)修飾的鍍金玻璃片、聚苯胺薄膜或聚吡咯薄膜制成，優(yōu)選地，所述基底由聚偏二氟乙烯膜制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片，其特征在于，所述蛋白質(zhì)條帶為從聚丙烯酰胺凝膠中轉(zhuǎn)移到基底上的蛋白質(zhì)條帶，優(yōu)選地，所述轉(zhuǎn)移為電轉(zhuǎn)移，更優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到由聚偏二氟乙烯膜制成的基底上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片，其特征在于，所述片體為高分子材料經(jīng)熱塑或熱固化而成的片體，優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯制成，更優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷制成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片，其特征在于，所述片體上的微流凹槽的寬度為50-200 u m,深度為50-200 u m,長度為10cm-50cm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片的制備方法，包括以下步驟:` 步驟1:制備固定有分離的蛋白質(zhì)條帶的基底； 步驟2:制備設(shè)有至少一個微流凹槽的片體，優(yōu)選地，所述微流凹槽包括多個平行分布的第一凹槽，所述多個平行分布的第一凹槽的端部通過第二凹槽依次連接，所述多個平行分布的第一凹槽與基底上的蛋白質(zhì)條帶相垂直，優(yōu)選地，所述多個平行分布的第一凹槽與第二凹槽相垂直； 步驟3:組裝步驟I制備的基底與步驟2制備的片體，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的相微流控免疫印跡芯片的制備方法，其特征在于，在步驟I中，所述基底為聚偏二氟乙烯膜、聚偏二氟乙烯電紡絲薄膜、表面經(jīng)化學(xué)修飾的鍍金玻璃片、聚苯胺薄膜或聚吡咯薄膜的基底，優(yōu)選地，所述基底為聚偏二氟乙烯膜的基底，優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶為從聚丙烯酰胺凝膠中轉(zhuǎn)移到基底上的蛋白質(zhì)條帶，優(yōu)選地，所述轉(zhuǎn)移為電轉(zhuǎn)移，更優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)條帶轉(zhuǎn)移到由聚偏二氟乙烯膜制成的基底上。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的相微流控免疫印跡芯片的制備方法，其特征在于，在步驟2中，所述片體為高分子材料經(jīng)熱塑或熱固化而成的片體，優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷或聚甲基丙烯酸甲酯制成，更優(yōu)選地，所述片體由聚二甲基硅氧烷制成，優(yōu)選地，所述片體上的微流凹槽的寬度為50-200 u m,深度為50-200 u m,長度為10cm-50cm。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的相微流控免疫印跡芯片的制備方法，其特征在于，在步驟2中，當(dāng)所述片體由聚二甲基硅氧烷制成時，具體通過包括以下步驟的方法進(jìn)行:將聚二甲基硅氧烷與固化劑混合并倒入具有微流管道的模板，再將其烘干后，將固化的聚二甲基硅氧烷從模板上切下，在預(yù)設(shè)計的進(jìn)樣口和出樣口處打孔，即得； 優(yōu)選地，所述聚二甲基硅氧烷與固化劑按18: 1-24: I的質(zhì)量比混合；于80°C下烘烤10-50分鐘，更優(yōu)選地，所述聚二甲基硅氧烷與固化劑按20: I的質(zhì)量比混合，于80°C下烘烤25分鐘，最優(yōu)選地，所述模板為硅片。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片的制備方法，其特征在于，在步驟3中，具體通過包括以下步驟的方法進(jìn)行: 步驟3.1:將固定按分子量分離的蛋白條帶的基底烘干，所述烘干條件為37°C，60分鐘； 步驟3.2:將設(shè)有至少一個微流凹槽的片體蓋在步驟3.1得到的基底上，優(yōu)選地，將設(shè)有至少一個微流凹槽的片體按多個平行分布的第一凹槽方向與基底上的蛋白質(zhì)條帶垂直的方向蓋在步驟3.1得到的基底上，輕按壓緊，即得。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片或權(quán)利要求7至11中任一項所述方法制得的多相微流控免疫印跡芯片在蛋白質(zhì)檢測中的應(yīng)用或在用于制備蛋白質(zhì)檢測的試劑盒中的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述蛋白質(zhì)檢測為優(yōu)化免疫反應(yīng)抗體濃度。
13.一種用于檢測蛋白質(zhì)的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1至6中任一項所述的多相微流控免疫印跡芯片或權(quán)利要求7至11中任一項所述方法制得的多相微流控免疫印跡芯片。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多相微流控免疫印跡芯片及其制備方法和用途，所述芯片包括固定有分離的蛋白質(zhì)條帶的基底和片體，所述片體的一個表面上設(shè)有至少一個微流凹槽，所述微流凹槽與所述聚合物膜共同形成供抗體流通的至少一個微流通道，所述片體的另一個表面上在對應(yīng)于所述微流通道的兩個端口的位置處分別設(shè)有穿孔以形成所述微流通道的通道入口和通道出口；所述芯片的制備方法包括以下步驟制備固定有分離的蛋白質(zhì)條帶的基底；制備設(shè)有至少一個微流凹槽的片體；組裝制備的基底和片體；用途為其在蛋白質(zhì)檢測或在用于制備蛋白質(zhì)檢測的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明單次免疫印跡反應(yīng)可確定多個目標(biāo)蛋白質(zhì)的存在，檢測靈敏度高，操作簡單，提高檢測效率，降低成本。
文檔編號G01N33/543GK103185802SQ20111045686
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月30日
發(fā)明者蔣興宇, 何沙, 張翼 申請人:國家納米科學(xué)中心